劉幫慧

(荊州市中心醫(yī)院, 湖北 荊州 434022)

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地黃飲子對(duì)急性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的影響*

劉幫慧

(荊州市中心醫(yī)院, 湖北 荊州 434022)

目的： 探討地黃飲子對(duì)急性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力影響。方法：選取Wistar大鼠72只隨機(jī)均分為實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、模型組和正常對(duì)照組，前3組大鼠復(fù)制急性腦缺血模型，正常對(duì)照組大鼠手術(shù)但不給予腦缺血；實(shí)驗(yàn)1組造模后每日灌服地黃飲子湯36 g/kg，實(shí)驗(yàn)2組造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，模型組和正常對(duì)照組造模后1次/d鹽水灌胃，各組大鼠連續(xù)灌胃3周；所有大鼠進(jìn)行Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)記錄逃避潛伏期測(cè)試學(xué)習(xí)能力，跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)記錄逃避潛伏期評(píng)價(jià)記憶能力，并用電鏡圖像分析系統(tǒng)計(jì)算4組大鼠腦梗死面積。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組大鼠的定位航行實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組大鼠的跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)1組腦梗死面積明顯小于模型組和實(shí)驗(yàn)2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：地黃飲子可以提高腦缺血再灌注大鼠的學(xué)習(xí)能力和記憶能力，減少缺血對(duì)腦組織神經(jīng)元的損傷。

腦缺血再灌注； 大鼠； 學(xué)習(xí)記憶能力

缺血性腦血管病是當(dāng)今危害人類健康的最常見(jiàn)的疾病，占我國(guó)全部腦卒中患者的75%，目前已經(jīng)成為我國(guó)心腦血管疾病的第一大死亡原因[1-2]。急性腦缺血使大腦神經(jīng)受損，神經(jīng)功能缺失，神經(jīng)生長(zhǎng)因子受抑制，嚴(yán)重者可導(dǎo)致殘疾和死亡[3-4]。地黃飲子具有驅(qū)毒化瘀、滋腎陰、補(bǔ)腎陽(yáng)的功效，有促進(jìn)腦神經(jīng)功能恢復(fù)的功效,對(duì)治療缺血性腦血管病、血管性癡呆、腦萎縮、阿爾茨海默病等有一定療效[5]。本文通過(guò)建立腦缺血大鼠模型，研究地黃飲子對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦梗死面積的影響，為地黃飲子治療缺血性腦血管病的臨床研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組

健康清潔級(jí)Wistar大鼠72只，雌雄不限，體重250～280 g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK-LN2014-0009。72只大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、正常組和模型組，各18只。前3組大鼠復(fù)制急性腦缺血模型，正常對(duì)照組大鼠手術(shù)但不給予腦缺血。實(shí)驗(yàn)1組大鼠造模后每日灌服地黃飲子湯36 g/kg，實(shí)驗(yàn)2組在造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，模型組在造模后、正常對(duì)照組大鼠在手術(shù)后給予鹽水灌胃1 次/d，各組大鼠均每天灌胃1次，連續(xù)3周。

1.2 急性腦缺血大鼠模型

用10%水合氯醛麻醉大鼠，固定后頸部正中切開(kāi)，分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈并用動(dòng)脈夾鉗夾30 min，用溫鹽水紗布保護(hù)切口創(chuàng)面，松開(kāi)動(dòng)脈夾30 min后，再次用動(dòng)脈夾鉗夾30 min，復(fù)制大鼠急性腦缺血模型。

1.3 藥物與儀器

按照《黃帝素問(wèn)宣明論方》配制地黃飲子：熟地黃12 g，巴戟天15 g,白茯苓12 g,山茱萸15 g,石斛15 g,菖蒲12 g,炮附子15 g,麥門(mén)冬15 g,肉蓯蓉15 g,五味子10 g,官桂10 g,遠(yuǎn)志10 g；用12倍量和10倍量水煎煮2次，每次1 h，將兩次藥液混合，用旋轉(zhuǎn)儀蒸發(fā)濃縮，干燥密封備用。尼莫地平(天津中央藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)20130067,20 mg/片),注射用水溶解。中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)記錄儀、YLS-3T跳臺(tái)試錄儀和OLYMPUS光學(xué)顯微鏡。

1.4 檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力

各組大鼠治療或(和)喂養(yǎng)3周后，進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。定位航行實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練場(chǎng)地為圓形水池，分為4個(gè)象限，平臺(tái)置于第Ⅲ象限水面下，實(shí)驗(yàn)時(shí)水溫保持在24 ℃；在實(shí)驗(yàn)前1天將大鼠放入水池中適應(yīng)環(huán)境2 min；第2天開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，將每只大鼠分別從Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限面向水池壁放入水池，水池上端的攝影機(jī)記錄大鼠的游泳軌跡及站上平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)，撤去平臺(tái)，再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)1次。同時(shí)記錄大鼠尋找平臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)連續(xù)訓(xùn)練4 d。4 d后進(jìn)行跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前1天將大鼠放在平臺(tái)上適應(yīng)環(huán)境5 min后通電，觀察大鼠雙足同時(shí)跳上絕緣臺(tái)，每只大鼠訓(xùn)練3 min；第2天開(kāi)始測(cè)試每只大鼠在3 min內(nèi)跳上絕緣臺(tái)的次數(shù)，并算出跳臺(tái)時(shí)間(潛伏期)，連續(xù)訓(xùn)練4 d。

1.5 測(cè)量大鼠腦梗死面積

定位航行實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)后，腹腔麻醉斷頭取腦，鹽水沖洗大腦并吸干，將大腦冠狀切片，加入1% 2.3.5-三苯基四氮唑的磷酸緩沖液中，避光30 min，間隔6 min轉(zhuǎn)動(dòng)1次，把腦片放在電鏡圖像分析系統(tǒng)中，計(jì)算腦梗死面積，腦梗死=(白色的梗死面積/片子的總面積)×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 定位航行實(shí)驗(yàn)

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的定位航行實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組大鼠的定位航行實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示地黃飲子湯和尼莫地平可改善腦缺血大鼠學(xué)習(xí)能力。見(jiàn)表1。

2.2 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組大鼠的跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

Tab.1 The escape latency in positioning navigation experiment in each group

(1)與模型組比較，P<0.05；(2)與正常對(duì)照組比較，P<0.05

Tab.2 The step-down test latency in each group

2.3 腦梗死面積

實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組腦梗死面積明顯小于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)1組腦梗死面積明顯小于實(shí)驗(yàn)2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠腦梗死面積

Tab.3 Cerebral infarction area of rats in each group

(1)與模型組比較，P<0.05；(2)與實(shí)驗(yàn)2組比較，P<0.05

3 討論

近年來(lái)，缺血性腦血管病占腦血管病總數(shù)的80%，其發(fā)病率極高。中醫(yī)對(duì)缺血性腦血管病引起的中風(fēng)理論新學(xué)說(shuō)“毒損腦絡(luò)”，認(rèn)為毒邪損傷了腦絡(luò)導(dǎo)致中風(fēng)發(fā)作，絡(luò)脈破損或拘攣瘀閉，由氣血滲灌失常導(dǎo)致[6]。地黃飲子治療缺血性腦血管病實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，地黃飲子可以明顯提高學(xué)習(xí)能力和記憶能力，改善腦部的能量代謝，減少炎癥損傷等作用[7-9]。

本研究使大鼠腦部發(fā)生急性缺血狀態(tài)，通過(guò)分組治療，測(cè)試4組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的潛伏期時(shí)間，結(jié)果可見(jiàn)地黃飲子和尼莫地平的潛伏期均明顯縮短；通過(guò)腦梗死面積的比較得出，地黃飲子的療效明顯優(yōu)于尼莫地平。有研究發(fā)現(xiàn)，地黃飲子可以顯著提高腦組織中抗氧能力，氧化應(yīng)激的能力和學(xué)習(xí)功能，通過(guò)不同劑量的地黃飲子臨床研究得出，高劑量的地黃飲子明顯提高大鼠腦內(nèi)抗氧化酶的活性，減少細(xì)胞凋亡和氧化損傷，延緩大腦老化，保護(hù)腦細(xì)胞的功能[10-11]，這與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。地黃飲子能降低腦細(xì)胞的過(guò)氧化反應(yīng)，提高神經(jīng)細(xì)胞的神經(jīng)元超氧化物歧化酶SOD活性，提高機(jī)體清除過(guò)多的氧自由基能力，減少過(guò)氧化反應(yīng)造成的損傷，維持細(xì)胞正常功能，因此地黃飲子治療腦缺血損傷的主要保護(hù)機(jī)制是增加SOD活性，降低氧自由基含量，修復(fù)受損的腦細(xì)胞[12-13]。

綜上所述，腦缺血再灌注大鼠經(jīng)地黃飲子治療后，可以提高學(xué)習(xí)能力和記憶能力，減少腦組織神經(jīng)元受損，增加神經(jīng)細(xì)胞的抗氧化能力，為臨床上治療缺血性腦血管病提供理論依據(jù)。

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(2016-08-11收稿，2016-11-04修回)

中文編輯： 文箐潁； 英文編輯： 劉 華

The Effect of Rehmannia Yinzi on Learning and Memory Ability of Acute Cerebral Ischemia Rats

LIU Banghui

(JingzhouCentralHospitalofHubeiProvince,Jingzhou434022,Hubei,China)

Objective: To explore the effect of Rehmannia YinZi on learning and memory ability of acute cerebral ischemia rats. Methods: 72 Wistar rats were randomly divided into experimental group 1, experimental group 2, model group and normal control group. The acute cerebral ischemia model was established in the first 3 groups of rats while the normal control group did not received cerebral ischemia surgery. Experiment 1group received daily intragastric administration of Dihuangyinzi Decoction (36 g/kg) after modeling, experimental group 2 received daily intragastric administration of nimodipine (12.5 mg/kg) after modeling, and model group and normal control group received 1/d saline after modeling. All rats were administered orally for 3 consecutive weeks. All rats were subjected to Morris water maze navigation experiment to for memory capacity evaluation. Electron microscope image analysis system was adopted to calculate cerebral infarction area for the 4 groups of rats. Results: Compared with normal control group, the experimental latency of model group was significantly prolonged, and the difference was statistically significant (P<0.05). Compared with model group, the experimental latency in experimental group 1 and experimental 2 were significantly shortened, the difference was statistically significant (P<0.05). Compared with normal control group, the step-down test latency of rats in model group was significantly increased, and the difference was statistically significant (P<0.05). Compared with model group, the step-down test latency of experimental group 1 and experimental group 2 rats were significantly shorter, and the difference was statistically significant (P<0.05); The cerebral infarction area in experimental group1 was significantly smaller than the that of model group and experimental group 2, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: Rehmannia YinZi can improve learning and memory ability of cerebral ischemia reperfusion rats, and reduce the damage of brain neurons resulted from ischemia.

cerebral ischemia reperfusion; rats; learning and memory ability

時(shí)間：2016-11-15

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161115.1757.013.html

R286.1

A

1000-2707(2016)11-1297-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.11.013