戴木根 劉思宇 余璟璐 王永輝 葉斌

胃癌組織中EGFR、Her-2的表達及相關性分析

戴木根 劉思宇 余璟璐 王永輝 葉斌

胃癌是全世界范圍內(nèi)發(fā)病率第3位、病死率第2位的惡性腫瘤[1]，同時也位居我國惡性腫瘤病死率的前列，而傳統(tǒng)的手術、化療、放療及綜合治療等措施，病死率高，療效欠佳，不良反應大，因此，臨床迫切需要探索更有效的治療方法。分子靶向治療能夠針對腫瘤特定標志物，其治療靶點小，化療不良反應小，對延長腫瘤患者生存期療效較確定，為惡性腫瘤提供了個體化治療方案，已經(jīng)成為胃癌綜合治療的重點和熱點。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）以及人類表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2,Her-2）都是受體酪氨酸激酶家族HER/erbB成員，參與介導細胞分化、生存、遷移、侵襲、黏附、損傷修復等功能，和胃癌病理類型、淋巴結轉移、預后等密切相關，是胃癌分子靶向治療的重要靶點。本文旨在研究胃癌患者中EGFR、Her-2表達情況，分析其相關性和臨床意義，為臨床提供新的治療方向，現(xiàn)將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 收集2013年1月至2015年12月在本院行胃癌根治術的214例胃癌患者，術前均未放療及化療，收集術后病理標本及相應癌旁組織，病理標本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，組織學檢查確診為腺癌。其中男152例，女62例；年齡31～89歲，中位年齡61歲；病理類型：高分化腺癌11例（5.1%）、中分化腺癌（高-中分化腺癌、中分化腺癌）69例（32.3%）、低分化腺癌（低分化腺癌、黏液腺癌、印戒細胞癌）134例（62.6%）；TNM分期依據(jù)2013年第2版的《AJCC癌癥分期手冊》，其中Ⅰa期13例（6.1%）、Ⅰb期29例（13.5%）、Ⅱa期19例（8.9%）、Ⅱb期22例（10.3%）、Ⅲa期27例（12.6%）、Ⅲb期33例（15.4%）、Ⅲc期59例（27.6%）、Ⅳ期12例（5.6%）；HE組織切片檢查見脈管癌栓103例（48.1%），神經(jīng)侵犯58例（27.1%）。

1.2 試劑 鼠抗人單克隆抗體(ZM-0093，克隆號UMAB96)和兔抗人單克隆抗體（ZA-0023，克隆號EP3）均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 方法 采用免疫組織化學Envision二步法。首先石蠟切片，胃癌組織經(jīng)4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋后，蒸餾水充分沖洗后用PBS溶液浸泡5min；然后再用3%H2O2在室溫下孵育5～10min，用PBS溶液充分沖洗3次，每次2min，滴加一抗工作液，37℃孵育1～2h，用PBS溶液充分沖洗3次，每次2min，滴加試劑Envision通用型二抗50μl，室溫孵育20min，用PBS溶液沖洗3次，每次2min，顯示劑染色（DAB），自來水充分沖洗，蘇木素復染1～2min，水洗藍化、脫水、透明、封片、鏡檢。

1.4 結果判讀 EGFR：胃癌組織中細胞無著色或胃癌組織中著色癌細胞數(shù)占總細胞數(shù)＜10%為陰性。陽性著色一般顯色在胃癌細胞膜處，呈現(xiàn)棕色或棕褐色。著色細胞≥10%而細胞膜非環(huán)狀著色為（+）；10%～50%細胞膜輕/中度環(huán)狀著色為（++）；＞50%細胞膜環(huán)狀強著色為（+++）。Her-2：無反應為陰性；＜10%出現(xiàn)細胞膜著色為（+）；10%～30%著色呈棕黃色或棕褐色為（++）；＞30%強著色為（+++）。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件；計數(shù)資料以頻數(shù)和構成比表示，無序分類資料采用χ2檢驗，單向有序分類資料采用趨勢χ2檢驗，偏態(tài)資料采用秩和檢驗。EGFR與Her-2在胃癌中表達的相關性采用Spearman秩相關分析。

2 結果

2.1 EGFR和Her-2在胃癌中的表達及其相關性 胃癌組織中EGFR表達（+++）陽性率為36.5%，（++）陽性率為16.8%，（+）陽性率為22.4%，陰性率為24.3%；Her-2表達（+++）陽性率為17.3%，（++）陽性率為14.5%，（+）陽性率為32.2%，陰性率為36.0%；EGFR和Her-2兩者共同表達陽性率為61.7%（132/214）。但這些患者中，癌旁組織未見EGFR、Her-2的高表達。Spearman秩相關分析顯示EGFR與Her-2在胃癌組織中的表達呈正相關（r=0.416，P＜0.05），見表1。

表1 EGFR和Her-2在胃癌中的表達（例）

2.2 EGFR、Her-2蛋白表達與胃癌臨床病理因素的關系 EGFR的表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度神經(jīng)侵犯和脈管癌栓無相關（均P＞0.05），與淋巴結轉移和TNM分期相關（均P＜0.05）。Her-2的表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤直徑和TNM分期無相關（均P＞0.05），與分化程度、神經(jīng)侵犯、脈管癌栓和淋巴結轉移相關（均P＜0.05），見表2。

表2 EGFR和Her-2陽性表達與臨床病理因素的關系[例（%）]

3 討論

胃惡性腫瘤是一個多因素、多步驟作用的結果，在這個過程中其表達的許多蛋白及細胞因子間可能存在相互影響。Her/erbB家族信號通路參與了腫瘤細胞的增殖、分化、遷移、黏附、抗凋亡和細胞轉化[2-4]，EGFR、Her-2在Her/erbB家族的活化和信號傳導中起重要作用。EGFR通常位于細胞膜表面，促進細胞增殖，EGFR陽性表達在惡性腫瘤的演進中起重要作用，其與腫瘤細胞的腫瘤侵襲、增殖、血管生成、轉移及細胞凋亡的抑制都有關聯(lián)，它的過表達往往預示惡性腫瘤預后不良[5-6]。Her-2與EGFR結構相似，正常情況下Her-2處于非激活狀態(tài)，當Her-2受到某些致癌因素的作用后，因其結構或表達失控而被激活表達Her-2蛋白，從而使胃癌組織具有腫瘤轉化活性，可促使細胞間發(fā)生惡性轉化[7]。檢測胃癌組織中過度表達的EGFR、Her-2有助于判斷預后。

本研究結果顯示214例胃癌患者中EGFR、Her-2的表達率較高，而在胃癌旁組織中均未見陽性表達。結果提示EGFR、Her-2表達是胃黏膜細胞發(fā)生癌變的重要標志，可作為胃癌診斷和預后的參考指標[8]。此外，EGFR、Her-2的表達和性別、年齡、腫瘤直徑均無相關性，即表明胃癌一旦發(fā)生兩種蛋白可以穩(wěn)定地表達。臨床TNM分期中，Ⅲ、Ⅳ期EGFR、Her-2的陽性表達明顯多于Ⅰ、Ⅱ期，說明伴隨著腫瘤的發(fā)展，侵襲、浸潤能力的增強，EGFR、Her-2的表達也隨之增強，從而進一步加速了胃癌的惡化。Spearman秩相關分析顯示EGFR與Her-2在胃癌組織中的表達呈正相關。EGFR和Her-2有共同的細胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細胞內(nèi)區(qū)，伴隨著EGFR的信號傳導增加可上調(diào)Her-2的信號傳導，EGFR與Her-2聯(lián)合表達對胃癌的進展可能有協(xié)同作用[9]。本研究結果還發(fā)現(xiàn)，61.7%的患者EGFR和Her-2同時表達，兩者表達呈正相關，但具體的機制尚未闡明，需進一步研究。

總之，EGFR與Her-2均具有跨膜酪氨酸及酶活性，可促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究表明，兩個指標相互之間存在復雜而密切的聯(lián)系，通常在胃惡性腫瘤細胞中過度表達。而且表達水平與胃癌浸潤程度、預后及患者生存率相關，是預后不良的重要指標[10]。探究其表達及相互關系可更清楚地了解胃癌的發(fā)生、發(fā)展及生物學行為，對診斷、治療及預后預測有重要的臨床意義，同時可以為靶向藥物的個體化治療提供參考和療效預測。

[1] Strong VE,D'Amico TA,Kleinberg L,et al.Impact of the 7th Edition AJCC staging classification on the NCCN clinical practice guidelines in oncology for gastric and esophageal cancers[J].J NatlCompr Canc Netw,2013,11(1):60-66.

[2] Meric-Bernstam F,Hung MC.Advances in targeting human epidermal growth factor receptor-2 signaling for cancer therapy[J]. Clin Cancer Res,2006,12(12):6326-6330.

[3] Holbro T,CivenniG,Hynes N E.The ErbB receptors and their role in cancer progression[J].Exp CellRes,2003,284(1):99-110.

[4] Korkaya H,Paulson A,Iovino F,et al.HER2 regulates the mammary stem/progenitor cell population driving tumorigenesis and invasion[J].Oncogene,2008,27(47):6120-6130.

[5] Pérez-Soler R.HER1/EGFR targeting:refi ning the strategy[J]. Oncologist,2004,9(1):58-67.

[6] Stonecypher M S,Chaudhury A R,Byer S J,et al.Neuregulin growth factors and their ErbB receptors form a potential signaling network for schwannoma tumorigenesis[J].J Neuropathol Exp Neurol,2006,65(2):162-175.

[7] 張成，高廣榮,李達,等．PAR-2、EGFR和Ki67在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7（4）:1450-1453．

[8] 陳斌,羅榮城,崔斐,等.胃癌Her-2/NEU基因表達與預后相關性[J].南方醫(yī)科大學學報,2006,26（3）:265-267．

[9] Onn A,Correa A M,Gilcrease M,et al.Synchronous overexpression of epidermal growth factor receptor and HER2-neu protein is a predictor of poor outcome in patients with stage I non-small celllung cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10(1 Pt 1):136-143.

[10] 卞保祥,鄭義同,宴淼,等．EGFR及Her-2蛋白在胃癌組織中的表達臨床價值[J].白求恩軍醫(yī)學院學報,2011,9（4）:249-251.

2016-02-28）

（本文編輯：陳麗）

323000 麗水市中心醫(yī)院消化內(nèi)科（戴木根、葉斌），檢驗科（劉思宇、余璟璐），腫瘤科（王永輝）

葉斌，E-mail：yebind2016@163.com