徐煒楓，閆曉陽(yáng)，刁春友

（江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，南京 210036）

◆環(huán)境與殘留◆

葉菌唑在小麥中的最終殘留研究

徐煒楓，閆曉陽(yáng)，刁春友

（江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，南京 210036）

為了評(píng)價(jià)葉菌唑在小麥上使用的安全性，開(kāi)展了葉菌唑在小麥中的最終殘留量研究。建立了分散固相萃取前處理方法，并采用液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定葉菌唑在小麥中的殘留量。結(jié)果表明，該測(cè)定方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，方法的相關(guān)系數(shù)為0.999。有效成分用量為540～810 g/hm2，施藥2～3次，末次藥后14,21,28 d，葉菌唑在小麥麥粒和植株中的最終殘留分別為未檢出至0.16 mg/kg，未檢出至1.1 mg/kg。

葉菌唑；液質(zhì)聯(lián)用；小麥；最終殘留

葉菌唑（metconazole）化學(xué)名稱(chēng)為5-(4-氯苯基) -2,2-二甲基-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)環(huán)戊醇。其為白色無(wú)味結(jié)晶固體，有很好的熱穩(wěn)定性和水解穩(wěn)定性。葉菌唑由日本吳羽化學(xué)公司于20世紀(jì)90年代開(kāi)發(fā)，用于防治谷物葉面病害，對(duì)谷物和大豆鐮刀菌、殼針孢菌引起的病害以及銹病有特效。目前，葉菌唑在歐盟、日本、美國(guó)、巴西、加拿大等登記使用。其在歐盟和日本小麥上的最大殘留限量（MRL）分別為0.15 mg/kg、0.2 mg/kg，我國(guó)尚未制定葉菌唑MRL值。

為了給殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供殘留監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，為我國(guó)小麥生產(chǎn)上葉菌唑的合理使用及MRL標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)，開(kāi)展了葉菌唑在小麥中的殘留量研究。文獻(xiàn)報(bào)道的葉菌唑分析方法有氣相色譜法[1]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）[2]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）[3]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS/MS）[4]等，但并沒(méi)有關(guān)于小麥基質(zhì)中葉菌唑液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定方法報(bào)道。本試驗(yàn)采用乙腈提取小麥中葉菌唑，提取液用液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定，方法穩(wěn)定，回收率高。利用此方法，對(duì)葉菌唑在小麥中的最終殘留量進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 田間試驗(yàn)

1.1.1 供試農(nóng)藥

60%葉菌唑·福美雙可濕性粉劑（10%葉菌唑＋50%福美雙），南京南農(nóng)農(nóng)藥科技發(fā)展有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)情況

試驗(yàn)時(shí)間為2014—2015年。

試驗(yàn)設(shè)在江蘇省句容市華陽(yáng)鎮(zhèn)、山東省濟(jì)南市遙墻鎮(zhèn)、黑龍江省哈爾濱市紅旗鄉(xiāng)。供試小麥品種分別為揚(yáng)麥158、濟(jì)麥22、龍輻麥18。

1.1.3 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

按《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》要求設(shè)計(jì)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積30 m2，重復(fù)3次，隨機(jī)排列，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶。另設(shè)對(duì)照小區(qū)，不施藥，采對(duì)照樣。

葉菌唑最終殘留量試驗(yàn)設(shè)2個(gè)施藥量:低有效成分用量（540 g/hm2）和高有效成分用量（810 g/hm2）。施藥2～3次，施藥間隔7 d。末次施藥后14,21,28 d采集小麥麥粒、植株樣品，測(cè)定其中葉菌唑的最終殘留量。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 試劑和設(shè)備

液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀:WATERS XEVO-TQS，配有電噴霧離子源（ESI）；離心機(jī)（7 000 r/min）；高速勻漿機(jī)（24 000 r/min）。

甲酸、乙腈（色譜純）；氯化鈉、乙酸銨（分析純）；葉菌唑標(biāo)準(zhǔn)品（95%），由南京南農(nóng)農(nóng)藥科技發(fā)展有限公司提供。

1.2.2 提取

稱(chēng)取粉碎的麥粒5.0g，置于50mL具塞離心管中，加入5 mL蒸餾水浸泡2 h。加入10 mL乙腈，高速勻漿后加入4～6 g氯化鈉，劇烈振蕩，于7 000 r/min離心3 min，移取1.0 mL上清液，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

稱(chēng)取粉碎的小麥植株樣品10.0 g，置于250 mL具塞三角瓶中，加入10 mL蒸餾水浸泡30 min，再加入20 mL乙腈浸泡過(guò)夜。超聲提取30 min，過(guò)濾至裝有4～6 g氯化鈉的離心管中，振蕩，于7 000 r/min離心3 min，移取1.0 mL上清液，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.2.3 色譜條件

色譜柱:BEH-C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相:A（0.1%甲酸＋5 mmol乙酸銨水溶液）、B（乙腈）；流速:0.3 mL/min；柱溫:40℃；進(jìn)樣量:1 μL。梯度洗脫條件:初始為95%（體積分?jǐn)?shù)）A，保持0.5 min；2 min后為95%B；4 min后為95%A，保持1 min。

1.2.4 質(zhì)譜條件

離子源:電噴霧離子源ESI；掃描方式:正離子源；毛細(xì)管電壓:3.0 kV；離子源溫度:150℃；脫溶劑溫度:500℃；脫溶劑氣流量:1 000 L/h；碰撞氣流速: 0.15 mL/min；檢測(cè)方式:多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。在分析過(guò)程中，采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，以保留時(shí)間和離子對(duì)信息比較進(jìn)行定性分析，以母離子和響應(yīng)值最高的子離子進(jìn)行定量分析。葉菌唑的保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子及碰撞電壓見(jiàn)表1。

表1 葉菌唑的MRM條件

2 結(jié)果與分析

2.1 線(xiàn)性關(guān)系

用初始流動(dòng)相配制葉菌唑質(zhì)量濃度分別為0.01,0.02,0.04,0.05,0.08,0.1,0.2,0.4,0.8,1,2 mg/L的標(biāo)樣溶液。每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（見(jiàn)圖1）。

圖1 葉菌唑的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

葉菌唑線(xiàn)性回歸方程為y=2×106x＋23 651，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999，其標(biāo)樣溶液的質(zhì)量濃度與峰面積呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。

2.2 方法添加回收率和精密度

在未施用葉菌唑的空白小麥麥粒、植株中添加葉菌唑標(biāo)樣溶液，設(shè)添加濃度為0.015,0.15,1.5 mg/kg，進(jìn)行方法的添加回收試驗(yàn)。按上述方法進(jìn)行提取、凈化與測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。方法的最低檢測(cè)濃度為0.015 mg/kg。葉菌唑在麥粒、植株中的平均回收率為83.1%～101.2%，變異系數(shù)為9.0%～13.6%。

表2 葉菌唑的添加回收率與精密度（n=5）

2.3 葉菌唑在小麥中的最終殘留測(cè)定結(jié)果

按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以540 g/hm2和810 g/hm2的有效成分用量對(duì)小麥進(jìn)行噴霧處理，施藥次數(shù)分別為2次和3次，對(duì)照區(qū)不施藥，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3、表4。結(jié)果表明:距最后1次施藥14,21,28 d，小麥麥粒中葉菌唑的殘留量分別為未檢出至0.16 mg/kg、未檢出至0.098 mg/kg、未檢出至0.058 mg/kg。小麥植株中葉菌唑的殘留量分別為未檢出至1.1 mg/kg、未檢出至0.94 mg/kg、未檢出至0.51 mg/kg。

我國(guó)尚未制定小麥中葉菌唑的最大殘留限量，參考?xì)W盟標(biāo)準(zhǔn)，葉菌唑在麥粒中的最大殘留限量值為0.15 mg/kg。當(dāng)安全間隔期為21 d時(shí)，小麥麥粒中葉菌唑殘留量均低于0.15 mg/kg。因此，建議60%葉菌唑·福美雙可濕性粉劑在小麥中的最高有效成分用藥量為540 g/hm2，在揚(yáng)花期施藥，最多施藥2次，安全間隔期為21 d。

表3 麥粒中葉菌唑的最終殘留量

表4 小麥植株中葉菌唑的最終殘留量

施藥后14,21,28 d，麥粒中葉菌唑的殘留中值均為0.015 mg/kg，植株中的殘留中值分別為0.12 mg/kg、0.076 mg/kg、0.033 mg/kg；麥粒中的殘留量最 大 值 分 別為0.16 mg/kg、0.098 mg/kg、0.058 mg/kg，植株中的殘留量最大值分別為1.1 mg/kg、0.94 mg/kg、0.51 mg/kg。結(jié)果表明，葉菌唑在麥粒中的殘留量低于植株中的殘留量。植株中的殘留量大約為麥粒中殘留量的10倍。

殘留中值、殘留量最大值作為長(zhǎng)期膳食風(fēng)險(xiǎn)、急性膳食風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估數(shù)據(jù)，為我國(guó)制定葉菌唑的殘留限量提供必要的數(shù)據(jù)支持。同時(shí)，目前尚未見(jiàn)干草飼料中葉菌唑的最大殘留限量，本研究植株中殘留也可以為制定谷物干草飼料中葉菌唑的最大殘留限量提供數(shù)據(jù)支持。

3 結(jié)論

本文建立了采用乙腈提取，液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定葉菌唑的檢測(cè)方法。該方法具有提取時(shí)間短、溶劑用量少等特點(diǎn)，其添加回收率和精確度均滿(mǎn)足農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，適用于小麥、植株中葉菌唑的殘留檢測(cè)。

最終殘留試驗(yàn)結(jié)果表明，麥粒中葉菌唑的殘留量低于植株中的殘留量。施藥后21 d，小麥中葉菌唑殘留量低于歐盟規(guī)定的小麥中葉菌唑的最大殘留限量0.15 mg/kg。60%葉菌唑·福美雙可濕性粉劑在小麥中最高有效成分用量為540 g/hm2，揚(yáng)花期施藥，最多施藥2次，安全間隔期為21 d。

[1]石凱威,湯叢峰,李莉,等.葉菌唑在小麥中的殘留消解及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2015,17(3)：307-312.

[2]Nguyen T D,Lee K J,Lee M H,et al.A multiresidue Method for the Determination 234 Pesticides in Korean Herbs Using Gas Chromatography Mass Spectrometry [J].Microchem J,2010,95(1)：43-49.

[3]Walorczyk S.Development of a Multi-residue Method for the Determination of Pesticides in Cereals and Dry Animal Feed Using Gas Chromatography-tandem Quadrupole Mass Spectrometry：II.Improvement and Extension to New Analytes [J].J Chromatogr A, 2008,1208(1/2)：202-214.

[4]Pizzutti I R,Kok A,Zanella R,et al.Method Validation for the Analysis of 169 Pesticides in Soya Grain,Without Clean Up,by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry Using Positive and Negative Electrospray Ionization [J].J Chromatogr A,2007, 1142(2)：123-136.

（責(zé)任編輯：顧林玲）

Study on Residue of Metconazole in Wheat

XU Wei-feng,YAN Xiao-yang,DIAO Chun-you
(Jiangsu Agro-product Quality Test Center,Nanjing 210036)

To evaluate the safety of metconazole used on wheat,trials were conducted to study the final residues.A method for determining metconazole was established by solid-phase dispersion extraction,using LC-MS/MS.The results showed that the accuracy and the precision of the method were high,the correlation coefficient was 0.999.When the active ingredient dosage was 540-810 g/hm2,applied times were 2-3,the final residues in wheat and plant were no more than 0.16 mg/kg and 1.1 mg/kg,respectively.

metconazole;LC-MS/MS;wheat;final residue

TQ 450.2＋63

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2016.06.015

2016-06-07；

2016-06-20

徐煒楓（1981—），女，江蘇省海門(mén)市人，碩士研究生，主要從事農(nóng)藥殘留研究。E-mail:maple_1014@163.com