林 琎，孫 欣，楊 松，慕 衛(wèi)

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東泰安 271018；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心，山東泰安 271018；3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東泰安 271018）

◆農(nóng)藥分析◆

水體中代森錳鋅高效液相色譜分析方法

林 琎1，2，孫 欣3，楊 松2，慕 衛(wèi)1，2

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東泰安 271018；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心，山東泰安 271018；3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東泰安 271018）

采用高效液相色譜法，分析水樣中代森錳鋅。代森錳鋅在L-半胱氨酸鹽酸鹽和EDTA-2Na溶液中先轉(zhuǎn)化為代森鈉，再與碘甲烷發(fā)生甲基化反應(yīng)，然后以乙腈-磷酸水為流動相，選用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱，在272 nm波長下進(jìn)行液相色譜分析。結(jié)果表明，在0.09～45 mg/L范圍內(nèi)，方法具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。方法平均回收率為90.88%～93.44%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.22%～3.58%。該方法操作便捷、準(zhǔn)確，適用于水體中常量和微量代森錳鋅含量分析。

代森錳鋅；檢測；衍生；高效液相色譜；改進(jìn)方法

代森錳鋅為乙撐二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑，廣譜、低毒，對蠶豆赤斑病、馬鈴薯和番茄早疫病等多種病害具有較好的防治效果[1-3]。目前乙撐二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑的檢測方法有氣質(zhì)聯(lián)用法[4]、液質(zhì)聯(lián)用法[5]等。此外，也可采用間接方法測定，即其先與無機(jī)酸反應(yīng)得到二硫化碳，再采用氣相色譜頂空法定量[6]。由于代森錳鋅難溶于水，不溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑，且在液相色譜上無響應(yīng)，需衍生處理后再進(jìn)行高效液相色譜檢測。本研究建立了水體中微量代森錳鋅經(jīng)衍生化后，再進(jìn)行高效液相色譜檢測的改進(jìn)方法，檢測量低，方法簡便穩(wěn)定。

1 材料和方法

1.1 試劑和儀器

代森錳鋅（98.0%），由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心提供；甲醇、乙腈（色譜純），天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；L-半胱氨酸鹽酸鹽（分析純），天津市巴斯夫化工有限公司；氫氧化鈉、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）（分析純），上海廣諾化學(xué)科技有限公司；碘甲烷（分析純），山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司；試驗用水為去離子水。

高效液相色譜儀:Agilent 1220，配紫外檢測器；色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；數(shù)控超聲波清洗器；電子天平；超純水儀。

1.2 試驗方法

1.2.1 反應(yīng)溶液配制

溶液Ⅰ:稱取1.000 0 g L-半胱氨酸鹽酸鹽、5.000 0 g EDTA-2Na和2.000 0 g氫氧化鈉于容量瓶中，用蒸餾水定容至250 mL；溶液Ⅱ:量取1 mL碘甲烷到25 mL容量瓶，用甲醇定容。

1.2.2 標(biāo)樣溶液配制

稱取代森錳鋅0.027 78 g，用溶液Ⅰ溶解，30℃持續(xù)超聲30 min，冷卻至室溫，定容至50 mL，得到代森錳鋅標(biāo)樣溶液。取代森錳鋅標(biāo)樣溶液與等體積溶液Ⅱ室溫黑暗條件下衍生反應(yīng)30 min后，離心5 min，取上清液進(jìn)樣檢測。

1.2.3 液相色譜條件

流動相:乙腈＋0.5%磷酸水（體積比45∶55）；檢測波長:272 nm；柱溫:30℃；流速:1.0 mL/min；進(jìn)樣量:20 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 反應(yīng)試劑的選擇

陳鷺平等[5]采用LC-MS/MS分析二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥時，曾對緩沖液進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)以EDTA和半胱氨酸為緩沖液時，目標(biāo)物才有響應(yīng)。EDTA-2Na在水中有很好的溶解性，屬強(qiáng)效螯合劑，與金屬離子形成的絡(luò)合物有很高的穩(wěn)定常數(shù)。故本研究選用L-半胱氨酸鹽酸鹽和EDTA-2Na作為緩沖液，堿性條件下代森錳鋅轉(zhuǎn)化為代森鈉。并以碘甲烷的甲醇溶液作為反應(yīng)液，甲基化反應(yīng)后進(jìn)行液相色譜檢測。

2.2 衍生反應(yīng)條件的選擇

分別選用25℃、30℃和40℃作為反應(yīng)溫度，分別設(shè)反應(yīng)時間為20 min、30 min和40 min，進(jìn)行液相色譜檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，30℃條件下反應(yīng)30 min，目標(biāo)峰信號值最大，且目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰分離效果較好，標(biāo)樣線性關(guān)系良好，說明在該條件下進(jìn)行的衍生化反應(yīng)最完全。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用溶液Ⅰ將500 mg/L代森錳鋅標(biāo)樣溶液稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.1,0.5,1,2,5,10,50 mg/L的系列標(biāo)樣溶液。再分別取9 mL各濃度梯度代森錳鋅標(biāo)樣溶液與1 mL溶液Ⅱ混合，30℃持續(xù)超聲30 min。在1.2.3色譜條件下進(jìn)行檢測，以甲基化衍生物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為y=313 621.7 x-16 268.3，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8。結(jié)果表明，該方法在0.09～45 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。液相色譜圖見圖1。

圖1 代森錳鋅甲基化衍生物液相色譜圖（4.5 mg/L）

2.4 準(zhǔn)確度和精密度

以空白水體為基質(zhì)，加入代森錳鋅標(biāo)樣，使其質(zhì)量濃度分別為0.1,1,10mg/L，分別取上述溶液9mL與1 mL溶液Ⅱ混合，30℃持續(xù)超聲30 min。重復(fù)5次，計算準(zhǔn)確度和精密度。結(jié)果表明，方法平均回收率為90.88%～93.44%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.22%～3.58%（見表1）。

表1 分析方法準(zhǔn)確度和精密度

3 結(jié)論

本研究建立了代森錳鋅衍生化反應(yīng)-高效液相色譜分析的改進(jìn)方法，該方法操作便捷、準(zhǔn)確，既適用于水體中微量代森錳鋅的檢測，也適用于相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量分析。

[1]肖春芳,田恒林,沈艷芬,等.代森錳鋅和戊唑醇對馬鈴薯早疫病菌不同菌株的毒力 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(18)：123-124; 155.

[2]顧春燕,葛紅,陳滿峰,等.80%代森錳鋅可濕性粉劑防治蠶豆赤斑病示范試驗研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2015(12)：123;132.

[3]廖翔.50%代森錳鋅可溶性粉劑防治番茄早疫病效果研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2013(17)：164;166.

[4]張文紅,張慧,邵輝.代森聯(lián)在葡萄和土壤中的殘留和消解規(guī)律[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,22(1)：13-17.

[5]陳鷺平,李久興,吳敏,等.非衍生化/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中的二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].分析測試學(xué)報,2013, 32(3)：287-292.

[6]譚頭云,蔡磊明,王立冬,等.氣相色譜法測定蘋果、土壤中代森銨及其代謝物的殘留量[J].農(nóng)藥,2009,48(8)：591-592;597.

（責(zé)任編輯：柏亞羅）

Analysis Method of Mancozeb in Water by HPLC

LIN Jin1,2,SUN Xin3,YANG Song2,MU Wei1,2
(1.College of Plant Protection,Shandong Agricultural University,Shandong Tai'an 271018,China;2.Research Center of Pesticide Environmental Toxicology,Shandong Agricultural University,Shandong Tai'an 271018,China;3.College of Food Science and Engineering,Shandong Agricultural University,Shandong Tai'an 271018,China)

A method for determination of mancozeb in water was developed by HPLC.Mancozeb converted into nabam in L-cysteine hydrochloride and EDTA-2Na under basic conditions,then reacted with methyl iodide.The determination was carried out on the Agilent ZORBAX SB-C18column,the mobile phase was acetonitrile+phosphoric acid solution,the detection wavelength was 272 nm.The results showed that at the concentration of 0.09-45 mg/L,the correlation coefficient was 0.999 8.The average recoveries of the method were 90.88%-93.44%,with the relative standard deviations of 2.22%-3.58%.The method was fast,simple.

mancozeb;analysis;derivatization;HPLC;improved method

TQ 450.6

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2016.06.014

2016-06-08；

2016-06-27

林琎（1978—），女，四川省三臺縣人，博士，實驗師。研究方向:農(nóng)藥毒理。E-mail:linjin@sdau.edu.cn