楊 寧，郭中帥，王正麗

( 青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 海洋科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266109 )

飼料中添加滸苔對(duì)仿刺參幼參生長(zhǎng)、消化酶活性和免疫力的影響

楊 寧，郭中帥，王正麗

( 青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 海洋科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266109 )

在水溫17～18 ℃和鹽度30條件下，將初始體質(zhì)量為(4.09±0.26) g的仿刺參飼養(yǎng)在15個(gè)循環(huán)水玻璃缸(容積100 L)中，投喂在基礎(chǔ)飼料中添加0%、3%、6%、9%和12%滸苔的飼料,于投喂后第7、14、28 d和42 d分別檢測(cè)仿刺參的生長(zhǎng)指標(biāo)、消化酶(蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和褐藻酸酶)和體腔液免疫酶(溶菌酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶)的活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，投喂試驗(yàn)飼料后第14、28 d和42 d：(1)飼料中添加6%和9%滸苔組仿刺參的特定生長(zhǎng)率顯著增加(P<0.05)，在不同取樣時(shí)間其他添加組仿刺參的的特定生長(zhǎng)率與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05);(2)飼料中滸苔添加量為6%和9%試驗(yàn)組仿刺參的4種消化酶比活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其中6%組仿刺參的消化酶比活力最高;(3)飼料中滸苔添加量為6%時(shí)，仿刺參溶菌酶活力顯著高于對(duì)照組及其他試驗(yàn)組(P<0.05)；飼料中滸苔添加量為6%和9%時(shí)，仿刺參堿性磷酸酶活力和超氧化物歧化酶活力顯著高于對(duì)照組及其他試驗(yàn)組(P<0.05)；添加滸苔可以顯著提高酸性磷酸酶活力，至第42 d，試驗(yàn)組酸性磷酸酶活力高于對(duì)照組(P<0.05)，且滸苔添加量為6%時(shí)活力最高。在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加滸苔可以提高仿刺參的特定生長(zhǎng)率、消化酶活力及免疫力，滸苔的最適添加量為6%～9%。

仿刺參；飼料；滸苔；生長(zhǎng)；消化酶；免疫力

仿刺參(Apostichopusjaponicus)具有較高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，目前已成為我國(guó)北方地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖對(duì)象[1-2]。隨著仿刺參養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，人工配合飼料的開(kāi)發(fā)越來(lái)越引起人們的重視。大型海藻是生產(chǎn)仿刺參人工配合飼料的主要原料之一，因此，隨著仿刺參養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，馬尾藻(Sargassum)、鼠尾藻(S.thunbergii)等大型海藻的需求量不斷增加，其自然資源逐漸供不應(yīng)求。因此尋求合適的替代原料成為仿刺參飼料研究中亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題之一[3-4]。

滸苔(Enteromorphaprolifera)含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪酸、氨基酸及礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是一種重要的經(jīng)濟(jì)海藻，目前已作為新的飼料資源受到廣泛關(guān)注[5-7]。有效開(kāi)發(fā)利用滸苔資源，將其轉(zhuǎn)化為有開(kāi)發(fā)價(jià)值的經(jīng)濟(jì)藻類(lèi)具有重要意義。

滸苔作仿刺參飼料的可行性已有研究[8-12]，然而未給出適宜的添加量。本試驗(yàn)以青島地區(qū)加工后的滸苔為原料，部分替代仿刺參飼料中的鼠尾藻，研究其對(duì)仿刺參生長(zhǎng)、消化酶活力及免疫力的影響，確定滸苔在仿刺參飼料中的適宜添加量，為滸苔在仿刺參飼料中的合理開(kāi)發(fā)和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用滸苔采自青島附近海域，洗凈瀝干烘干、粉碎成粉狀，其粗蛋白含量約11.2%，粗纖維含量約6.7%，粗脂肪含量約1.5%,鈣1.55%，總氨基酸含量9.58%，必需氨基酸種類(lèi)齊全，占總氨基酸的43%，呈味氨基酸占總量的56%以上[13]。

試驗(yàn)用仿刺參來(lái)自日照某養(yǎng)殖場(chǎng)，體質(zhì)量為(4.09±0.26) g，在室內(nèi)暫養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分配到室內(nèi)海水循環(huán)系統(tǒng)中的15個(gè)玻璃缸(容積100 L)中。

試驗(yàn)用基礎(chǔ)飼料以俄羅斯白魚(yú)粉為主要蛋白源，魚(yú)油、豆油和大豆卵磷脂為主要脂肪源，總蛋白含量約為19.6%，脂肪含量約為4.7%。試驗(yàn)設(shè)計(jì)5種等氮等能的飼料，滸苔添加量分別為0%、3%、6%、9%和12%，其組成和營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。原料經(jīng)粉碎后過(guò)150目篩，按比例逐級(jí)混勻，最后按1∶5與海泥混合。

表1 試驗(yàn)飼料組成 %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每缸放30個(gè)仿刺參。試驗(yàn)用海水符合中華人民共和國(guó)漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB 11607—89)，水溫17～18 ℃，pH 8.2±0.2，鹽度30。養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)50 d，初始投飼量為仿刺參體質(zhì)量的5%，根據(jù)仿刺參攝食情況飽食投喂，每日早晚各投喂1次，每日上午定時(shí)吸污，每3 d更換一次海水，換水量約50%。

1.3 樣品采集與測(cè)定

試驗(yàn)開(kāi)始后分別在第7、14、28 d和42 d測(cè)定各組仿刺參的生長(zhǎng)，取樣測(cè)定消化酶活力及免疫酶活力。取樣前仿刺參饑餓24 h，每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)選取5頭仿刺參進(jìn)行體質(zhì)量測(cè)定及粗酶液制備。

1.3.1 體質(zhì)量測(cè)定

用撈網(wǎng)瀝凈仿刺參水分，在干濾紙上放置30 s后快速稱(chēng)量。為減少操作誤差，測(cè)定過(guò)程中由同一固定人員完成。計(jì)算特定生長(zhǎng)率：

特定生長(zhǎng)率/%·d-1=(lnmt-lnm0)/t×100%

式中，mt為仿刺參終末平均體質(zhì)量(g)，m0為仿刺參初始平均體質(zhì)量(g)，t為試驗(yàn)時(shí)間(d)。

1.3.2 免疫酶

仿刺參取出后，于腹部切口，用1 mL無(wú)菌注射器收集體腔液，3000 r/min離心5 min(4 ℃)，取上清液于4 ℃保存?zhèn)溆茫?4 h內(nèi)測(cè)定完畢。

溶菌酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶的活性均使用南京建成生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

溶菌酶活性用溶菌酶含量來(lái)表示(μg/mL)；酸性磷酸酶活性單位定義為：100 mL體腔液在37 ℃每克蛋白30 min 產(chǎn)生1 mg酚為1 個(gè)酶活性單位(U)；堿性磷酸酶活性單位定義為：100 mL體腔液在37 ℃與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1 個(gè)活力單位(U)；超氧化物歧化酶活性單位定義為：每毫升反應(yīng)液中超氧化物歧化酶抑制率達(dá)到50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的超氧化物歧化酶量為一個(gè)超氧化物歧化酶活力單位(U)。

1.3.3 消化酶

剖開(kāi)仿刺參腹部，取出消化道，剔除腸系膜上的脂肪組織，用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(pH 7.5)沖洗干凈，-20 ℃保存?zhèn)溆?。?0條腸，按腸質(zhì)量的10倍加入預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液，0 ℃勻漿。將勻漿液于4 ℃，10 000 r/min，離心30 min，所得上清液即為粗酶液, 4 ℃保存?zhèn)溆茫?4 h內(nèi)測(cè)定完畢。

蛋白酶活力采用酪蛋白為底物的福林—酚法測(cè)定，40 ℃，每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸定義為一個(gè)酶活力單位(U)。

淀粉酶活力采用以可溶性淀粉為底物的3，5-二硝基水楊酸顯色法測(cè)定，40 ℃，每分鐘催化淀粉產(chǎn)生1 mg麥芽糖定義為一個(gè)酶活力單位(U)。

纖維素酶活力采用以羧甲基纖維素鈉為底物的3,5-二硝基水楊酸顯色法測(cè)定，40 ℃，每分鐘催化纖維素產(chǎn)生1 mg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位(U)。

褐藻酸酶活力采用以褐藻酸鈉為底物的3，5-二硝基水楊酸顯色法測(cè)定，40 ℃，每分鐘催化褐藻酸酶產(chǎn)生1 mg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位(U)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)使用SPSS 18.0進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行Duncan多重比較，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 滸苔添加量對(duì)仿刺參生長(zhǎng)的影響

經(jīng)過(guò)6周的養(yǎng)殖試驗(yàn)，各飼料組仿刺參在不同時(shí)間的特定生長(zhǎng)率見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，除投喂試驗(yàn)飼料7 d外，飼料中添加滸苔均顯著影響仿刺參的特定生長(zhǎng)率(P<0.05)。第14 d時(shí)，滸苔添加量為6%組仿刺參的特定生長(zhǎng)率顯著高于其他各組(P<0.05)。隨著養(yǎng)殖時(shí)間的增加，第28 d和42 d時(shí)，滸苔添加量為6%和9%組仿刺參的特定生長(zhǎng)率均顯著高于其他各組(P<0.05)，其他組間差異不顯著(P>0.05)，其中滸苔添加量為6%組的特定生長(zhǎng)率顯著高于9%組(P<0.05)。

圖1 滸苔添加量對(duì)仿刺參特定生長(zhǎng)率的影響

2.2 滸苔添加量對(duì)仿刺參消化道消化酶活力的影響

2.2.1 滸苔添加量對(duì)仿刺參淀粉酶比活力的影響

隨著養(yǎng)殖時(shí)間的增加(第14、28、42 d)，飼料中滸苔添加量對(duì)淀粉酶比活力影響顯著(P<0.05)(圖2)，其中6%添加組淀粉酶比活力最高，9%添加組次之，在第28 d和42 d時(shí)均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)； 其他添加組與對(duì)照組間差異不顯著(P>0.05)。

圖2 滸苔添加量對(duì)仿刺參消化道淀粉酶比活力的影響

2.2.2 滸苔添加量對(duì)仿刺參蛋白酶比活力的影響

隨著養(yǎng)殖時(shí)間的增加(第14、28、42 d)，飼料中滸苔添加量顯著影響仿刺參消化道蛋白酶比活力(P<0.05)(圖3)；6%和9%添加組的仿刺參蛋白酶比活力顯著高于其他各組(P<0.05)，添加量為6%組仿刺參的蛋白酶比活力最高。

圖3 滸苔添加量對(duì)仿刺參蛋白酶比活力的影響

2.2.3 滸苔添加量對(duì)仿刺參纖維素酶比活力的影響

第14 d，添加6%滸苔組仿刺參消化道纖維素酶比活力顯著高于其他添加組(P<0.05)(圖4)；第28 d和42 d，滸苔6%和9%添加組仿刺參的纖維素酶比活力顯著高于其他各組(P<0.05)，滸苔添加量為6%組仿刺參的蛋白酶比活力最高。

圖4 滸苔添加量對(duì)仿刺參纖維素酶比活力的影響

2.2.4 滸苔添加量對(duì)仿刺參褐藻酸酶比活力的影響

第14、28、42 d，飼料中添加6%、9%和12%的滸苔，顯著增加仿刺參褐藻酸酶比活力(P<0.05)，添加量為6%組仿刺參的褐藻酸酶比活力最高(P>0.05)(圖5)。

圖5 滸苔添加量對(duì)仿刺參褐藻酸酶比活力的影響

2.3 滸苔添加量對(duì)仿刺參免疫酶活力的影響

2.3.1 滸苔添加量對(duì)仿刺參溶菌酶活力的影響

在第14、28、42 d，滸苔添加量這6%組仿刺參溶菌酶活力顯著高于對(duì)照組及其他組(P<0.05)(圖6)，第14 d活力最強(qiáng)；添加滸苔9%組在第14 d顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，至第42 d與其他各組及對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。

圖6 滸苔添加量對(duì)仿刺參體腔液溶菌酶活力的影響

2.3.2 滸苔添加量對(duì)仿刺參酸性磷酸酶活力的影響

在第14 d，飼料中添加6%和9%滸苔組仿刺參酸性磷酸酶活力顯著增加(P<0.05)(圖7)；在第28 d和42 d，對(duì)照組的酸性磷酸酶活力顯著低于添加6%、9%和12%滸苔組(P<0.05)。

圖7 滸苔添加量對(duì)仿刺參體腔液酸性磷酸酶活力的影響

2.3.3 滸苔添加量對(duì)仿刺參堿性磷酸酶活力的影響

在第14、28、42 d，添加6%和9%組仿刺參堿性磷酸酶活力均顯著高于對(duì)照組和其他添加組(P<0.05)(圖8)。

圖8 滸苔添加量對(duì)仿刺參體腔液堿性磷酸酶活力的影響

2.3.4 滸苔添加量對(duì)仿刺參超氧化物歧化酶活力的影響

在第14 d和第28 d時(shí)， 飼料中添加6%、9%和12%滸苔組仿刺參體腔液超氧化物歧化酶活力顯著增加(P<0.05, 圖9)，其中添加6%組超氧化物歧化酶活力最高，第42 d時(shí)，添加12%滸苔組的超氧化物歧化酶活力與對(duì)照組差異不顯著(P<0.05)。

圖9 滸苔添加量對(duì)仿刺參體腔液超氧化物歧化酶活力的影響

3 討 論

3.1 滸苔對(duì)仿刺參生長(zhǎng)的影響

滸苔是高蛋白、高膳食纖維、低脂肪、低能量，富含礦物質(zhì)和維生素的天然理想營(yíng)養(yǎng)食品原料[17]，作為飼料加工原料，已廣泛受到關(guān)注。現(xiàn)有研究表明，適量添加滸苔能提高蛋雞的產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋性能，降低蛋黃中膽固醇含量[18-22]；提高肉雞平均日增加質(zhì)量及免疫力等[23-24]；亦有顯著增進(jìn)豬、兔、奶牛生長(zhǎng)的作用[25-27]。滸苔作為飼料原料，可以提高大菱鲆(Scophthalmusmaximus)、大黃魚(yú)(Pseudosciaenacrocea)、黃斑藍(lán)子魚(yú)(Siganusoramin)的特定生長(zhǎng)率[28-31]。而現(xiàn)有研究顯示，滸苔含有大量的營(yíng)養(yǎng)成分，可以替代或部分替代鼠尾藻等作為仿刺參的飼料原料[8-11]。朱建新等[12]用蛋白酶處理滸苔后能夠顯著提高仿刺參的生長(zhǎng)率，認(rèn)為用適當(dāng)?shù)姆椒庸ず鬂G苔可以作為仿刺參的良好飼料。而本試驗(yàn)以滸苔部分替代鼠尾藻作仿刺參的餌料，不會(huì)降低仿刺參的特定生長(zhǎng)率，這與之前的研究結(jié)果一致，因此滸苔可以作為仿刺參的良好飼料源，且滸苔添加量為6%～9%時(shí)，可以顯著提高仿刺參的特定生長(zhǎng)率。

3.2 滸苔對(duì)仿刺參消化道消化酶活力的影響

消化酶活性的高低直接影響動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，與水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育緊密相關(guān)[32-33]。常用消化酶的種類(lèi)和活力來(lái)判斷動(dòng)物的攝食活力、食物來(lái)源以及動(dòng)物對(duì)這種食物的適應(yīng)性等[34-35]。蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、褐藻酸酶等是仿刺參的主要消化酶[36]。不同發(fā)育階段和季節(jié)仿刺參消化酶活力不同[37-38]，不同食物來(lái)源和不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也可影響消化酶的分泌。仿刺參的生長(zhǎng)速率越快，其腸道消化酶的活性越高[39]。滸苔中富含多種生物活性物質(zhì)，氨基酸組成合理，具有獨(dú)特的芳香氣味，可作為水產(chǎn)動(dòng)物的誘食劑[17]。本研究測(cè)定了仿刺參重要的消化酶——蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和褐藻酸酶，顯示添加6%～9%滸苔量可以顯著提高各消化酶的比活力，其他添加組與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，這一結(jié)果與特定生長(zhǎng)率結(jié)果一致。

3.3 滸苔對(duì)仿刺參體腔液免疫酶活力的影響

滸苔無(wú)毒無(wú)害，含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖及其復(fù)合物，有關(guān)滸苔及其提取物對(duì)脊椎動(dòng)物及無(wú)脊椎動(dòng)物動(dòng)物免疫力的影響已有研究，結(jié)果顯示，滸苔及其提取物可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫力和抗氧化功能[40-42]。

非特異性免疫在仿刺參免疫防御中具有重要的作用，而各種免疫酶類(lèi)是非特異性免疫的重要組成部分。溶菌酶、超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶是近年來(lái)評(píng)價(jià)仿刺參機(jī)體免疫力的常用指標(biāo)[43-44]。現(xiàn)有研究表明，這些酶類(lèi)在識(shí)別異物、增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力、消除異物、促進(jìn)新陳代謝、提高免疫力和抗氧化能力等方面起重要作用[43-45]。本試驗(yàn)中，添加6%和9%滸苔時(shí)，仿刺參各免疫酶活力顯著提高，免疫力增強(qiáng)；而其他滸苔添加組各免疫酶活力與對(duì)照組差異不顯著，即對(duì)免疫能力無(wú)明顯的促進(jìn)作用，這與唐薇等[46]的研究結(jié)果一致。唐薇等[46]在飼料中添加30%滸苔粉后，仿刺參的免疫能力無(wú)顯著提高，成活率與對(duì)照組相比并無(wú)提高。由此，筆者認(rèn)為，滸苔的適宜添加量為6%～9%。

[1] 廖玉麟．我國(guó)的海參[J]．生物學(xué)通報(bào)，2001，35(9)：1-3.

[2] 袁秀堂，楊紅生，周毅，等．鹽度對(duì)刺參(Apostichopusjaponicus)呼吸和排泄的影響[J]．海洋與湖沼，2006，37(4)：348-354．

[3] 袁成玉．海參飼料研究的現(xiàn)狀與發(fā)展方向[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2005，24(12)：54-56．

[4] 唐黎，王吉橋，程駿馳，等．海參飼料使用和發(fā)展方向[J]．飼料工業(yè)，2007, 28(22)：22-23．

[5] 徐大倫，黃曉春，楊文鴿，等． 滸苔營(yíng)養(yǎng)成分分析[J]．浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)，2003, 22(4)：318-320．

[6] 孫文，張國(guó)琛，李秀辰，等．滸苔資源利用的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2011，30(9)：588-590．

[7] 羅佳捷，肖淑華，張彬，等． 滸苔的研究進(jìn)展及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]．資源開(kāi)發(fā)，2014(2)：31-34．

[8] 廖梅杰，郝志凱，尚德榮，等． 滸苔營(yíng)養(yǎng)成分分析與投喂刺參試驗(yàn)[J]． 漁業(yè)現(xiàn)代化，2011，38(4)：32-36．

[9] 郭娜，董雙林，劉慧． 幾種飼料原料對(duì)刺參幼參生長(zhǎng)和體成分的影響[J]．漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2011，32(1)：122-128．

[10] 劉天紅，吳志宏，王穎，等．滸苔作為仿刺參幼參植物飼料源的可行性研究[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2013，32(10)：597-600．

[11] 李曉，王穎，吳志宏，等．滸苔對(duì)刺參幼參影響的初步研究[J]．中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2013，20(5)：1092-1099．

[12] 朱建新，曲克明，李健，等．不同處理方法對(duì)滸苔飼喂稚幼刺參效果的影響[J]．漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2009，30(5)：108-112．

[13] 林英庭，朱風(fēng)華，徐坤，等． 青島海域滸苔營(yíng)養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)[J]．飼料工業(yè)，2009，30(3)：46-49．

[14] 潘魯青，王克行．中國(guó)對(duì)蝦幼體消化酶活力的實(shí)驗(yàn)研究[J]．水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1997，21(1)：26-31．

[15] 史峰．生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．杭州：浙江大學(xué)出版社，2002:11-113．

[16] 趙亞華．生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)教程[M]．廣州：華南理工大學(xué)出版社，2000：144-159．

[17] 林文庭．淺談滸苔的開(kāi)發(fā)與利用[J]．中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2007(9)：23-25．

[18] 王述柏，賈玉輝，王利華，等．滸苔添加水平對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、免疫功能及糞便微生物區(qū)系的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013，25(6)：1346-1352．

[19] 趙軍，林英庭，孫建鳳，等．飼糧中不同水平滸苔對(duì)蛋雞蛋黃品質(zhì)、抗氧化能力和血清生化指標(biāo)的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2011，23(3)：452-458．

[20] 張威，蘇秀榕，鄧亮亮，等．滸苔和江蘺對(duì)仙居雞產(chǎn)蛋性能的影響[J]．畜牧與獸醫(yī)，2009，41(7)：46-48．

[21] 蘇秀榕，張威，李妍妍，等．滸苔和江蘺增強(qiáng)仙居雞抗性的研究[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，31(3)：27-29．

[22] 位孟聰，王衛(wèi)，戰(zhàn)新強(qiáng)，等．青島海域野生滸苔對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能影響的試驗(yàn)研究[J]．中國(guó)畜牧雜志，2013，49(16)：58-60．

[23] 孫建鳳，趙軍，祁茹，等．日糧中滸苔添加水平對(duì)肉雞免疫功能和血清生化指標(biāo)的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22(3)：682-688．

[24] 王述柏，史雪萍，周傳鳳，等．滸苔添加水平對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、胴體品質(zhì)及小腸消化酶活性的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013，25(6)：1332-1337．

[25] 林英庭，宋春陽(yáng)，薛強(qiáng)，等．滸苔對(duì)豬生長(zhǎng)性能的影響及養(yǎng)分消化率的測(cè)定[J]．飼料研究，2009(3)：47-49．

[26] 孫國(guó)強(qiáng)，胡昌軍，李國(guó)興，等．滸苔粉對(duì)奶牛產(chǎn)奶性能及糞便微生物菌群的影響[J]．畜牧與獸醫(yī)，2010，42(6)：54-56．

[27] 周蔚，徐小明，嵇珍，等．滸苔用作肉兔飼料的研究[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2001(6)：68-69．

[28] 周勝?gòu)?qiáng)，游翠紅，王樹(shù)啟，等．飼料中添加滸苔對(duì)黃斑藍(lán)子魚(yú)生長(zhǎng)性能與生理生化指標(biāo)的影響[J]．中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2013，20(6)：1257-1265．

[29] 梁萌青，姚健，常青，等．以綠藻滸苔作為大菱鲆誘食劑的制備方法：中國(guó)，200810249651．9[P]2009-06-17．

[30] Asino H, Ai Q H, Mai K S. Evaluation ofEnteromorphaproliferaas a feed component in large yellow croaker (Pseudosciaenacrocea, Richardson, 1846) diets[J]. Aqu Res, 2011,42(4):525-533.

[31] Yousif O M, Osman M F, Anawhi A R, et al. Growth response and carcass composition of rabbitfishSiganuscanaliculatus(Park) fed diet supplemented with dried seaweed,Enteromorphasp[J]. Emir J Agric Sci, 2004(16):18-26.

[32] 聶琴，楊凡，萬(wàn)龍飛，等．飼料中添加酵母對(duì)刺參腸道消化酶活性和超導(dǎo)微生物的影響[J]．中國(guó)飼料，2014(17)：42-44．

[33] 倪小英，張永普，賈守菊，等．pH和溫度對(duì)小莢蟶淀粉酶和纖維素酶活性的影響[J]．海洋湖沼通報(bào)，2009，31(1)：151-154．

[34] Harris R P, Samain J F, Martin-Jézéquel V, et al. Effects of algal diet enzyme activity inCalanushelgolandicus[J]. Mar Biol, 1986(90):353-361.

[35] Hirche H. Spatial distribution of digestive enzyme activities ofCalanusfinmarchicusandC.hyperboreusin Farm/Greenland sea[J]. J Plankton Research, 1989, 11(3):431-443.

[36] 王羽，孫永欣，汪婷婷，等．海參消化酶的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)飼料，2008(13):38-41.

[37] 唐黎，王吉橋，許重，等．不同發(fā)育期的幼體和不同規(guī)格刺參消化道中4種消化酶的活性[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2007，26(5)：275-277．

[38] 王吉橋，唐黎，許重，等．仿刺參消化道的組織學(xué)及其4種消化酶活力的周年變化[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2007，26(9)：481-484．

[39] 張洪彩，朱江艷，陳政強(qiáng)，等．不同規(guī)格刺參消化酶活性差異性研究[J]．泉州師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，32(2)：27-30．

[40] 王懷禹．海藻在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用[J]． 養(yǎng)殖與飼料，2009(4)：23-25．

[41] 徐大倫，黃曉春，歐昌榮，等．滸苔多糖對(duì)非特異性免疫功能的體外實(shí)驗(yàn)研究[J]．食品科學(xué)，2005,26(10)：233-235．

[42] 徐大倫，黃曉春，歐昌榮，等．滸苔多糖對(duì)華貴櫛孔扇貝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活性的影響[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2006，25(2)：72-74．

[43] 孫永欣，王吉橋，汪婷婷，等．海參防御機(jī)制的研究進(jìn)展[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2007，26(6)：358-361．

[44] 常杰，?；溃瑥埼谋虆⒚庖呦到y(tǒng)及其免疫增強(qiáng)劑評(píng)價(jià)指標(biāo)的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)飼料，2011(6)：8-12．

[45] Zhang R Q, Chen Q X, Zheng W Z, et al. Inhibition kinetics of green crab (Scyllaserrata) alkaline phosphatase activity by dithiothreitol or 2-mercaptoethanol[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2000,32(8):865-872.

[46] 唐薇，王慶吉，張蕾，等．不同藻粉對(duì)刺參組織免疫性能和體壁成分的影響[J]．資源開(kāi)發(fā)與市場(chǎng)，2014，30(8)：905-908．

EffectsofDietaryGreenLaverEnteromorphaproliferaonGrowth,ActivityofDigestiveEnzymesandImmunityinSeaCucumberApostichopusjaponicus

YANG Ning, GUO Zhongshuai, WANG Zhengli

( College of Marine Science and Engineering, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China )

A 6-week feeding experiment was conducted to evaluate the effects of dietary green laverEnteromophaproliferaon growth, activities of digestive enzymes and immunity in sea cucumberApostichopusjaponicuswith initial body weight of (4.09±0.26) g. The sea cucumber juveniles were reared in 15 tanks of each 100 L in volume with recycling water and fed the diets containing 0%, 3%, 6%, 9% and 12% of green laver powder at water temperature of 17—18 ℃ and a salinity of 30. The specific growth rate, and activities of digestive enzymes including protease, amylase, cellulase, and alginase and immune enzymes including lysozyme, acid phosphatase, alkaline phosphatase and superoxide dismutase were analyzed 7, 14, 28 and 42 days after the sea cucumber were fed different diets. The results showed that there were significantly increase in specific growth rate in the sea cucumber fed the diets supplemented with 6% and 9% green laver on the days 14, 28 and 42 (P<0.05), without significant differences among other groups compared with control group (P>0.05). Compared with the control group, there were significantly higher activities of the digestive enzymes in the sea cucumber fed the diets containing 6% and 9% of green laver (P<0.05), the maximum in the sea cucumber fed the diets containing 6% of green laver (P<0.05). The sea cucumber fed the diet supplemented with 6% of green laver had significantly higher activities of lysozyme, acid phosphatase and superoxide dismutase than the juveniles in other groups (P<0.05). It is concluded that dietary green laver leads to significant increase in specific growth, activities of digestive enzymes and immunity of sea cucumber, with the optimal supplementation of 6%—9% under the present experimental conditions.

Apostichopusjaponicus; diet;Enteromorphaprolifera; growth; digestive enzyme; immunity

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.05.007

S968.9

A

1003-1111(2016)05-0498-06

2015-05-08；

2016-04-29.

青島市關(guān)鍵技術(shù)攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(12-6-1-7-hy).

楊寧(1977—)，女，講師；研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物免疫學(xué).E-mail:yangning04@163.com.通訊作者：王正麗(1977—)，女，教授，碩士生導(dǎo)師；研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料.E-mail: zhengliwang2004@163.com.