劉克敏，孫藝平，王珂萌，張冬梅，戴淑芳，朱 亮，傅 雷

(大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧大連 116044)

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·經(jīng)驗交流·

鹿茸的心肌保護(hù)作用與M受體的相關(guān)性研究

劉克敏，孫藝平，王珂萌，張冬梅，戴淑芳，朱 亮，傅 雷△

(大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧大連 116044)

目的 應(yīng)用阿托品工具藥觀察鹿茸對離體蟾蜍心肌收縮雙向調(diào)節(jié)的保護(hù)作用。方法 采用斯氏法制備離體蟾蜍心臟灌流標(biāo)本,在低鈣或高鈣狀態(tài)下，在灌流鹿茸溶液前或后灌流阿托品溶液，應(yīng)用B-420F生物機(jī)能實驗系統(tǒng)記錄離體蟾蜍心肌收縮曲線，并進(jìn)行心肌收縮力的統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果 在低鈣條件下,灌流阿托品(濃度為10 mg/L)時的心肌收縮力與低鈣時比較明顯增加(P<0.05)，先灌流阿托品溶液再灌流鹿茸溶液(濃度為2 g/L)離體蟾蜍的心肌收縮力和在先灌流鹿茸溶液再灌阿托品溶液離體蟾蜍的心肌收縮力均明顯增加(P<0.05)。在高鈣狀態(tài)下，灌流阿托品時的心肌收縮力與高鈣時比較明顯降低(P<0.01)，先灌流阿托品溶液再灌流鹿茸溶液離體蟾蜍的心肌收縮力和先灌流鹿茸溶液再灌流阿托品溶液離體蟾蜍的心肌收縮力亦明顯增加(P<0.05)。結(jié)論 在低鈣M受體被部分激活情況下，鹿茸能使M受體進(jìn)一步激活，而在高鈣M受體被失活情況下，鹿茸能使M受體激活。

鹿茸；保護(hù)作用；M受體；心肌收縮力

鹿茸是梅花鹿或馬鹿的密生茸毛未骨化的幼角，是藥食兩用的珍品?，F(xiàn)代研究表明，鹿茸有抗衰老，抗腫瘤，保護(hù)心血管功能等作用[1]。馬英淇等[2]和于德欽等[3]研究發(fā)現(xiàn)：鹿茸在低鈣和高鈣條件下對離體蟾蜍心肌收縮具有雙向調(diào)節(jié)作用，而人在低鈣和高鈣條件下對心血管極其不利。研究發(fā)現(xiàn)，鹿茸對離體蟾蜍心肌收縮力的雙向調(diào)節(jié)保護(hù)作用與心肌細(xì)胞膜上β受體興奮有關(guān)[4]，而這種保護(hù)作用是否與心肌細(xì)胞膜上M受體相關(guān)？本文旨在應(yīng)用阿托品工具藥探討鹿茸作用與M受體的相關(guān)性，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 中華蟾蜍40只，體質(zhì)量80～100 g，由大連醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供，隨機(jī)分為低鈣組和高鈣組，低鈣組又分為低鈣條件下鹿茸+阿托品組(A組)和低鈣條件下阿托品+鹿茸組(B組)；高鈣組又分為高鈣條件下鹿茸+阿托品組(C組)和高鈣條件下阿托品+鹿茸組(D組)，每組10只蟾蜍。

1.2 儀器與試劑 鹿茸凍干粉由美國德州大學(xué)圣安東尼奧健康中心霍玉書教授提供[5]，以純凈蒸餾水稀釋。阿托品為鄭州羚銳制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號1410081，任氏液、低鈣任氏液和高鈣任氏液按標(biāo)準(zhǔn)配方配制，BL-420F生物機(jī)能實驗系統(tǒng)和FT-100張力換能器由成都泰盟公司生產(chǎn)。

1.3 方法 模型制備和檢測指標(biāo)參照文獻(xiàn)[6-7]。給藥方法以任氏液+低鈣任氏液+鹿茸+阿托品組為例，離體蟾蜍心臟灌流任氏液，穩(wěn)定后將心室內(nèi)任氏液吸出改為低鈣任氏液，在該基礎(chǔ)上加入鹿茸稀釋液后再加入阿托品觀察40 min。其余組給藥方法與上述基本相同，每次在加個20 μL阿托品或鹿茸前要先吸出20 μL灌流液，記錄心搏曲線。

2 結(jié) 果

2.1 低鈣條件下鹿茸對心肌收縮力保護(hù)作用與M受體的相關(guān)性 在低鈣狀態(tài)下心室外鹿茸濃度為2g/L時，心肌收縮力與低鈣任氏液組比較明顯增強(P<0.05)，而在加鹿茸之后再加阿托品心肌收縮力與加阿托品前比較，心肌收縮力明顯增強(P<0.05)。在低鈣狀態(tài)下灌流液阿托品濃度為10mg/L時，心肌收縮力與低鈣任氏液組比較明顯增強(P<0.05)，之后心室外灌流鹿茸濃度為2g/L時，心肌收縮力與加鹿茸溶液前比較，心肌收縮力再次明顯增加(P<0.05)，見表1。即在低鈣狀態(tài)下無論是在灌流鹿茸凍干粉溶液前或后灌流阿托品溶液，心肌收縮力均明顯增強，而在離體蟾蜍心肌收縮力下降狀態(tài)下，只要灌流鹿茸凍干粉溶液，心肌收縮力就會保護(hù)性增強。

表1 低鈣狀態(tài)下鹿茸對心肌收縮力的保護(hù)作用與阿托品的關(guān)系

表2 高鈣狀態(tài)下鹿茸對心肌收縮力的保護(hù)作用與M受體的關(guān)系

2.2 高鈣條件下鹿茸對心肌收縮力保護(hù)作用與M受體的相關(guān)性 在高鈣狀態(tài)下心室外鹿茸濃度為2g/L時，心肌收縮力與高鈣任氏液組比較明顯降低(P<0.01)，而在先加鹿茸之后再加阿托品心肌收縮力與加藥前后比較，在加鹿茸后心肌收縮力被抑制后再明顯增強(P<0.05)；在高鈣狀態(tài)下先灌流阿托品液濃度為10mg/L時，心肌收縮力與高鈣任氏液組比較，心肌收縮力明顯減弱(P<0.01)，之后加鹿茸后心肌收縮力與加鹿茸溶液前心肌收縮力比較，心肌收縮力在相對較弱的狀態(tài)下明顯增加(P<0.01)，見表2。即在高鈣狀態(tài)下灌流阿托品溶液，心肌收縮力均明顯下降，而在離體蟾蜍心肌收縮力下降或升高的狀態(tài)下，只要灌流鹿茸凍干粉溶液，心肌收縮力就會保護(hù)性負(fù)反饋調(diào)節(jié)，使心肌收縮力得以恢復(fù)正常。

3 討 論

鹿茸是一種藥食同源的滋補中藥材，功效作用有很多，而且沒有什么毒副作用，一般來說對于大多數(shù)人都是適用的。鹿茸具有較強的保健作用，是良好的全身強壯藥材。鹿茸化學(xué)成分比較復(fù)雜，有激素類如雌二醇、雌酮、表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、神經(jīng)生長因子等[8]，無機(jī)成分如人體必需常量元素鈣、鈉、鉀和11種微量元素[9]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)：鹿茸在低鈣和高鈣條件下對離體蟾蜍心肌收縮具有雙向調(diào)節(jié)保護(hù)作用，并且鹿茸對離體蟾蜍心肌收縮力的雙向調(diào)節(jié)保護(hù)作用可能與心肌細(xì)胞膜上β受體興奮有關(guān)[2-4]。本實驗結(jié)果顯示，鹿茸在低鈣條件下M受體處于激活狀態(tài)，而在高鈣條件下M受體處于失活狀態(tài)，提示鹿茸對離體蟾蜍心肌收縮力的雙向調(diào)節(jié)保護(hù)作用與M受體相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，雌激素可以通過抑制ICaL，降低心肌細(xì)胞的鈣瞬變，可能雌激素與G蛋白耦聯(lián)受體結(jié)合，釋放與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或肌質(zhì)膜受體結(jié)合的IP3，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或肌質(zhì)膜鈣離子釋放，促使Tnc與鈣離子的結(jié)合引起心肌收縮力增強[10]。于向沉[11]報道：雌激素可以通過基因組效應(yīng)機(jī)制或非基因組效應(yīng)機(jī)制快速激活或抑制多種鈣通道的活性，并且多呈現(xiàn)一種非單調(diào)的量效關(guān)系。周玉文等[12]報道，較高濃度的睪酮或其慢性作用可以提高T型、L型鈣離子通道的密度，較低濃度或急性作用可以阻滯T型、L型鈣離子通道的密度，睪酮還可上調(diào)鈣調(diào)蛋白、β2受體的表達(dá)，在提高細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的情況下，可以增加鈣瞬變的幅度，減少鈣超載，即雌激素或睪酮對鈣離子都有調(diào)控作用，而鹿茸中含有雌激素和睪酮等物質(zhì)，并且在灌流鹿茸前后灌流阿托品溶液，即在M受體激活或失活狀態(tài)下，鹿茸仍能發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)作用，推測鹿茸在低鈣和高鈣條件下對離體蟾蜍心肌收縮力的雙向調(diào)節(jié)保護(hù)作用是通過鹿茸中的雌激素或睪酮的多少來調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞膜上M受體通道的開放或關(guān)閉，進(jìn)一步控制鈣離子釋放的多少，從而調(diào)節(jié)蟾蜍的心肌收縮力，鹿茸更精細(xì)成分對離體蟾蜍心肌收縮力的影響的具體作用機(jī)制涉及更微觀的領(lǐng)域，尚待進(jìn)一步研究。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.31.028

國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81200155)。

劉克敏(1972-),碩士，講師,主要從事循環(huán)和神經(jīng)生理研究。△

，E-mail:shiren382@qq.com。

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1671-8348(2016)31-4404-03

2016-04-11

2016-07-01)