姚智慧，程遠(yuǎn)雄△，賴文巖，蔡開燦

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院：1.呼吸科；2.心血管內(nèi)科；3.心胸外科，廣州 510515)

?

·論 著·

達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的人氣道平滑肌細(xì)胞收縮和增殖的影響

姚智慧1，程遠(yuǎn)雄1△，賴文巖2，蔡開燦3

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院：1.呼吸科；2.心血管內(nèi)科；3.心胸外科，廣州 510515)

目的 探討達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的人氣道平滑肌(HASM)細(xì)胞收縮和增殖的影響。方法 將原代培養(yǎng)的HASM細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。用免疫熒光的方法觀察細(xì)胞收縮的形態(tài)學(xué)變化；用Western blot法分析α-actin蛋白相對(duì)表達(dá)量；用cck8法檢測(cè)平滑肌細(xì)胞增殖能力。結(jié)果 達(dá)比加群能顯著抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞骨架重組和收縮蛋白α-actin的表達(dá)(P<0.05)。對(duì)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1、血小板源性生長因子、乙酰甲膽堿、凝血酶的促增殖能力進(jìn)行比較，凝血酶顯著強(qiáng)于AngⅡ,僅次于10%胎牛血清(P<0.05)。達(dá)比加群呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性地抑制了凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖(P<0.05)。結(jié)論 達(dá)比加群能夠顯著抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞收縮和增殖。

平滑肌細(xì)胞;凝血酶;達(dá)比加群;血管緊張素Ⅱ;轉(zhuǎn)化生長因子-β

氣道高反應(yīng)性和氣道重塑是哮喘的兩大病理特征，是導(dǎo)致哮喘患者氣道狹窄、氣流受限、肺功能持續(xù)下降的主要原因。氣道平滑肌細(xì)胞作為氣道的主要收縮細(xì)胞，是氣道高反應(yīng)性最終效應(yīng)的執(zhí)行者。同時(shí)，其增殖不僅使氣道平滑肌層收縮能力增強(qiáng)，而且通過參與氣道重塑進(jìn)一步加劇哮喘患者氣流受限。因此，徹底控制氣道平滑肌細(xì)胞收縮和增殖對(duì)哮喘患者尤其是難治性哮喘患者的治療及改善預(yù)后有重要意義。多項(xiàng)研究顯示，在哮喘炎癥狀態(tài)下，哮喘氣道凝血系統(tǒng)過度激活，凝血酶活性顯著高于健康對(duì)照組[1-2]。過度激活的凝血酶可誘導(dǎo)人氣道平滑肌(HASM)細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞收縮和增殖[3]。然而，凝血酶在肺成纖維細(xì)胞的這一作用在體內(nèi)外試驗(yàn)中都已證實(shí)可被新型高效的直接凝血酶抑制劑-達(dá)比加群所抑制[4-5]。本試驗(yàn)以HASM細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象，探討達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞收縮和增殖的影響，以期為達(dá)比加群可能成為治療哮喘氣道高反應(yīng)性和氣道重塑藥物提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 胎牛血清、高糖DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶購于美國Gibco公司;人凝血酶、羅丹明鬼筆環(huán)肽購于美國Sigma公司，達(dá)比加群購于德國Boehringer Ingelheim Pharma公司；cck8試劑購于日本同仁公司；小鼠抗平滑肌α肌動(dòng)蛋白(α-SMA)，BCA100蛋白定量分析試劑盒和全蛋白提取試劑盒購于碧云天生物技術(shù)研究所；小鼠抗GAPDH抗體購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；FITC-山羊抗小鼠二抗購于北京中杉金橋生物科技有限公司；小鼠IgG-HRP二抗購于杭州弗德生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 原代人氣道平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng) 本試驗(yàn)獲南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(NFEC-201109-K1)。試驗(yàn)前均已告知患者試驗(yàn)?zāi)康牟⒑炇鹬橥鈺?。取南方醫(yī)院胸外科肺葉切除手術(shù)標(biāo)本，采用組織塊貼壁法培養(yǎng)原代HASM細(xì)胞。細(xì)胞從組織塊爬出、融合后，用0.125%胰酶消化，部分變圓時(shí)以10%FBS立即終止。以后按1∶2常規(guī)傳代，取3～6代對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于試驗(yàn)研究。

1.2.2 免疫熒光 將細(xì)胞以30%～40%的密度均勻種于處理過的玻片上，待細(xì)胞長至50%～60%融合時(shí)分為對(duì)照組、凝血酶組、凝血酶+達(dá)比加群組刺激30 min。PBS液輕柔漂洗2遍后，用3.75%多聚甲醛固定30 min，TritonX-100通透5 min，5%BSA室溫封閉1 h。然后用α-SMA抗體4 ℃孵育過夜或羅丹明鬼筆環(huán)肽室溫孵育45 min。PBS漂洗3遍后室溫孵育熒光二抗30 min或予以DAPI室溫復(fù)染5 min,封片后在正置熒光顯微鏡下觀察。

1.2.3 Western blot檢測(cè)α-actin蛋白的表達(dá) 常規(guī)接種6 cm平皿，細(xì)胞饑餓過夜后，分對(duì)照組、凝血酶組、凝血酶+達(dá)比加群組。細(xì)胞經(jīng)預(yù)冷的PBS液沖洗2次，加入80 μL蛋白裂解液冰上裂解，收集細(xì)胞。轉(zhuǎn)移至EP管，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，收集上清液，用BCA法測(cè)定蛋白濃度。10% SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白后濕轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%BSA室溫封閉1 h，α-actin一抗4 ℃孵育過夜；次日二抗室溫孵育2 h。采用ECL化學(xué)發(fā)光法曝光顯示目的條帶。用Gel-Pro analyzer圖像分析軟件分析條帶灰度值，以α-actin/GAPDH代表目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4 cck8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 常規(guī)消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)，以8×103個(gè)/孔的密度將200 μL細(xì)胞懸液種于96孔培養(yǎng)板，37 ℃孵育過夜。細(xì)胞刺激預(yù)先設(shè)計(jì)的濃度和時(shí)間后，按每孔10 μL加入cck8溶液，37 ℃避光孵育2 h,用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值A(chǔ)450。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用Graphpad Prism 6軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，多組間經(jīng)方差分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異后，選用Bonferroni′s多重檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 原代HASM細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定 采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)HASM細(xì)胞。約2周后原代細(xì)胞從貼壁組織邊緣長出，并以組織塊為中心向周邊延伸直至融合。見圖1。

A：原代HASM細(xì)胞從組織爬出后逐漸融合呈現(xiàn)“峰谷征”；B： 免疫熒光染色可見α-SMA為綠色熒光，DAPI染核呈藍(lán)色熒光。

圖1 原代HASM細(xì)胞形態(tài)及表型鑒定(×100)

A：對(duì)照組；B：凝血酶組；C：凝血酶+達(dá)比加群組。

圖2 達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞骨架重組的抑制(×1 000)

2.2 達(dá)比加群對(duì)凝血酶促HASM細(xì)胞收縮效應(yīng)的影響 以羅丹明鬼筆環(huán)肽標(biāo)記細(xì)胞骨架，從形態(tài)學(xué)上觀察細(xì)胞收縮變化。如圖2所示，凝血酶(1 U/mL)刺激HASM細(xì)胞30 min后，細(xì)胞骨架重組，細(xì)胞張力明顯增加，并可見濃密的F-actin應(yīng)力纖維。達(dá)比加群與凝血酶共培養(yǎng)后，張力減弱，F(xiàn)-actin應(yīng)力纖維稀疏。為了進(jìn)一步證明達(dá)比加群能夠抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞收縮，筆者用Western blot檢測(cè)α-actin蛋白的表達(dá)。如圖3所示，凝血酶誘導(dǎo)的α-actin表達(dá)被達(dá)比加群顯著抑制(P<0.05)。

A:對(duì)照組；B：達(dá)比加群組；C：凝血酶組；D：凝血酶+達(dá)比加群組。

圖3 達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的HASMα-actin蛋白表達(dá)的抑制

2.3 多種促生長介質(zhì)對(duì)HASM細(xì)胞增殖能力的比較 多年來，本課題組專注于血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、血小板源性生長因子(PDGF)、乙酰甲膽堿(Mch)、凝血酶促HASM重塑機(jī)制的研究[6]，但未對(duì)其促增殖能力進(jìn)行比較。如圖4所示，與對(duì)照組相比，凝血酶促增殖能力最強(qiáng)，僅次于10%FBS；PDGF(20 ng/mL)、TGF-β1(2 ng/mL)、AngⅡ (10-7mol/L)同樣能促進(jìn)HASM細(xì)胞生長(P<0.05)，而Mch無促增殖作用(P>0.05)。凝血酶與PDGF、TGF-β1、AngⅡ相比，只有凝血酶與AngⅡ的促增殖能力比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

*：P<0.05,**：P<0.01,***：P<0.001，與對(duì)照組比較。

圖4 多種促增殖介質(zhì)對(duì)HASM細(xì)胞促增殖能力的對(duì)比

2.4 達(dá)比加群對(duì)凝血酶促HASM細(xì)胞增殖效應(yīng)的影響 選取100～5 000 ng/mL達(dá)比加群與凝血酶(1 U/mL)共同刺激HASM細(xì)胞48 h。如圖5所示，1 000、3 000、5 000 ng/mL達(dá)比加群可顯著抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖，5 000 ng/mL作用最強(qiáng)(P<0.05)。然而經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，單用5 000 ng/mL達(dá)比加群已經(jīng)對(duì)HASM細(xì)胞有毒副作用。因此，本研究選取3 000 ng/mL達(dá)比加群進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

為了進(jìn)一步檢測(cè)達(dá)比加群是否可持續(xù)性抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖，本研究將達(dá)比加群(3 000 ng/mL)與凝血酶共同刺激HASM 細(xì)胞12～72 h后檢測(cè)各培養(yǎng)孔吸光度值。如圖6所示，從24 h開始，達(dá)比加群呈時(shí)間依賴性地抑制了凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖(P<0.05)。

*：P<0.01,**：P<0.001，與凝血酶組比較。

圖5 達(dá)比加群濃度依賴性地抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖

*：P<0.05,**：P<0.01，與單用凝血酶相比。

圖6 達(dá)比加群時(shí)間依賴性地抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖

3 討 論

近年來，肺內(nèi)凝血已成為哮喘防治的研究熱點(diǎn)。多家權(quán)威雜志新近報(bào)道，凝血不僅發(fā)生在受損血管，還發(fā)生在哮喘炎性氣道[7-8]。研究發(fā)現(xiàn)哮喘患者處于血栓前狀態(tài)。與健康對(duì)照組相比，哮喘患者血管性血友病因子抗原(vWF)，血漿D二聚體和纖溶酶原激活物抑制劑-1顯著升高[9]；凝血功能主要包括活化部分凝血活酶時(shí)間、血漿凝血酶時(shí)間、血漿凝血酶原時(shí)間縮短和纖維蛋白原顯著升高[10]。在哮喘炎癥狀態(tài)下，肺內(nèi)毛細(xì)血管網(wǎng)通透性增加，凝血因子、組織因子大量涌入肺泡間隔，從而啟動(dòng)內(nèi)、外源性凝血途徑，導(dǎo)致肺臟局部處于高凝狀態(tài)，凝血酶過度產(chǎn)生[8]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，哮喘急性發(fā)作或穩(wěn)定期哮喘患者局部肺組織予以過敏原激發(fā)后，凝血酶活性顯著高于健康對(duì)照組[11]。過度激活的凝血酶通過刺激氣道平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞收縮、增殖，誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子、生長因子產(chǎn)生而廣泛參與哮喘氣道高反應(yīng)性、氣道重塑過程。因此，凝血酶已成為哮喘患者降低氣道高反應(yīng)性，延緩氣道重塑的重要靶點(diǎn)。

已有研究報(bào)道凝血酶及凝血酶受體激活肽可誘導(dǎo)豚鼠氣道及離體支氣管環(huán)收縮[12]。本研究從細(xì)胞水平證實(shí)凝血酶可刺激HASM細(xì)胞骨架重組和收縮蛋白α-actin表達(dá)。并且本研究進(jìn)一步證明新型高效的直接凝血酶抑制劑達(dá)比加群可阻斷凝血酶的這一作用(圖2、3)。這與達(dá)比加群在肺成纖維細(xì)胞可抑制凝血酶誘導(dǎo)的膠原凝膠收縮和細(xì)胞骨架重組的結(jié)果一致[4]。

AngⅡ、TGF-β1、PDGF、凝血酶都是良好的HASM細(xì)胞有絲分裂原。已有研究發(fā)現(xiàn)，凝血酶可通過誘導(dǎo)MAPK磷酸化刺激HASM細(xì)胞增殖[13]。本研究對(duì)多種促生長介質(zhì)的增殖能力進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果顯示凝血酶的促增殖能力顯著強(qiáng)于AngⅡ，僅次于陽性對(duì)照10%FBS(圖4)。這可能與凝血酶和AngⅡ各自受體在HASM細(xì)胞的表達(dá)水平及靶器官不同有關(guān)。

本研究通過達(dá)比加群濃度梯度和時(shí)間進(jìn)程相關(guān)試驗(yàn)證明，達(dá)比加群可呈濃度與時(shí)間相關(guān)性抑制凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞增殖(圖5、6)。這與達(dá)比加群可阻斷凝血酶誘導(dǎo)的人肺成纖維細(xì)胞增殖的結(jié)果是一致的。但是本試驗(yàn)中選取的達(dá)比加群最佳濃度3 000 ng/mL明顯高于其在人肺成纖維細(xì)胞的濃度1 000 ng/mL。雖然本試驗(yàn)中1 000 ng/mL達(dá)比加群也能抑制凝血酶的作用，這可能是由于HASM細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞對(duì)達(dá)比加群的敏感性以及對(duì)達(dá)比加群溶解劑二甲基亞砜(DMSO)的耐受程度不同。DMSO作為助溶劑刺激細(xì)胞超過一定濃度時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長產(chǎn)生抑制作用；國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的濃度范圍因細(xì)胞種類不同而異，公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)為DMSO濃度在0.1%以下時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長無影響。在本試驗(yàn)中，5 000 ng/mL達(dá)比加群組的DMSO濃度為0.5%，已經(jīng)對(duì)HASM細(xì)胞的生長產(chǎn)生了抑制作用。另外，凝血酶的生物學(xué)效應(yīng)主要通過水解凝血酶受體PAR1介導(dǎo)。已有研究證實(shí)，達(dá)比加群能夠通過阻斷凝血酶催化水解PAR1，減少下游信號(hào)通路ERK1/2和AKT的磷酸化，并降低臍靜脈和腦內(nèi)皮細(xì)胞的通透性[14]。達(dá)比加群在HASM細(xì)胞對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的收縮和增殖的抑制作用是否也與PAR1相關(guān)以及下游信號(hào)通路變化如何，將是本課題組后續(xù)研究的方向。

目前，糖皮質(zhì)激素是治療哮喘的主要藥物，但這只能控制哮喘氣道炎癥卻不能充分抑制氣道平滑肌細(xì)胞增殖等導(dǎo)致的氣道重塑。另外，在臨床試驗(yàn)中，對(duì)哮喘患者予以肝素為代表的抗凝治療只能緩解哮喘患者主觀癥狀，而肺功能無明顯改善[15]。究其原因可能與肝素不能特異阻斷凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)及凝血酶有關(guān)。達(dá)比加群是繼華法林之后50年來上市的首個(gè)新型口服抗凝血藥物，已被美國等多個(gè)西方國家權(quán)威指南推薦替代華法林用于心房顫動(dòng)的抗凝治療，其適應(yīng)證還在不斷拓寬。與維生素K拮抗劑華法林相比，達(dá)比加群不僅能特異阻斷凝血酶，還具有起效快，可預(yù)見的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)，無需定期監(jiān)測(cè)凝血功能，不易與食物及其他藥物發(fā)生相互作用等優(yōu)勢(shì)[16]。研究顯示，在屋塵螨誘導(dǎo)的哮喘小鼠模型中，達(dá)比加群能夠抑制Th2型細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-4水平。而本研究結(jié)果證明，達(dá)比加群可顯著抑制哮喘關(guān)鍵因子凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞收縮和增殖。因此，達(dá)比加群依賴其抗凝特異性及藥理學(xué)優(yōu)勢(shì)可能成為新的哮喘抗凝治療藥物。

總之，凝血酶誘導(dǎo)的HASM細(xì)胞收縮和增殖能被達(dá)比加群所抑制。本研究結(jié)果為達(dá)比加群成為治療哮喘氣道高反應(yīng)性和氣道重塑藥物提供了細(xì)胞學(xué)證據(jù)。

[1]Brims FJH,Chauhan AJ,Higgins B,et al.Coagulation factors in the airways in moderate and severe asthma and the effect of inhaled steroids[J].Thorax,2009,64(12):1037-1043.

[2]SchoutenM,LeviM.Earlyactivationofcoagulation after allergen challenge in patients with allergic asthma[J].J Throm Haemostasis,2009,7(9):1592-1594.

[3]Chambers RC.Procoagulant signalling mechanisms in lung inflammation and fibrosis:novel opportunities for pharmacological intervention?[J].Br J Pharmacol,2008,153 Suppl 1:S367-S378.

[4]Bogatkevich GS,Ludwicka-Bradley A,Silver RM.Dabigatran,a direct thrombin inhibitor,demonstrates antifibrotic effects on lung fibroblasts[J].Arth Rheum,2009,60(11):3455-3464.

[5]Bogatkevich GS,Ludwicka-Bradley A,Nietert PJ,et al.Antiinflammatory and antifibrotic effects of the oral direct thrombin inhibitor dabigatran etexilate in a murine model of interstitial lung disease[J].Arth Rheum,2011,63(5):1416-1425.

[6]霍雅婷，程遠(yuǎn)雄，賴文巖，等.Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路在誘導(dǎo)氣道平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積中的作用[J].重慶醫(yī)學(xué),2015,44(35):4897-4899.

[7]Phimister EG,Lambrecht BN,Hammad H.Asthma and Coagulation[J].New Engl J Med,2013,369(20):1964-1966.

[8]de Boer JD,Majoor CJ,van T Veer C,et al.Asthma and coagulation[J].Blood,2012,119(14):3236-3244.

[9]Sneeboer MM,Majoor CJ,de Kievit A,et al.Prothrombotic state in patients with severe and prednisolone-dependent asthma[J].J Allergy Clin Immunol,2015,137(6):1727-1732.

[10]趙丹,哈依努爾，克麗別娜·吐爾遜.支氣管哮喘患者凝血功能狀態(tài)的臨床分析[J].臨床肺科雜志,2013，18(9):1701-1702.

[11]Terada M,Kelly EA,Jarjour NN.Increased thrombin activity after allergen challenge:a potential link to airway remodeling?[J].Am J Respir Crit Care Med,2004,169(3):373-377.

[12]Cicala C,Bucci M,De Dominicis G,et al.Bronchoconstrictor effect of thrombin and thrombin receptor activating peptide in guinea-pigs in vivo[J].Br J Pharmacol,1999,126(2):478-484.

[13]Lin CC,Shyr MH,Chien CS,et al.Thrombin-stimulated cell proliferation mediated through activation of Ras/Raf/MEK/MAPK pathway in canine cultured tracheal smooth muscle cells[J].Cell Signal,2002,14(3):265-275.

[14]Chen B,Soto AG,Coronel LJ,et al.Characterization of thrombin-bound dabigatran effects on protease-activated receptor-1 expression and signaling in vitro[J].Mol Pharmacol，2015,88(1):95-105.

[15]Monagle K,Ryan A,Hepponstall M,et al.Inhalational use of antithrombotics in humans:Review of the literature[J].Throm Res，2015,136(6):1059-1066.

[16]Scaglione F.New oral anticoagulants:comparative pharmacology with vitamin K antagonists[J].Clin Pharm,2013,52(2):69-82.

Influence of dabigatran on thrombin induced contraction and proliferation of human airway smooth muscle cells*

YaoZhihui1,ChengYuanxiong1△,LaiWenyan2,CaiKaican3

(1.DepartmentofRespiration;2.DepartmentofCardiology;3.DepartmentofCardiothoracicSurgery,NanfangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510515,China)

Objective To investigate the effects of dabigatran on thrombin-induced contraction and proliferation of human airway smooth muscle (HASM) cells.Methods The primary cultured human bronchial smooth muscle cells were used in this experiment.The immunofluorescence method was used to observe the morphological changes of HASM cells contraction,and the α-actin protein relative expression was analyzed by Western blot.The proliferation ability of HASM cells was assessed by cck8 assay.Results Dabigatran could significantly inhibit the thrombin induced HASM cytoskeleton reorganization and α-actin protein expression (P<0.05).In addition,in the comparison of the stimulated proliferation ability of HASM cells among AngⅡ,TGF-β1,PDGF,and Mch and thrombin,thrombin was stronger than AngⅡ,and was second to the 10%FBS (P<0.05).Moreover,thrombin-induced HASM cell proliferation was inhibited by dabigatran in a concentration-dependent and time-dependent manners (P<0.05).Conclusion Dabigatran can significantly inhibit the contraction and proliferation of HASM cells induced by thrombin.

smooth muscle cells;thrombin;dabigatran;ngiotensinⅡ;transforming growth factor-β

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.31.001

廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(s2012010009036)；南方醫(yī)院院長基金資助項(xiàng)目(2014A001)。

姚智慧(1988-)，碩士，住院醫(yī)師，主要從事哮喘氣道重塑方面的研究?！?/p>

，E-mail:drchengyx@qq.com。

R541.75

A

1671-8348(2016)31-4321-03

2016-02-18

2016-06-06)