李海英　崔敏　牟清海　曹璋

【摘 要】目的：探討胃癌組織中TBX3的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的相關(guān)性。方法：采用免疫組織化學(xué)對130例胃癌組織中TBX3的表達(dá)進(jìn)行檢測，分析其與腫瘤臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果：胃癌組織中TBX3陽性表達(dá)率為36.2%（47/130），TBX3在胃癌組織中的陽性表達(dá)在不同胃癌大小組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。TBX3在胃癌組織中的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、病理分型、腫瘤部位、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、靜脈內(nèi)有無癌栓、神經(jīng)有無侵犯均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：TBX3可能涉及促進(jìn)胃癌的進(jìn)展、侵襲、轉(zhuǎn)移，可作為提示胃癌患者的有效預(yù)后預(yù)測因子之一。

【關(guān)鍵詞】胃癌；TBX3；免疫組化

【Abstract】Objective To investigate the expression of TBX3 in gastric carcinoma.Methods Immunohistochemical methods was used to detect the expressions of TBX3 in 130 samples of gastric carcinoma.Results We examined the positive expression rate of TBX3 in big gastric cancer was significantly higher than that in small gastric cancer tissues.Statistically，the expression of the TBX3 protein were not associated with clinical and pathological parameters，including sex，age，pathological type，tumor location，lymph node metastasis，intravenous tumor thrombus，have infringement nerve（P>0.05）.Conclusions These results suggest that expression of the TBX3 play a role in the development of gastric carcinoma，which may provide a new target of therapy.

【Key words】TBX3；Immunohistochemistry；Gastric carcinoma

0 前言

原發(fā)性胃癌（primary gasytic cancinoma，pGC）是我國比較常見的惡性腫瘤之一，同樣也是癌癥患者死亡的主要疾病之一，其發(fā)病原因尚未完全明了，但腫瘤的轉(zhuǎn)移無疑是胃癌病人術(shù)后死亡的主要原因。雖然傳統(tǒng)的手術(shù)切除一直被臨床醫(yī)生視為是一種有效治療胃癌的方法，但是患者的生存時間、預(yù)后一直是與胃癌腫瘤的大小、神經(jīng)的侵犯，淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)連。所以，尋找到胃癌腫瘤轉(zhuǎn)移的生物學(xué)行為有關(guān)的特異性指標(biāo)，將非常有助于臨床上選擇相應(yīng)的治療方法進(jìn)而對其預(yù)后作出正確的評價。

目前研究認(rèn)為，T-box（ TBX） 基因家族里的成員在無脊椎動物和脊椎動物的胚胎發(fā)育過程中有重要的調(diào)節(jié)作用，特別在動物胚胎的形態(tài)和組織發(fā)生過程中更為顯著[1]。TBX3基因作為一個轉(zhuǎn)錄因子從而調(diào)節(jié)其下游效應(yīng)基因的表達(dá)[2] 。TBX3基因之所以與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，是因為其屬于調(diào)控發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子[3]，本實驗研究TBX3基因在胃癌中的表達(dá)水平，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取了濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院和齊魯醫(yī)院桓臺分院（2010年12月～2013年6月）行手術(shù)切除，病理科有完整臨床資料，病理切片證實為胃癌的患者標(biāo)130例，術(shù)前均未進(jìn)行放療及化療或靶向治療、均行胃癌根治術(shù)、病理切片均經(jīng)資深病理專家按照2010年版WHO胃腸道腫瘤臨床病理學(xué)分類及分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，所選病例均經(jīng)病理學(xué)確診為胃腺癌。

1.2 材料及試驗設(shè)備

所有的病理標(biāo)本都經(jīng)過10%的甲醛固定，脫水處理及常規(guī)石蠟包埋，蠟塊作5mm切片備用，以作免疫組化學(xué)用片。胃癌石蠟切片脫蠟水化，枸櫞酸鈉抗原修復(fù)，加入TBX3一抗4℃孵育過夜，滴加二抗。PBS沖洗后滴加DAB顯色，待腫瘤細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)蛋白著色而背景未著色時終止顯色。蘇木精復(fù)染，經(jīng)鹽酸酒精、氨水、梯度乙醇、二甲苯處理后封片，鏡檢。以PBS代替一抗作為陰性對照。免抗人TBX3多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化兩步法染色并嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作，陰性對照組：PBS磷酸緩沖液代替-抗體作陰性對照。

1.3 陽性結(jié)果判定

TBX3染色定位于細(xì)胞核，采用半定量積分法結(jié)合Berry的分級法，按染色程度及陽性細(xì)胞數(shù)所占的比例來計分確定表達(dá)水平分為4級，腫瘤細(xì)胞染色與陰性對照組相同者計分為0，染色呈較弱的淡黃色計1分，染色呈黃色或深黃色計2分，染色呈棕黃色計3分。按陽性細(xì)胞數(shù)的所占比例分為4級，陽性細(xì)胞數(shù)<10%計為1分，陽性細(xì)胞數(shù)10-25%計為2分；陽性細(xì)胞數(shù)25-75%計為3分，陽性細(xì)胞數(shù)≥75%，計為4分。以上兩項分?jǐn)?shù)的乘積0-3為（-），4-5分為（+），6-7分為（++），8分以上為（+++），小于等于3分為陰性結(jié)果，大于3分為陽性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法處理

應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，胃癌組織與癌旁組織中TBX3陽性表達(dá)率的比較，臨床及病理因素中TBX3表達(dá)率的差異性均采用x2 檢驗，各組之間的多重比較采用Nemenyi檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)的意義。

2 結(jié)果

2.1 TBX3與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

胃癌組織中TBX3陽性表達(dá)率為36.2%（47/130），130例胃癌患者按照性別、年齡、腫瘤大小、病理分型、腫瘤部位、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無靜脈內(nèi)癌栓、有無神經(jīng)侵犯等分成各組，結(jié)果顯示，腫瘤越大的患者的TBX3表達(dá)水平明顯高于腫瘤小的患者（P<0.05），但是與胃癌患者的性別、年齡、病理分型、腫瘤部位、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無靜脈內(nèi)癌栓、有無神經(jīng)侵犯均無明顯的相關(guān)性（P>0.05），見表1。

3 討論

胃癌作為世界第三大常見惡性腫瘤，其死亡率也位于所有腫瘤的前3位。中晚期胃癌患者預(yù)后差，中位生存時間短。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，探索新的治療靶點及預(yù)后預(yù)測指標(biāo)對于制定腫瘤整體治療策略十分重要。胃癌的發(fā)生與發(fā)展是一個復(fù)雜性的多階段的過程，胃癌的治療策略研究目前多集中于多學(xué)科的綜合治療，這就要求對病人進(jìn)行早期預(yù)防、診斷、療效評價。目前現(xiàn)在較常用的胃癌腫瘤標(biāo)記物有CEA、CA724、CA19-9等，但是這些指標(biāo)檢測的特異性及靈敏度不夠高， 因此，找尋新的血清標(biāo)記物就顯得更加重要。目前很多學(xué)者也對胃癌及癌前病變的不同階段和不同病理類型的分子改變進(jìn)行了大量的研究。

TBX3基因位于人染色體12號短臂2區(qū)4帶1亞帶，其編碼的蛋白包含了723個氨基酸[4]。在腫瘤細(xì)胞中，TBX3首先通過多種機制被上調(diào)，然后通過參與多種信號通路，最終促進(jìn)相關(guān)腫瘤的侵襲、增殖和轉(zhuǎn)移。TBX3低表達(dá)后可減少一種細(xì)胞類型增殖凋亡的依賴性增加[5-7]。例如，肝癌細(xì)胞中，被激活的果蠅蛋白促使beta-catenin轉(zhuǎn)移至核內(nèi)，通過T細(xì)胞因子直接作用于它們的靶目標(biāo)TBX3的啟動子，最終激活了TBX3的表達(dá)，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖[8]。此外，TBX3過度表達(dá)可以導(dǎo)致主要抑制p53途徑的p19 ARF 表達(dá)的下調(diào)，從而抑制細(xì)胞的衰老[9-11]。

本研究檢測130例胃癌組織中的TBX3的表達(dá)情況，結(jié)果顯示TBX3在胃癌癌旁組織組中低表達(dá)，而在胃癌組織中高表達(dá)，其在胃癌組織組中的陽性表達(dá)率與胃癌癌旁組織中的陽性表達(dá)率，有統(tǒng)計學(xué)意義；TBX3在胃癌的高年齡組中的陽性表達(dá)率高于低年齡組（P<0.05）；腫瘤越大的患者的TBX3表達(dá)水平明顯高于腫瘤小的患者（P<0.05）；說明隨著患胃癌患者的年齡增大及胃癌腫瘤組織的長大，TBX3的蛋白陽性表達(dá)率亦隨之高升，進(jìn)而提示，其表達(dá)不僅在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，與腫瘤生長的生物學(xué)特性密切相關(guān)。

綜上所述，TBX3可能跟胃癌的進(jìn)展相關(guān)聯(lián)，可以充當(dāng)患者的預(yù)后生物學(xué)標(biāo)志物之一。但由于腫瘤信號途徑的錯綜復(fù)雜千絲萬縷，TBX3在腫瘤中形成、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等過程中的信號通路仍不十分清楚，但是隨著人們對TBX3基因進(jìn)一步深入的研究，其有望成為治療腫瘤的新靶點[12]。

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[責(zé)任編輯：田吉捷]