覃雨陽(yáng)，李雪梅，馬 軍，吳 軍，馮淑萍，熊 毅，何奇松*

(1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530005；2.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西南寧 530001)

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廣西地區(qū)豬偽狂犬病病毒gE基因的序列分析

覃雨陽(yáng)1，李雪梅1，馬 軍1，吳 軍1，馮淑萍2，熊 毅2，何奇松2*

(1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530005；2.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西南寧 530001)

探討廣西地區(qū)近期流行豬偽狂犬病病毒(PRV)gE基因的變異規(guī)律，以及與國(guó)內(nèi)外毒株的基因差異性，為制定有效的豬偽狂犬病防控措施提供科學(xué)依據(jù)。對(duì)廣西不同地區(qū)流行的PRV gE基因進(jìn)行克隆和序列測(cè)定，并與國(guó)內(nèi)外PRV毒株的gE基因進(jìn)行同源性比對(duì)分析，構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)。廣西地區(qū)流行的PRV與廣東Fa株、湖北HD株的gE基因核苷酸的同源性與編碼氨基酸序列同源性最高，分別為99.8%和99.7%；廣西地區(qū)流行毒株間gE基因同源性達(dá)99.5%～99.8%，推導(dǎo)氨基酸序列同源性為98.8%～99.7%,廣西地區(qū)近期流行PRV毒株的變異不明顯。4株P(guān)RV毒株與近年國(guó)內(nèi)分離的毒株ZK、NY、QBA、HNXX、MZ1處于同一分支上，遺傳關(guān)系較近；而與國(guó)內(nèi)經(jīng)典株Ea、GDSH遺傳關(guān)系稍遠(yuǎn)，與國(guó)外分離株Yangsan、NiA3、Becker、Rice處于不同的遺傳分支，保持較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系。4株P(guān)RV gE基因的48位點(diǎn)氨基酸和其中的GXNN1、GXBH1的496位點(diǎn)氨基酸增加1個(gè)天冬氨酸的插入，具有變異株的特征。廣西地區(qū)流行的PRV毒株屬于目前我國(guó)主要流行的變異株，其氨基酸的插入將對(duì)變異株的分子流行病學(xué)調(diào)查提供重要的參考。

偽狂犬病病毒；gE基因；序列測(cè)定；同源性分析；豬

豬偽狂犬病(Porcine pseudorabies，PR)是由豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一種急性敗血性傳染病。豬感染偽狂犬病后臨診癥狀因日齡而異，成年豬一般呈隱性感染，成為保毒宿主，懷孕母豬可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎和種豬不育等癥狀。仔豬通常表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀、麻痹死亡，15日齡以?xún)?nèi)的仔豬病死率可達(dá)100%，斷奶仔豬發(fā)病率可達(dá)40%，病死率20%左右[1]。宋宏曉等[2]檢測(cè)臨床上伴有神經(jīng)癥狀的病豬病料樣本發(fā)現(xiàn)，豬群中PRV、豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)和豬瘟病毒(CSFV)3種引起神經(jīng)癥狀的免疫缺陷性疫病病毒中，以PRV單獨(dú)感染情況最為嚴(yán)重。楊慶芳等[3]從病死仔豬的腦、肺、肝組織病料中分離出1株疑似PRV毒株，經(jīng)克隆、測(cè)序分析，證實(shí)所分離病毒為PRV。PRV為雙股DNA病毒，核酸大小約150kb，其中的TK基因、gE基因和gI基因決定著PRV對(duì)豬的毒力，是其重要的毒力因子。gE基因編碼蛋白的氨基酸序列中第125位的纈氨酸和第126位的半胱氨酸對(duì)病毒的生物學(xué)功能有重要的影響，并且gE基因是所有野毒株均表達(dá)的一類(lèi)糖蛋白[4]。因此，研究分析PRV的gE基因序列，了解其變異規(guī)律及其與國(guó)內(nèi)外毒株基因間的差異，對(duì)有效防控豬偽狂犬病的暴發(fā)和流行具有重要意義。白麗麗等[5]設(shè)計(jì)一對(duì)擴(kuò)增PRV gE基因的特異性引物，建立可以區(qū)分PRV野毒株與疫苗株的PCR檢測(cè)方法。并從廣東分離得到1株P(guān)RV毒株，經(jīng)克隆測(cè)序后與其他PRV gE基因序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)其核苷酸序列與其他PRV毒株的同源性介于98.3%～99.9%之間，與PRV Ea株的親緣關(guān)系最近為99．9%。姚敬明等[6]選用國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口的豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗，用4種不同的免疫程序，對(duì)母豬和仔豬進(jìn)行了免疫試驗(yàn)，結(jié)果都產(chǎn)生了良好的免疫效果。占松鶴等[7]對(duì)8株P(guān)RV安徽分離株的gE基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析，對(duì)gE基因序列核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列同源性分析表明，分離株之間的核苷酸同源性分別為96.8%～99.7%，氨基酸序列同源性為97.9%～100.0%；與國(guó)內(nèi)外參考毒株的核苷酸同源性為97.0%～99.7%，氨基酸序列同源性為97.4%～100.0%。周松峰等[8]通過(guò)對(duì)PRV gE基因主要抗原表位區(qū)(KgE)進(jìn)行表達(dá)，獲得了表達(dá)量高、免疫原性好的KgE蛋白，為研制靈敏度高、特異性好的膠體金試紙條打下良好基礎(chǔ)。張文通等[9]于2013年從使用gE基因缺失疫苗豬場(chǎng)的病料中檢測(cè)出PRV野毒。筆者對(duì)2013年廣西地區(qū)18個(gè)種豬場(chǎng)送檢血清進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其與廣西本地區(qū)付薇等[10]報(bào)道廣西PRV陽(yáng)性感染率(0.76%)相比較高，也比黃夏[11]2005年對(duì)廣西部分種豬場(chǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率(2.74%)高，說(shuō)明近年來(lái)廣西地區(qū)PRV的野毒感染率呈逐年上升趨勢(shì)，這也與2011年以來(lái)，全國(guó)大部分地區(qū)PR的發(fā)病率升高的情況相符。由于PRV野毒在我國(guó)豬場(chǎng)的長(zhǎng)期存在，并隨著養(yǎng)殖模式、環(huán)境因素的變化，增加了PRV野毒株發(fā)生變異的可能性，gE基因存在的變異對(duì)野毒株與疫苗株的鑒別診斷起到極大作用，因此有必要及時(shí)掌握gE基因的變異規(guī)律，從而研究廣西地區(qū)PRV的變異趨勢(shì)，為預(yù)防豬偽狂犬病提供參考。對(duì)廣西不同地區(qū)流行的PRV gE基因進(jìn)行克隆和序列測(cè)定，并與國(guó)內(nèi)外分離的PRV毒株的gE基因進(jìn)行同源性比對(duì)和遺傳進(jìn)化分析，從分子水平上了解廣西PRV的流行和親緣關(guān)系以及推測(cè)病毒的來(lái)源，為制定有效防控豬偽狂犬病的措施和制備合適的疫苗提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品和試劑 本試驗(yàn)樣品為2013年10月～2014年4月間廣西南寧、北海和玉林三市送檢的疑似偽狂犬病病死豬病料共33份。送檢材料為無(wú)菌采集有明顯病變的腦、脾臟、胰臟和淋巴組織樣品。血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒、DNA Marker DL 2000、瓊脂糖凝膠回收試劑盒、高純度小質(zhì)粒抽提取試劑盒，為天根生化科技(北京)有限公司產(chǎn)品；M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、HIR抑制劑、限制性?xún)?nèi)切酶EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ為寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品；TransTaqHiFi DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、pEASY-T1載體、Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞為北京全式金生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 引物 參照GenBank已公布的Ea株、GDSH株等PRV參考毒株的基因組核苷酸序列，應(yīng)用Primer 5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)(表1)，包括PRV gE基因的特異性診斷引物(P1/P2)及gE基因的PCR擴(kuò)增引物(E1/E2)，兩對(duì)引物均由寶生物工程(大連)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 病毒DNA的提取及PCR反應(yīng)程序 采用天根血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒來(lái)提取PRV的核酸；PCR反應(yīng)體系25.0μL：10×TransTaqHiFi buffer(含Mg2+) 5.0μL，2.5mmol/L dNTPs 2.0μL，上、下游引物各0.5μL，TransTaqHiFi DNA Polymerase 0.3μL，cDNA 5.0μL，ddH2O至25.0μL。PCR程序：94℃ 5min;94℃ 50s，65℃ 50s，72℃ 50s，35個(gè)循環(huán);72℃ 10min。反應(yīng)結(jié)束后取7.0μL PCR產(chǎn)物用10g/L瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，然后置于凝膠成像系統(tǒng)中觀(guān)察攝影結(jié)果。

表1 本研究所用引物Table 1 Primers used in this study

1.2.2 gE基因PCR擴(kuò)增 gE基因的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系25.0μL：DNA模板5.0μL，2×GC buffer 12.5μL，2.5mmol/L dNTPs 4.0μL，上、下游引物各1.0μL，TransTaqHiFi DNA Polymerase 0.5μL，MgCl21.0μL。PCR程序：94℃ 5min;94℃ 50s，65℃ 50s，72℃ 90s，35個(gè)循環(huán)；72℃ 10min。反應(yīng)結(jié)束后，PCR產(chǎn)物用10g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)和回收。

1.2.3 PCR產(chǎn)物回收及測(cè)序分析 回收采用天根公司通用型DNA純化回收試劑盒進(jìn)行，然后將回收產(chǎn)物與pEASY-T1載體連接，連接體系(5.0μL)：膠回收產(chǎn)物4.0μL，pEASY-T11.0μL。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞，然后涂布于LA固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)12h后挑取白色菌落，接種到含有100μg/mL氨芐青霉素(Amp)的LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)12h～16h。取1.0mL菌液抽提重組質(zhì)粒，經(jīng)酶切及PCR鑒定，挑選陽(yáng)性質(zhì)粒送至寶生物工程(大連)有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果用Lasergene 7.0軟件進(jìn)行序列拼接，以MegAlign比較分析其與GenBank中下載的參考毒株基因序列及其推導(dǎo)氨基酸序列的同源性，再用MEGA 5.0軟件構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù)。

2 結(jié)果

2.1 陽(yáng)性樣品的鑒定結(jié)果

用PRV gE基因的特異性診斷引物(P1/P2)對(duì)所收集的33份病料樣品進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有4份陽(yáng)性病料，其余29份為陰性病料。以4份陽(yáng)性樣品作為本試驗(yàn)研究對(duì)象，根據(jù)來(lái)源地不同將其命名為GXNN1、GXBH1、GXYL1和GXYL2(圖1)。

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2000；1.陰性對(duì)照；2～5.GXNN1、GXBH1、GXYL1、GXYL2
M.DNA Marker DL 2000；1.Negative control；2-5.GXNN1，GXBH1，GXYL1，GXYL2

圖1 PRV PCR陽(yáng)性產(chǎn)物電泳
Fig.1 Electrophoresis of PRV PCR positive products

2.2 gE基因PCR擴(kuò)增及測(cè)序驗(yàn)證

PCR擴(kuò)增4份豬偽狂犬陽(yáng)性樣品的gE基因，經(jīng)10g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，gE基因約1740bp(圖2)，與預(yù)期結(jié)果一致。重組質(zhì)粒pEASY-T1-gE經(jīng)EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切鑒定，酶切結(jié)果出現(xiàn)兩條帶，與載體帶片段大小(約2700bp)及目的基因片段大小(約1740bp)相符(圖3)。將陽(yáng)性重組質(zhì)粒送至寶生物工程(大連)有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果為GXNN1、GXBH1的gE基因全長(zhǎng)為1740bp，而GXYL1、GXYL2的 gE基因全長(zhǎng)為1737bp。

2.3 gE基因核苷酸序列及其推導(dǎo)氨基酸序列的同源性

由表2可以看出，4株廣西流行PRV的gE基因與國(guó)內(nèi)外8株P(guān)RV gE基因核苷酸及其推導(dǎo)氨基酸序列同源性分別為97.4%～99.8%和95.0%～99.7%，表明近期廣西地區(qū)流行的PRV與國(guó)內(nèi)外的PRV毒株之間存在的差異較小。廣西地區(qū)流行毒

株間gE基因核苷酸同源性達(dá)99.5%～99.8%，推導(dǎo)氨基酸序列同源性為98.8%～99.7%，說(shuō)明廣西地區(qū)流行毒株間的同源性較高，其gE基因具有嚴(yán)格的保守性(表2)。

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2000；1.陰性對(duì)照；2～5.GXNN1、GXBH1、GXYL1、GXYL2
M.DNA Marker DL 2000；1.Negative control；2-5.GXNN1，GXBH1，GXYL1，GXYL2

圖2 PRV gE基因的PCR產(chǎn)物電泳
Fig.2 Electrophoresis of PCR products of PRV gE genes

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2000；1.陰性對(duì)照；2～5.GXNN1、GXBH1、GXYL1、GXYL2
M.DNA Marker DL 2000；1.Negative control；2-5.GXNN1，GXBH1，GXYL1，GXYL2

圖3 重組質(zhì)粒pEASY-T1-gE的雙酶切鑒定
Fig.3 Identification of pEASY-T1-gE by double enzyme digestion

表2 4株廣西流行PRV gE基因核苷酸序列及其推導(dǎo)氨基酸序列的同源性Table 2 Homologies of nucleotide and amino acid sequences of gE genes of 4GX strains

2.4 氨基酸變異位點(diǎn)分析結(jié)果

將4株廣西流行PRV與國(guó)內(nèi)外其他毒株的gE基因編碼氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)4株P(guān)RV gE基因中的2個(gè)明顯氨基酸變異位點(diǎn)。4株P(guān)RV gE基因的48位點(diǎn)氨基酸與國(guó)內(nèi)分離株GDSH、Min-A及國(guó)外分離株Beke、Rice相比多了1個(gè)天冬氨酸(D)的插入，在核苷酸上的表現(xiàn)為在其142-144位點(diǎn)上連續(xù)3個(gè)堿基GAC的插入。其中的2株GXNN1、GXBH1與Ea、GDSH、Beke、Rice相比在496位點(diǎn)氨基酸亦增加了1個(gè)天冬氨酸(D)的插入，在核苷酸上表現(xiàn)為在1488-1490位點(diǎn)上存在連續(xù)3個(gè)堿基CGA的插入，與趙鴻遠(yuǎn)等[12]研究的從吉林和黑龍江分離的2株P(guān)RV變異株的gE基因氨基酸變異結(jié)果基本一致。

2.5 遺傳進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果

本研究用MEGA 5.0軟件分析4株廣西地區(qū)流行PRV毒株gE基因序列與GenBank上國(guó)內(nèi)外已發(fā)表參考毒株的親緣性與進(jìn)化關(guān)系，并構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)。由圖4結(jié)果表明，廣西4株P(guān)RV毒株與近年國(guó)內(nèi)分離的毒株ZK、NY、QBA、HNXX、MZ1處于同一分支上，遺傳關(guān)系較近；與國(guó)內(nèi)經(jīng)典株Ea、GDSH的遺傳關(guān)系稍遠(yuǎn)，而與國(guó)外分離株如Yangsan、NiA3、Becker、Rice處于不同的遺傳分支上，具有較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系。

圖4 基于gE基因的PRV遺傳進(jìn)化樹(shù)
Fig.4 Phylogenetic tree based on nucleotide sequences of PRV gE genes

3 討論

目前，關(guān)于PRV的分子流行病學(xué)調(diào)查主要是通過(guò)對(duì)其全基因或某個(gè)特定區(qū)域核苷酸序列(如gE基因)及編碼氨基酸序列進(jìn)行測(cè)定與變異分析，然后繪制遺傳進(jìn)化樹(shù)追溯其起源。在眾多的病毒蛋白中，gE糖蛋白是其主要毒力因子之一，并作為標(biāo)志基因用來(lái)區(qū)分疫苗免疫和野毒感染[13]。本研究結(jié)果顯示，廣西地區(qū)流行的PRV與廣東Fa株、湖北HD株的gE基因核苷酸的同源性與編碼氨基酸序列同源性最高，分別為99.8%和99.7%?？梢?jiàn)，廣西地區(qū)流行PRV毒株隨著時(shí)間推移，其變異情況并不明顯，廣西PRV為較保守的毒株，與王仰杰等[14]研究的廣西PRV GXBB株的gE基因核苷酸及其推導(dǎo)氨基酸的同源性差異變化趨勢(shì)基本相同。目前PRV變異株已成為我國(guó)主要流行的病毒株，而趙鴻遠(yuǎn)等[12]研究發(fā)現(xiàn)，變異株均在gE蛋白的第48位和第496位各存在1個(gè)天冬氨酸的插入，該插入突變可以作為鑒定PRV變異株的分子特征。本試驗(yàn)研究中，4株廣西PRV gE基因的48位點(diǎn)氨基酸均多了1個(gè)天冬氨酸的插入，其中的2株GXNN1、GXBH1在496位點(diǎn)氨基酸亦增加了1個(gè)天冬氨酸的插入。遇秀玲等[15]也發(fā)現(xiàn)于北京、山東及河北分離的PRV株在這兩個(gè)位點(diǎn)附近也各存在1個(gè)氨基酸的插入，與本試驗(yàn)的結(jié)果相一致。GXNN1、GXBH1與近年國(guó)內(nèi)分離的部分偽狂犬病病毒株如HB-HS、HB-LF、NY、QBA、MZ1在496氨基酸位點(diǎn)相對(duì)國(guó)外的分離株增加了1個(gè)天冬氨酸的插入，在核苷酸上表現(xiàn)為在1488-1490位點(diǎn)上存在連續(xù)3個(gè)堿基CGA的插入，這一分子特性與An T Q等[16]發(fā)現(xiàn)的PRV新毒株氨基酸變異位點(diǎn)具有相似之處，表明廣西當(dāng)前流行的PRV毒株與之前分離的毒株相比，發(fā)生了一定程度的變異，廣西近期分離的PRV毒株屬于PRV變異株。至于這些位點(diǎn)的變異對(duì)病毒的毒力及抗原性有何影響，是否為導(dǎo)致目前疫苗免疫失敗的原因，仍需進(jìn)一步研究。

從PRV的遺傳進(jìn)化樹(shù)可以看出，廣西4株P(guān)RV毒株與近年國(guó)內(nèi)分離的毒株ZK、NY、QBA、HNXX、MZ1處于同一分支上，遺傳關(guān)系較近；而與國(guó)內(nèi)經(jīng)典株Ea、GDSH遺傳關(guān)系稍遠(yuǎn)，與國(guó)外分離株Yangsan、NiA3、Becker、Rice明顯處于不同的遺傳分支，具有較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系。與劉芳等[17]研究的廣西5株P(guān)RV gE基因的進(jìn)化分析結(jié)果基本相同，表明廣西近期PRV流行毒株的變異趨勢(shì)大體一致，與當(dāng)前我國(guó)主要流行的病毒株遺傳關(guān)系較近。根據(jù)遺傳進(jìn)化分析可以發(fā)現(xiàn)，本研究的4株毒株GXNN1、GXBH1、GXYL1、GXYL2與國(guó)內(nèi)河南株ZK、NY、QBA、MZ1株處于同一分支上，遺傳關(guān)系也最為接近，推測(cè)本研究的4株P(guān)RV流行毒株與河南毒株可能有共同的祖源，這可能與當(dāng)前頻繁的農(nóng)產(chǎn)品交易有關(guān)。因此，要減少和根除PRV，首先要做好本地防疫工作；其次要全面對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行定期的血清學(xué)監(jiān)測(cè)，根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，及時(shí)調(diào)整免疫計(jì)劃；最后對(duì)于新引進(jìn)的后備豬及精液必須為來(lái)自PRVgE抗體陰性的豬群。

廣西地區(qū)流行的PRV毒株屬于目前我國(guó)主要流行的變異株，與國(guó)內(nèi)近期分離的毒株同源性較高，與國(guó)外分離株的同源性較低，與河南毒株可能有共同的祖源。gE蛋白第48位和第496位各有1個(gè)天冬氨酸的插入，這些分子特征將對(duì)變異株的分子流行病學(xué)調(diào)查提供重要的參考。因此，在今后應(yīng)進(jìn)一步研究該變異是否會(huì)改變PRV的毒力和抗原性，以更好地對(duì)豬偽狂犬病的診斷和防控提供科學(xué)依據(jù)。

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Sequence Analysis of gE Gene of Pseudorabies Virus in Guangxi

QIN Yu-yang1，LI Xue-mei1，MA Jun1，WU Jun1，F(xiàn)ENG Shu-ping2，XIONG Yi2，HE Qi-song2

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning,Guangxi,530005,China；2.GuangxiCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Nanning,Guangxi,530001,China)

The gE genes of pseudorabies virus (PRV) in Guangxi were analyzed to understand the genetic variation and the differences with other reference strains,and to provide scientific basis for prevention and control the PR.The gE genes of positive PRV samples collected from various regions of Guangxi were amplified,cloned and sequenced.The nucleotide and amino acid sequences were compared with the other reference strains from GenBank and the phylogenetic tree was constructed.The homologies of nucleotide sequences of Guangxi strains to Fa strain (Guangdong) and HD strain(Hubei) both were 99.8% and amino acid sequences both were 99.7%.The homologies of nucleotide and amino acid sequences of the Guangxi strains were 99.5%-99.8% and 98.8%-99.7% which show that the variations of Guangxi strains were not obvious in genetic levels.Phylogenetic analysis indicated that all the Guangxi strains had a closer relationship with those domestic isolates strains (ZK，NY，QBA，HNXX，MZ1) than that with foreign reference strains (Yangsan，NiA3，Becker，Rice).Guangxi strains and the domestic strains (ZK，NY，QBA，HNXX，MZ1) belong to the same evolution branch but differ with the foreign reference strains (Yangsan，NiA3，Becker，Rice).Insertions of Asp at site 48of gE genes of Guangxi strains and insertions of Asp at site 496of gE genes of GXNN and GXBH1strains suggested that these strains possess the characteristics of the variant PRV strains prevailing in China.Guangxi strains were the major epidemic strains in China and the amino acid insertion would provide important reference for variant stains in molecular epidemiology investigation.

Pseudorabies virus; gE gene; sequence analysis; homology comparison； pig

2014-12-18

廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目(桂科攻0815009-3-7)

覃雨陽(yáng)(1987-)，女，廣西貴港人，碩士研究生，主要從事動(dòng)物傳染病與分子病毒學(xué)研究。*通訊作者

S855.3;Q785

A

1007-5038(2016)01-0017-05