姬妍茹，楊慶麗，董艷，張正海，劉宇峰

（黑龍江省科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶 163319）

復(fù)配植物源殺菌劑對(duì)7種植物病原真菌離體抑制效果研究

姬妍茹，楊慶麗，董艷，張正海，劉宇峰

（黑龍江省科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶 163319）

試驗(yàn)本著盡量擴(kuò)大抑菌譜且成本低廉的原則，將初篩得到的離體抑菌效果顯著的植物提取物進(jìn)行不同組合，設(shè)計(jì)出3種復(fù)配植物源殺菌劑配方。利用配方對(duì)小麥赤霉病菌等7種主要植物病原真菌進(jìn)行離體抑菌效果測(cè)試，結(jié)果表明，配方1和2均表現(xiàn)出較好的抑制效果，尤其以配方1效果更佳，除對(duì)茄腐病菌的離體抑制率略低（53.96%）外，對(duì)水稻紋枯病菌等6種參試病原真菌的體外生長(zhǎng)抑菌率均高于65%，與對(duì)照化學(xué)殺菌劑福美雙相比差異極其顯著。

植物源提取物；復(fù)配；植物病原真菌；離體抑制活性

近年來，隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，對(duì)食品安全性的要求越來越高，化學(xué)殺菌劑的使用逐漸被禁止和限制，植物源殺菌劑因?yàn)榫哂胁牧先∽蕴烊唬軌蜉^好地降解，無殘留、無公害、不易產(chǎn)生抗藥性的特點(diǎn)［1］，越來越受到科研人員和農(nóng)戶的重視，因此有關(guān)植物源殺菌劑的研究已成為殺菌農(nóng)藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。

與植物源殺蟲劑相比，植物源殺菌劑的研究相對(duì)薄弱，在中國(guó)登記的品種較少。2003——2009年國(guó)內(nèi)只有14個(gè)單劑和9個(gè)混配制劑獲得登記［2］。目前市場(chǎng)上推廣的植物源殺菌劑多為仿生合成，主要代表有中國(guó)自產(chǎn)的以乙蒜素為主要成分的殺菌劑402［1］，孟昭禮等［3］研發(fā)的農(nóng)用殺菌劑“綠帝”和“銀泰”，德國(guó)巴斯夫公司研制的烯酰嗎啉和劉長(zhǎng)令［4］在此基礎(chǔ)上研制的氟嗎啉等。盡管國(guó)內(nèi)已有自主研制的植物源殺菌劑得到推廣使用，但商品化的品種仍然很少，與發(fā)達(dá)國(guó)家相比，這方面的研究仍然很弱，急需加大研究和開發(fā)力度，研制出高效、有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的新品種，以滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的需求。

本試驗(yàn)在以往試驗(yàn)［5］基礎(chǔ)上，將篩選得到的高效抑菌植物的提取物進(jìn)行復(fù)配組合成不同的配方，并且采用小麥赤霉病菌等常見植物病原真菌進(jìn)行抑菌效果比較，確定最佳抑菌配方，為進(jìn)一步開發(fā)新型植物源殺菌劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試真菌

a.水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani kuhn)，b.小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)，c.腐霉枯萎病菌(Pythium aphanidermatum)，d.馬鈴薯早疫病菌(Alternaria solani sorauer)，e.茄腐病菌（Fusarium solani），f.玉米圓斑病菌(Bipolaris carbonum wilson)，g.小麥根腐病菌（Bipolaris sorokiniana(sacc.)shoem）以上病原真菌由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命院提供。

1.1.2 供試植物及試劑

野生植物從大慶市郊采集，中草藥購于大慶市新村福瑞邦藥房。經(jīng)40℃干燥箱烘干，高速粉碎機(jī)粉碎，然后過20目篩，常溫備用。

試驗(yàn)過程中所使用的化學(xué)試劑均采用分析純。

1.2 配方設(shè)計(jì)

復(fù)配配方設(shè)計(jì)首選初篩試驗(yàn)［5］中抑菌效果顯著而且提取率相對(duì)較高的植物，同時(shí)將原材料容易獲得且盡量降低成本作為選擇原則。

配方1：扁蓄、黃芩、龍葵莖葉（帶青果）、龍膽、蒼術(shù)、白鮮皮、菊芋莖葉、甘草、反枝莧、蒼耳全株（帶果實(shí)）（2.4∶1.0∶2.3∶1.0∶1.5∶3.8∶4.5∶0.5∶4.3∶5.0）。

配方2：龍葵、龍膽、菊芋、甘草、黃芩、蒼術(shù)、扁蓄（2.3∶1.0∶4.5∶0.5∶1.0∶1.5∶2.4）。

配方3：蒼耳、龍膽、菊芋、龍葵、黃芩、白鮮皮（5.0∶1.0∶4.5∶2.3∶1.0∶3.8）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 植物樣品的提取

將植物材料晾曬干制后分別用高速粉碎機(jī)粉碎，過40目篩得各成分粉末，然后分別按上述配方比例充分混勻，加入5倍的80%乙醇水溶液冷浸8h，然后在55℃左右、功率150W條件下，超聲30min，過濾獲得濾液。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在40℃，130r/min條件下蒸發(fā)至膏狀物占乙醇溶液體積約為5%～10%時(shí)，常溫條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 抑菌活性的離體測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定野生植物提取物對(duì)供試病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用［6］。試驗(yàn)采用PDA培養(yǎng)基，按粗提混合物170～175g/L的量加入滅菌后的培養(yǎng)基中，每個(gè)處理配方設(shè)3次重復(fù)。在培養(yǎng)基中央接種病原菌菌疊，菌疊直徑0.6cm，置于28℃恒溫培養(yǎng)，經(jīng)常觀察菌絲生長(zhǎng)情況，待對(duì)照長(zhǎng)滿平皿后測(cè)量菌落直徑，計(jì)算不同配方殺菌劑對(duì)病原菌的生長(zhǎng)抑制率。

計(jì)算公式如下：

2 結(jié)果與分析

2.1 三種配方對(duì)水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、腐霉枯萎病菌和茄腐病菌離體抑制效果比較

表不同配方植物源殺菌劑對(duì)7種病原真菌離體抑制結(jié)果Tab Inhibition effects of different formula botanical fungicides on 7 pathogenic fungus in vitro

從表1可以看出，3個(gè)配方對(duì)水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、腐霉枯萎病菌的體外生長(zhǎng)抑菌率均為100%，分別高出化學(xué)殺菌劑福美雙66.04%、71.08%和66.52%，差異極顯著（p＜0.01）。配方3對(duì)小麥赤霉病菌的體外生長(zhǎng)抑菌率為96.81%，高出化學(xué)殺菌劑福美雙67.89%，差異極顯著（p＜0.01）。對(duì)于茄腐病菌而言，這3種配方的抑制效果雖然均沒有達(dá)到60%，但是與化學(xué)藥劑福美雙相比，抑制效果差異仍在25%以上，差異極顯著（p＜0.01），其中配方1對(duì)茄腐病菌的抑制率最高，僅為53.96%。

2.2 三種配方對(duì)茄腐病菌和小麥根腐病菌離體抑制效果比較分析

從表1可以看出，3種配方對(duì)茄腐病菌的體外生長(zhǎng)抑菌率均低于55%，但是與化學(xué)殺菌劑福美雙的抑菌率相比（分別高出50.65%、39.97%和24.87%），差異極顯著（p＜0.01）。配方1的抑菌效果最高，為53.96%；配方2次之，為43.28%；配方3最差，僅為28.18%。3種配方對(duì)小麥根腐病菌均有不同程度的抑菌作用，配方1和配方2對(duì)小麥根腐病菌的抑菌率均在75%以上，配方1的抑菌率最高為80.0%；配方2次之，為76.38%（較高）；配方3的抑制率在30%以下（較差）而福美雙對(duì)小麥根腐病菌沒有抑制作用。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)共設(shè)計(jì)3個(gè)復(fù)配植物源殺菌劑配方，并對(duì)茄腐病菌、水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、玉米圓斑病菌、馬鈴薯早疫病菌、腐霉枯萎病菌7種致病植物病原真菌的離體抑制活性進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示3種配方對(duì)水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌和腐霉枯萎病菌均有極其顯著的抑菌活性。配方1和配方2對(duì)這7種病原菌均有很好的抑制作用，尤其是配方1效果更好，下一步擬以配方1為基礎(chǔ)進(jìn)行劑型研究試驗(yàn)，并通過盆栽和田間試驗(yàn)來驗(yàn)證新型植物源殺菌劑的抑菌效果。

圖不同配方植物源殺菌劑對(duì)7種植物病原真菌離體抑制效果比較Fig Inhibition effects of different formula botanical fungicides on 7 pathogenic fungus in vitro

［1］趙善歡.植物化學(xué)保護(hù)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002：317-320.

［2］袁高慶，黎起秦，王靜，等.植物源殺菌劑研究進(jìn)展Ⅱ：活性測(cè)定、活性物質(zhì)及其應(yīng)用［J］.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，41（2）：136-140.

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［4］劉長(zhǎng)令.源于天然產(chǎn)物的農(nóng)藥品種［J］.精細(xì)與專用化學(xué)品，2004，12（6）：1-5.

［5］姬妍茹，楊慶麗，王瑩瑩，等.龍葵等19種植物提取物的離體抑菌活性研究［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30（25）：303-307.

［6］劉國(guó)坤，陳啟建，吳祖建，等.幾種植物提取物對(duì)4種植物病原真菌的抑制作用［J］.福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，33（3）：295-299.

Inhibitory Effect of Botanical Multi-formula Fungicides to 7 Plant Pathogenic Fungus

JI Yan-ru,YANG Qing-li,DONG Yan,ZHANG Zhen-hai,LIU Yu-Feng
（Daqing Branch of Heilongjiang Academy of Science,Daqing Heilongjiang 163319)

According to the principle of cost effective and broaden antifungal spectrum,plant extracts with high antibacterial effect were combined to 3 type of botanical fungicide in the study.Fusarium graminearum and other 7plant pathogenic fungus were treated by botanical fungicides. Result shows that formula 1 and 2 have higher inhibitory effect than other formulas.Inhibition rate of formula 1 to all plant pathogenic fungus was over 65%but to Fusarium solani(53.96%),and obviously higher than control of chemical fungicide thiram.

000

S435

A

1674-8646（2016）01-0008-02

2015-09-27

大慶市指導(dǎo)性科技計(jì)劃（sdz-2011-45）

姬妍茹（1971-），女，黑龍江大慶人，碩士，副研究員，從事生物技術(shù)研究。