吳曉明

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柴胡舒肝顆粒醇提工藝優(yōu)選

吳曉明

目的 通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選舒肝顆粒柴胡醇提制備工藝。方法 采用高效液相色譜法測定柴胡中柴胡皂苷含量，以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的總含量及固形物提取率為考察指標(biāo)，考察乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數(shù)4個因素對提取結(jié)果的影響。結(jié)果 醇提最佳工藝為7倍量70%乙醇，提取2次，每次1.5 h。結(jié)論 優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、可行，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

正交試驗(yàn)；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；柴胡舒肝顆粒

0 引言

柴胡舒肝顆粒方系在《景岳全書》經(jīng)典名方柴胡疏肝丸基礎(chǔ)上形成的有效驗(yàn)方，由柴胡、香附、制何首烏、甘草等中藥組成，具有調(diào)氣疏肝，解郁散結(jié)，寧心安神的功能[1]，臨床用于治療肝郁傷神所致的焦慮和失眠，癥見失眠多夢，精神抑郁或急躁易怒，胸脅苦滿或胸膈不暢。方中柴胡為君藥，柴胡皂苷是柴胡中的主要活性成分[2]，文獻(xiàn)報道其含量與柴胡疏肝解郁的功效密切相關(guān)[2]。為提高產(chǎn)品的質(zhì)量，本文通過正交實(shí)驗(yàn)，采用高效液相色譜法測定柴胡中柴胡皂苷含量，以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d總量及固形物提取率為指標(biāo)，對柴胡舒肝顆粒制備過程中的醇提部分的工藝進(jìn)行了優(yōu)選，為舒肝顆粒合理的工藝、可控的質(zhì)量提供可靠依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Agilent1100液相色譜儀(美國Agilent公司)；色譜分析柱漢邦Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm；5 μm)；BT25S型電子分析天平(德國Sartoriuss公司)。

1.2 藥品及試劑 柴胡皂苷a(批號：110777-200507)、柴胡皂苷d(批號：110778-200506)購自于中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用；甲醇(南京化學(xué)試劑有限公司，色譜純)；乙腈(美國天地)；飲片(經(jīng)鑒定，符合《中國藥典》2010年版一部要求)；重蒸去離子水(自制)。

2 方法和結(jié)果

2.1 提取方法 稱取柴胡20 g，川芎10 g，加適量乙醇后按正交試驗(yàn)設(shè)計方法提取，過濾且合并濾液，提取液定容，備用。

2.2 固形物的制備 精密量取定容提取液100 mL，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算固形物含量。

2.3 柴胡皂苷含量測定方法的建立

2.3.1 色譜條件 Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈為流動相A，水為流動相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為210 nm；流速0.8 mL/min。色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫表

2.3.2 對照品溶液的配制 精密稱取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d對照品適量，加50%甲醇溶解制成每毫升含有柴胡皂苷a 220 μg、柴胡皂苷d 201 μg的對照品溶液，備用。

圖1 對照品與供試品HPLC圖

2.3.3 供試品溶液的配制 按照正交試驗(yàn)安排的試驗(yàn)設(shè)計進(jìn)行試驗(yàn)，精密稱取柴胡等飲片，飲片加入適量相對應(yīng)濃度乙醇，回流提取，合并濾液，濾液定容，取樣，濾液過0.45 μm濾膜，備用。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分別置于5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成不同濃度的對照品溶液，分別精密吸取10 μL，進(jìn)樣測定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對照品質(zhì)量濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程柴胡皂苷a：Y=3.841 3 X-15.182，r=0.999 7，線性范圍為24.2～220 μg/mL；柴胡皂苷d：Y=3.949 3 X-14.923，r=0.999 7，線性范圍為20.1～201 μg/mL。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述不同對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測定，結(jié)果柴胡皂苷d和柴胡皂苷d對照品峰面積積分值RSD分別為1.12%、0.78%。表明精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取正交試驗(yàn)下5號樣品儲備液，過0.45 μm微孔濾膜，在0～24 h內(nèi)按上述色譜條件測定。結(jié)果柴胡皂苷a的RSD為0.89%，柴胡皂苷d的RSD為0.46%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品儲備液，過0.45 μm微孔濾膜，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，共6次，結(jié)果柴胡皂苷a的RSD為0.95%，柴胡皂苷d的RSD為0.65%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取正交試驗(yàn)下6號樣品儲備液2 mL，加入每毫升含有柴胡皂苷a 44 μg，柴胡皂苷d 40.2 μg的混合對照品溶液2 mL，定容，制成供試品溶液，按上述色譜條件下測定，計算加樣回收率。結(jié)果柴胡皂苷a的平均回收率為98.71%，RSD=1.69%；柴胡皂苷d的平均加樣回收率為95.81%，RSD=2.1%(n=6)。

2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果 根據(jù)處方中飲片主要成分的性質(zhì)及預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，采用回流的提取方法，影響醇提工藝的主要因素有乙醇濃度(A)、乙醇用量(B)、提取時間(C)、提取次數(shù)(D)。按正交試驗(yàn)設(shè)計L9(34)因素安排實(shí)驗(yàn)，以柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的總量及固形物含量為考察指標(biāo)，因素水平見表2，試驗(yàn)結(jié)果見表3，方差分析見表4。

表2 因素水平表

根據(jù)柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的總含量及固形物為考察指標(biāo)，以極差最低的因素提取時間作為誤差項(xiàng)，進(jìn)行方差分析。結(jié)果表明4個因素差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，影響因素的主次為乙醇濃度>乙醇用量>提取次數(shù)>提取時間。分析發(fā)現(xiàn)，乙醇濃度最低時，固形物含量最高，皂苷總量最低；乙醇用量最高時，固形物含量最高，皂苷總量低于第2水平，而且生產(chǎn)成本最高；提取時間對提取影響最小，各水平之間差距較?。惶崛〈螖?shù)越多，固形物含量越多，皂苷總量也越多，然而溶劑能耗消耗也最多。綜合考慮皂苷總量、固形物含量及工業(yè)生產(chǎn)成本等因素，確定較優(yōu)工藝為A2B2C2D2，即加入7倍量70%的乙醇，提取2次，每次1.5 h。

2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為驗(yàn)證優(yōu)選工藝的可靠性和重復(fù)性，取相應(yīng)量飲片，按照正交試驗(yàn)所得出的較優(yōu)工藝，進(jìn)行工藝驗(yàn)證，平行3份，結(jié)果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d總量分別為71.936 4、69.347 8、70.189 5 mg，RSD為1.52%，固形物提取率分別為9.60%、9.67%、9.40%，RSD為1.22%，結(jié)果表明所得工藝穩(wěn)定，合理可行。

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

表4 方差分析表

3 討論

柴胡皂苷類是柴胡中的主要有效成分，與柴胡疏肝解郁的功效密切相關(guān)。柴胡皂苷有皂苷a、皂苷c、皂苷d、皂苷b1、皂苷b2等[3]，其中皂苷a、皂苷d是藥典規(guī)定評價柴胡飲片的指標(biāo)，因此選擇柴胡皂苷a和d為指標(biāo)成分[4]，并以其總提取量作為工藝優(yōu)選的依據(jù)。

國內(nèi)文獻(xiàn)常用正交設(shè)計優(yōu)化法[5]選擇較佳工藝，具有“均勻分散、整齊可比”的特點(diǎn)，其實(shí)驗(yàn)次數(shù)少，數(shù)據(jù)處理及操作均方便，應(yīng)用已達(dá)到普及的程度，本文采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化舒肝顆粒醇提工藝，優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

[1]蔡華,雷攀,杜士明,等.柴胡制劑的開發(fā)利用研究進(jìn)展[J].中國藥師雜志,2015,18(11):1963-1965.

[2]趙香妍,劉長利.中藥柴胡的研究概況與發(fā)展趨勢[J]時珍國醫(yī)國藥,2015,26(4):963-966.

[3]李軍,姜華,張延萍,等.HPLC測定柴黃片中柴胡皂苷b1、b2的含量[J].中國藥學(xué)雜志,2011,46(1):61-63.

[4]祝婧,鐘凌云,龔千鋒,等.HPLC法測定柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a、d的含量[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2015,27(6):46-47.

[5]周旭,張?zhí)m,田原,等.正交設(shè)計法優(yōu)選柴胡消癭顆粒的乙醇提取工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015,21(2):20-23.

Optimization of ethanol-extraction technology for Chaihu shugan granule

WU Xiao-ming

(Changshu City Hospital of Traditional Chinese Medicine,Changshu 215500,China)

Objective To optimize the ethanol-extraction technology of Chaihu shugan granule by orthogonal design.Methods Alcohol extractrate and the total content of saikosaponin a and saikosaponin d were taken as the indexes for investigation,and orthogonal test was carried out to study the effects of four extracting factors (alcohol density,alcohol amount,extracting time and extracting times) on the extraction technology.Results The optimum extracting conditions were 7 times amounts of 70% alcohol,extracting for 3 times and 1.5 hours each time.Conclusion The process is efficient,stable and suitable for industrialized production.

Orthogonal design;Saikosaponin a;Saikosaponin d;Chaihu shugan granule

2016-04-22

常熟市中醫(yī)院，江蘇 常熟 215500

10.14053/j.cnki.ppcr.201611022