李 梅，張 季，王蘭蘭，蔡 璐

(遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)院，貴州 遵義 563000)

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茶籽油脂肪酸指紋圖譜的比較與分析

李 梅，張 季，王蘭蘭，蔡 璐

(遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)院，貴州 遵義 563000)

以茶籽油為研究對(duì)象，將茶籽油與其它植物油通過(guò)氣相色譜法，圖譜數(shù)據(jù)采用平均矢量法，并通過(guò)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)匹配，創(chuàng)建了茶籽油和其它植物油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，并對(duì)它們的相似度進(jìn)行了分析。分析表明：同類植物油脂之間相似度高；不同類植物油脂間相似度低。建立茶籽油脂肪酸成分的特征指紋圖譜。為茶籽油的品質(zhì)評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了科學(xué)依據(jù)。

茶籽油；氣相色譜法；脂肪酸；指紋圖譜

茶油與椰子油、橄欖油、棕櫚油都稱為世界上的四大木本食用植物油，豐富的活性成分和獨(dú)有的脂肪酸組成使它一直保有保健食用油的稱號(hào)。主要分布在我國(guó)的廣西、江西、浙江、廣東、湖南等地[1]。茶籽油的脂肪酸組成通常含有79%的油酸、10%的亞油酸和1%的亞麻酸, 還含有豐富的生育酚、植物甾醇、角鯊烯等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì), 容易被人體消化吸收,具有降低人體血清的膽固醇，預(yù)防和治療高血壓、心血管系統(tǒng)疾病的功效[2-3]。

樣品的前處理是GC分析植物油脂中脂肪酸的關(guān)鍵步驟，不恰當(dāng)?shù)那疤幚矸椒ú粌H耗時(shí)、繁瑣，還會(huì)給我們帶來(lái)極大的分析誤差[4-5]。近年來(lái)，茶葉、白酒以及蜂膠等食品方面也開始逐步采用中藥標(biāo)準(zhǔn)建立指紋圖譜，幫助消費(fèi)者和監(jiān)管者控制產(chǎn)品質(zhì)量和協(xié)助摻假檢測(cè)[6-7]。本文對(duì)茶籽油進(jìn)行了研究，主要比較了茶籽油和其它三種植物油的指紋圖譜。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 供試藥劑

37種脂肪酸混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(10 mg/mL, 1.2 mL)購(gòu)于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；色譜甲醇，美國(guó)天地有限公司；色譜異辛烷，美國(guó)天地有限公司；氫氧化鈉和氯化鈉，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水硫酸鈉，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；三氟化硼甲醇溶液，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.2 溶液的制備

0.5% mol/L的氫氧化鈉-甲醇溶液: 將2 g氫氧化鈉溶于100 mL純度為99.5%以上的甲醇中。三氟化硼甲醇溶液：質(zhì)量為14%的三氟化硼甲醇溶液。飽和氯化鈉：稱取36 g氯化鈉于燒杯中，加入100 mL蒸餾水?dāng)嚢枞芙饧纯伞?/p>

1.3 儀器設(shè)備

氣相色譜儀帶FID檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司；工作站軟件，Agilent OpenLab工作軟件；色譜柱，CNW CD-2560(100.0 m×0.25 mm×0.25 μm)；電子天平，ALC-210.4型，德國(guó)Sartorius公司。數(shù)顯恒溫水浴鍋，HH-6型，常州潤(rùn)華電器有限公司。

1.4 樣品檢測(cè)方法

1.4.1 前處理方法

稱取植物油脂試樣100～200 mg于250 mL磨口三角瓶中，加入4 mL 0.5% mol/L的氫氧化鈉-甲醇溶液和少許沸石，向三角瓶中導(dǎo)入幾分鐘干燥氮?dú)?，排掉空氣后迅速接上冷凝裝置，在85 ℃左右的水浴中回流至油滴全部消失，大概20 min左右；回流過(guò)程中每隔1～2 min緩慢的搖動(dòng)三角瓶，以防止氫氧化鈉生成固態(tài)附著在瓶壁上。再用移液管從冷凝管上部緩慢的加入5 mL三氟化硼甲醇溶液于沸騰的溶液里，繼續(xù)沸騰10 min；接著再繼續(xù)加入10.0 mL異辛烷，取下冷凝裝置和三角瓶，迅速向三角瓶中加入20 mL飽和氯化鈉溶液，蓋上瓶蓋，猛烈振搖30 s；放置2 min使其靜止分層，取上層溶液2～3 mL于10 mL比色管中，加入適量無(wú)水硫酸鈉除去溶液中的水痕跡，靜止過(guò)濾后取清液1 mL于進(jìn)樣瓶中上機(jī)檢測(cè)。

1.4.2 樣品的氣相色譜檢測(cè)條件

儀器: Agilent 7890A氣相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)；色譜柱：CNW CD-2560 (100.0 m×0.25 mm×0.25 μm)；色譜柱升溫程序：初始柱溫140 ℃(保持5 min)→7 ℃/min升溫→222 ℃(保持8 min)→10 ℃/min升溫→240 ℃(保持15 min)；柱流速：0.6 mL/min；載氣：高純氮；純度99.999%；進(jìn)樣量：1 μL；分流比30：1；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測(cè)器溫度：260 ℃；空氣流量：300 mL/min；氫氣流量：30 mL/min；尾吹氣流量：25 mL/min。

2 植物油脂指紋圖譜的建立

2.1 一般菜籽油指紋圖譜及指紋圖譜分析

把菜籽油的指紋圖譜分為一般菜籽油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜和低芥酸菜籽油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜[8]。

本實(shí)驗(yàn)中菜籽油的樣品量很多，我們隨機(jī)選取8個(gè)芥酸值“3.0～60.0”之間的合格的菜籽油作為一般菜籽油的樣品譜圖，根據(jù)《中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗(yàn)研究技術(shù)指南(試行)》的要求，導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)驗(yàn)證，生成指紋圖譜[9-10]。

表1 一般菜籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

2.2 低芥菜籽油指紋圖譜及指紋圖譜分析

實(shí)驗(yàn)隨機(jī)選取了8個(gè)芥酸值在“ND-3.0”之間的合格的菜籽油樣品，經(jīng)氣相色譜檢驗(yàn)獲得脂肪酸甲酯組成成分及其相對(duì)含量，再通過(guò)人工選擇有效峰和對(duì)所有峰共有率的篩查，確定共有峰含為14個(gè)。

表2 低芥酸菜籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

續(xù)表2

3C18 028 3541 8010C22 033 6810 334C18 1n9c29 17958 8011C22 1n934 6421 815C18 2n6c30 36619 2012C24 036 9660 166C20 030 8900 5813C24 138 1220 197C20 131 7231 65

2.3 大豆油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

本實(shí)驗(yàn)一共采集大豆油樣品8個(gè)批次，經(jīng)氣相色譜檢驗(yàn)獲得脂肪酸甲酯組成成分及其相對(duì)含量，把樣品譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)驗(yàn)證，再通過(guò)人工選擇有效峰和對(duì)所有峰共有率的篩查，確定共有峰含為11個(gè)。

表3 大豆油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

2.4 茶籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

本實(shí)驗(yàn)一共采集茶籽油樣品8個(gè)批次，經(jīng)氣相色譜檢驗(yàn)獲得脂肪酸甲酯組成成分及其相對(duì)含量，把樣品譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)驗(yàn)證，再通過(guò)人工選擇有效峰和對(duì)所有峰共有率的篩查，確定共有峰含為11個(gè)。將所有共有峰脂肪酸甲酯的峰面積和保留時(shí)間，采用平均矢量法，建立山菜籽油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(見(jiàn)表4)。

表4 茶籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

2.5 植物油脂標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度分析

采用共有峰模式建立的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，需要將所有的大豆油、茶籽油和菜籽油的樣品譜圖，導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)( 2004A) ”軟件，通過(guò)夾角余弦法，建立樣品之間和樣品與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜之間的相似度[11-12]。詳見(jiàn)表5。

表5 茶籽油指紋圖譜相似度

參考國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥注射劑色譜指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)指南(試行) ”的相似度劃分界限[13-14]，將相似度在0.90以上作為符合該種油脂相似度評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，相似度低于0.90的判定不符合。每種油脂的樣品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜很接近，說(shuō)明該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能代表該類樣品的整體性[15]。

表6 茶籽油與其它植物油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜之間的相似度

通過(guò)大豆油、低芥菜籽油、一般菜籽油和茶籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜間的相似度 (見(jiàn)表7)，比較每類油脂的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度。

表7 四類油脂標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度

大豆油與一般菜籽油之間的差異為0.712，一般菜籽油與低芥菜籽之間的差異為0.952?？梢?jiàn)，一般菜籽油與低芥菜籽油雖然因?yàn)榻嫠嶂档牟煌譃榱烁叩蛢深悾撬鼈兌奸儆诓俗延瓦@一大類，組成成份相近，所以相似度高[16-17]。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)GC法將茶籽油和其它植物油的脂肪酸檢驗(yàn)結(jié)果采用平均矢量法建立了茶籽油和其它植物油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜并進(jìn)行了相似度分析，得出一般菜籽油、低芥菜籽油、大豆油和茶籽油樣品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜之間相似度分別為0.973、0.995、0.992和0.983，說(shuō)明同類植物油脂之間相似度高；而把一般菜籽油、低芥菜籽油、大豆油和茶籽油之間進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析，則發(fā)現(xiàn)大豆油與一般菜籽油之間的差異最大，為0.712，說(shuō)明不同類植油脂間相似度低。茶籽油中飽和脂肪酸含量為11.07%，低于菜籽油以外的其它4種植物油，所以茶籽油會(huì)降低膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量。茶籽油中不飽和脂肪酸含量為81.85%，高于大豆油和棕櫚油等其它植物油的含量，說(shuō)明茶籽油對(duì)膽固醇有明顯降低的作用，使得人患冠心病的幾率降低。

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Comparison and Analysis of Fatty Acid Fingerprint in Tea Seed Oil

LIMei,ZHANGJi,WANGLan-lan,CAILu

(Inspection and Testing Institute for Product Quality in Zunyi City, Guizhou Zunyi 563000, China)

Taking tea seed oil as the research object, using meteorological chromatography, tea seed oil and other vegetable oils were imported to Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of TCM by mean vector technique. The standard fingerprint of tea seed oil and other vegetable oils were established. The results of similarity analysis of standard fingerprints indicated that higher similarity was observed between the similar vegetable oils. The characteristic fingerprint of fatty acid composition of tea seed oil was established, it had laid a foundation for controlling the quality of tea seed oil by fatty acid composition. It provided the scientific basis for the quality evaluation and quality control standard of tea seed oil.

tea seed oil; gas chromatography; fatty acid; fingerprint

李梅(1982)，女，碩士研究生，研究方向：食品檢測(cè)。

O657.7+1

A

1001-9677(2016)022-0109-04