張 海，陳珍娥，付實烘

(1 遵義師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，貴州 遵義 563006；2 黔北特色資源應(yīng)用研究實驗室，貴州 遵義 563006；3 黔北特色資源開發(fā)利用產(chǎn)學(xué)研基地，貴州 遵義 563006)

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GC-MS法對茜草藤揮發(fā)油化學(xué)成分的分析

張 海，陳珍娥，付實烘

(1 遵義師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，貴州 遵義 563006；2 黔北特色資源應(yīng)用研究實驗室，貴州 遵義 563006；3 黔北特色資源開發(fā)利用產(chǎn)學(xué)研基地，貴州 遵義 563006)

對茜草藤進(jìn)行了化學(xué)成分研究。分別利用索氏提取法、超臨界CO2萃取法提取茜草藤揮發(fā)油，并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法進(jìn)行測定。對索氏提取法獲得的萃取物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，其中匹配度在85%以上的有36種化學(xué)成分；對超臨界CO2萃取法獲得的萃取物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，其中匹配度在85%以上的有48種化學(xué)成分。該方法可以快速的測定茜草藤的化學(xué)成分，為進(jìn)一步開發(fā)和利用該植物提供實驗依據(jù)。

茜草藤；GC-MS；索氏提取；超臨界CO2萃??；化學(xué)成分

茜草藤為茜草科茜草屬茜草RubiacordifoliaL. (R. akane Nakai)的地上部分。茜草，別名蒨草、血見愁、地蘇木、活血丹、土丹參、紅內(nèi)消等，是傳統(tǒng)常用中藥，性寒，味苦，歸肝經(jīng)。有涼血化瘀止血、通經(jīng)等功效[1]。用于治療各種出血癥、血瘀經(jīng)閉及跌打損傷等[2]。自20世紀(jì)70年代以來，經(jīng)國內(nèi)外學(xué)者的不斷研究，發(fā)現(xiàn)茜草有許多新的藥用價值和應(yīng)用前景。特別是日本學(xué)者從茜草及同屬植物中發(fā)現(xiàn)了高效低毒的抗癌成分，而引起人們對中藥茜草更深入的研究。然而迄今為止關(guān)于茜草藤(地上部分)研究報道依然甚少，除茜草藤的微量元素[3]及茜草籽實中的氨基酸[4]等化學(xué)成分研究外，國內(nèi)未見其它報道。本實驗采用索氏提取法、超臨界CO2萃取法來提取茜草藤揮發(fā)油，并對萃取物化學(xué)成分進(jìn)行GC-MS分析，為進(jìn)一步研究該植物化學(xué)成分及其藥性機(jī)理提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SFT-110超臨界萃取儀，美國SUPERCRITICALFLUID TECHNOLOGIES公司；TRACE ISQ氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，賽默飛世爾科技(中國)有限公司；精密電子天平，梅特勒—托利多儀器上海有限公司；粉碎機(jī)、烘箱、真空烘箱，上海-恒科學(xué)儀器有限公司；磁力攪拌器，上海科升儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司。

1.2 試藥

采自貴州遵義，經(jīng)遵義師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院陳珍娥高級實驗師鑒定為茜草科茜草屬茜草(RubiacordifoliaL.)正品；實驗所用試劑均為國產(chǎn)分析純。

2 實驗方法

2.1 樣品處理

茜草藤樣品用二次蒸餾水洗凈，于70 ℃烘箱中干燥4 h，再用植物粉碎機(jī)粉碎并過80目篩，備用。

2.2 茜草藤揮發(fā)油的提取

2.2.1 索氏提取法提取

稱取4 g茜草藤粉末用濾紙包好，置于索氏提取器中，加入無水乙醇75 mL，加熱回流提取6 h，收集全部提取液，繼續(xù)重復(fù)2次，直至提取液無色，合并提取液，旋蒸除去乙醇，真空干燥。

2.2.2 超臨界CO2萃取法提取

稱取10 g樣品放入萃取釜中，超臨界CO2萃取條件：萃取釜溫度為47 ℃，背壓閥溫度為57 ℃；CO2流速為15 mL/min；夾帶劑為無水乙醇。在壓力2000 kPa下萃取1 h。

2.3 茜草藤揮發(fā)油的定性定量分析

2.3.1 GC條件

色譜柱：TR-5MS 30 m×0.25 mm ×0.25 um film；柱溫：70 ℃(保留1 min),以11 ℃·min-1升溫至275 ℃(保留10 min)；氣化室溫度：275 ℃；載氣：高純度He(99.99%)；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：1 μL；分流比：20：1。

2.3.2 MS條件

離子源：EI 源；離子源溫度：280 ℃；電子能量：70 eV；傳輸線溫度：280 ℃；質(zhì)量掃描范圍：50～500 amu。

2.3.3 定性分析

通過Xcalibur色譜工作站檢索標(biāo)準(zhǔn)MS圖庫，同時結(jié)合有關(guān)MS圖文獻(xiàn)解析，確認(rèn)茜草藤揮發(fā)性物質(zhì)的化學(xué)成分。

2.3.4 定量分析

通過數(shù)據(jù)處理，按峰面積歸一化法進(jìn)行計算，求出茜草藤各化學(xué)成分的峰面積相對百分含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 茜草藤揮發(fā)油總離子流

圖1 乙醇索氏提取揮發(fā)油總離子流圖

圖2 超臨界CO2萃取揮發(fā)油總離子流圖

3.2 GC-MS檢出的各化學(xué)成分及其峰面積相對百分含量

表1 茜草藤揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果

續(xù)表1

259 061-石竹烯0 230 19269 352，3-二甲基氫醌0 801 07279 46十六烷0 630 30289 57十二烷基二甲基叔胺-1 64299 642，6-二叔丁基對甲酚0 280 48309 683，5-二叔丁基苯酚0 10-319 76馬兜鈴烯-0 56329 77異喇叭烯0 39-339 831，6-脫水吡喃葡萄糖-2 033410 052-甲基十六烷0 27-3510 16二氫獼猴桃內(nèi)酯-0 123610 28正十九烷0 47-3710 287-甲基十五烷-0 243810 51氧化石竹烯0 50-3910 63正十四烷0 52-4010 63油酸-1 014110 91乙酸α-甲基-2-呋喃乙醇酯-0 214210 98反-3-氧雜二環(huán)[4 4 0]癸烷-0 584311 27十四烷基環(huán)氧乙烷-0 364411 28正十五碳醛0 45-4511 58肉豆蔻酸-0 394611 694(1E)-3-羥基-1-丙烯基-2-甲氧基苯酚-0 784711 842-羥基-1，4，4-三甲基-二環(huán)[3 1 0]己烷-6-甲醇-1 834811 844-異丙基-1-甲基-3-氧化環(huán)己烷乙酸0 26-4912 08新植二烯2 9620 165012 16植酮1 38-5112 25葉綠醇6 304 855212 73棕櫚酸甲酯0 49-5313 02棕櫚酸9 8920 995413 17棕櫚酸乙酯16 870 375513 473-蒈烯-10-醛-1 705614 06DL-2-芐氨基-1-丙醇-0 635714 17亞油酸-11 625814 22亞麻酸-7 235914 27亞油酸乙酯15 04-6014 29硬脂酸-0 616114 32亞麻酸乙酯12 01-6214 43硬脂酸乙酯1 54-6314 993-環(huán)戊丙酸-2-二甲胺基乙酯-0 176415 381，8-二氮雜環(huán)十四烷-2，9-二酮0 30-6515 545-甲基-5-(4，8，12-三甲基十三烷基)二-2(3H)-呋喃酮0 66-

續(xù)表1

6615 67油酸酰胺-0 426715 69二十酸乙酯1 17-6816 02二十醛0 93-6916 92鄰苯二甲酸二異辛酯2 271 217017 33山崳酸乙酯0 36-7119 90芥酸酰胺-2 637220 06反式角鯊烯20 055 72

本實驗分別以索氏提取法、超臨界CO2萃取法對茜草藤進(jìn)行提取，通過GC-MS對萃取物進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定，其中索氏提取法共檢出36種化合物，酸類6種、烴類9種、醛酮類6種、醇酚類5中、酯類9種。含量最高的依次為反式角鯊烯20.5%、棕櫚酸乙酯16.87%、亞油酸乙酯15.04%、亞麻酸乙酯12.01%、棕櫚酸9.89%、葉綠醇6.3%。

超臨界CO2萃取法檢出的48種化合物中，其中酸類有7種、醇酚類7種、烴類7種、醛酮類8種、酯類7種。含量最高的依次為棕櫚酸20.99%、新植二烯20.16%、亞油酸11.62%、亞麻酸7.23%、反式角鯊烯5.72%。

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明，上述多種成分具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性。其中亞油酸被稱為是血管的“清道夫”，具有消炎的作用[5-6]，還能防治冠心病和高血壓等疾病[7]。亞麻酸具有降血脂、降血壓、抗炎、增加智力、保護(hù)視力、抑制過敏反應(yīng)的作用[8]。反式角鯊烯對于治療高、低血壓，貧血，糖尿病，肝硬化，癌癥等有非常好的療效。

4 結(jié) 論

索氏提取法操作簡便，成本低；但超臨界CO2流體萃取法提取的揮發(fā)油能更真實、全面的反映藥材中的化學(xué)成分。從萃取物的分析結(jié)果來看，茜草藤生物活性成分含量較高，具有較高的研發(fā)價值。本文的工作將為今后進(jìn)一步研究茜草藤活性成分提取工藝提供一定的理論依據(jù)。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典(下卷)[M].上海:上?？萍汲霭嫔?1977:1567-1568.

[2] 中國科學(xué)院委員會主編. 中國植物志[M]. 北京:科學(xué)出版社, 1999, 71(2): 287.

[3] 劉謙光,陳戰(zhàn)國,高永吉,等. 茜草地上部分微量元素的研究[J]. 中國中藥雜志, 1990, 15(10): 39-40.

[4] 陳戰(zhàn)國,劉謙光,耿征,等. 茜草籽實中氨基酸的提取分離及測定研究[J]. 陜西師大學(xué)報:自然科學(xué)版, 1996, 24(4): 117-119.

[5] 趙敏. 亞油酸及亞油酸甲酯的抗炎作用研究[D]. 成都:西南交通大學(xué),2012.

[6] 胥莉. 亞油酸氧化產(chǎn)物的體外活性及促炎效果[D]. 楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),2013.

[7] 陸彩鵬,趙敏,喻凱,等. 亞油酸及亞油酸甲酯對巴豆油致小鼠耳腫脹的抑制作用[J]. 華西藥學(xué)雜志,2014, 29(5): 609-610.

[8] 尤麗菊，劉國玲. α-亞麻酸的藥理作用[J]. 中國社區(qū)醫(yī)師,2011, 13(29): 10.

Analysis of Volatile Components fromRubiacordifoliaL. by GC-MS

ZHANGHai1,2,3,CHENZhen-e1,2,3,FUShi-hong1

(1 School of Chemistry and Chemical Engineering, Zunyi Normal College,Guizhou Zunyi 563006；2 Qianbei Featured Resources Applied Research Laboratory, Guizhou Zunyi 563006；3 Qianbei Featured Resources Exploitation Research Base, Guizhou Zunyi 563006, China)

The chemical components ofRubiacordifoliaL. by Soxhlet extraction and Supercritical CO2extraction method was studied. Volatile oil ofRubiacordifoliaL. was extracted respectively. The chemical constituents of volatile oil were determined by GC-MS. Structural identification of the extracts were obtained by soxhlet extraction, there were 36 kinds of chemical components which the matching degree was more than 85%. Structural identification of the extracts were obtained by supercritical CO2extraction method, there were 48 kinds of chemical components which the matching degree was more than 85%. This method can be used to determine the chemical composition ofRubiacordifoliaL. and provide the experimental basis for further development and utilization of the plant.

RubiacordifoliaL.；GC-MS；soxhlet extraction；supercritical CO2extraction；chemical components

黔北特色資源開發(fā)利用產(chǎn)學(xué)研基地(黔教合KY字[2013]128)。

張海(1976-)，男，副教授，博士，主要從事天然產(chǎn)物開發(fā)與應(yīng)用。

分析測試

R281.4

A

1001-9677(2016)022-0068-03