訾永宏， 李小寶， 陳紅梅

(1延安大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，延安 716000；2延安職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)系；*通訊作者，E-mail：ziyonghong2016@163.com)

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RNA干擾沉默STC-1基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116增殖的影響

訾永宏1*， 李小寶1， 陳紅梅2

(1延安大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，延安 716000；2延安職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)系；*通訊作者，E-mail：ziyonghong2016@163.com)

目的 探討RNA干擾技術(shù)沉默STC-1基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116增殖的影響。 方法 將STC-1基因的si-RNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至HCT116細(xì)胞；采用RT-PCR、Western blot鑒定干擾效果；以STC-1基因沉默細(xì)胞HCT116為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞和空白的HCT116細(xì)胞為陰性對(duì)照和空白對(duì)照組，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法、細(xì)胞倍增時(shí)間、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)等分析沉默STC-1基因后，HCT116細(xì)胞生長(zhǎng)速度、細(xì)胞周期、克隆形成能力等的改變。 結(jié)果 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，沉默STC-1基因后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度明顯下降；其細(xì)胞周期也發(fā)生改變G1期細(xì)胞增多、S期細(xì)胞減少。空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞平均倍增時(shí)間為分別為(3.718±0.82)h,(3.981±0.918)h,(5.018±0.981)h；空白對(duì)照組，陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組平均細(xì)胞克隆形成數(shù)目分別為65.68±4.826,71.28±4.662,45.95±4.432。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，平均倍增時(shí)間和平均細(xì)胞克隆形成數(shù)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 沉默 STC-1基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的增殖具有重要的作用，這為進(jìn)一步闡明結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

RNA干擾； STC-1； 結(jié)腸癌； HCT116

斯鈣素-1(stanniocalcin-1,STC-1)是一類先后在硬骨魚(yú)、哺乳動(dòng)物和人類中發(fā)現(xiàn)的糖蛋白激素，在調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，促進(jìn)腦神經(jīng)元的終末分化以及骨和肌肉的發(fā)育等方面都有重要作用[1,2]。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，STC-1在人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中也起著十分重要的作用[3]。越來(lái)越多的研究表明，STC-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織[4,5]。本實(shí)驗(yàn)前期也發(fā)現(xiàn)STC-1在結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116中高表達(dá)，但其對(duì)結(jié)腸癌發(fā)生過(guò)程中的作用目前還不十分清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)一步探討STC-1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116生物學(xué)表型的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

HCT116細(xì)胞由中南大學(xué)細(xì)胞中心保存，RPMI-1640培養(yǎng)基購(gòu)自Gibico公司(美國(guó))，新生小牛血清購(gòu)自Biology Industries公司(以色列)，胰蛋白酶購(gòu)自研科生物試劑公司，pGCsi/U6/GFP/si-STC-1購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因有限公司，轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000 Reagent購(gòu)自上海英維捷基貿(mào)易有限公司，MTT、G418、DMSO購(gòu)自鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司，細(xì)胞培養(yǎng)板購(gòu)自Corning公司(美國(guó))，Giemsa染料、碘化丙啶(PI)購(gòu)自Sigma公司(美國(guó))。離心機(jī)( 湖南長(zhǎng)沙平凡離心機(jī)廠，中國(guó))，酶標(biāo)儀(Bio-TK公司產(chǎn)品，美國(guó))，細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermor公司產(chǎn)品，美國(guó))，顯微鏡(Olympus公司產(chǎn)品，日本)。

1.2 pGC/U6/GFP/si-STC-1重組載體構(gòu)建

從基因Bank中提取STC-1基因 (序列號(hào)：NM_003155)，設(shè)計(jì)3條STC-1的干擾序列：①5′-TTAGTCCAGGAAGCAATAGTA-3′;②5′-TAGATTGCTGCAAATTTCATG-3′;③5′-ACAAGGTAGTCAGCCAAGCAC-3′，由上海吉?jiǎng)P基因公司設(shè)計(jì)、合成干擾片段并定向克隆入pGCsi/U6/GFP載體，并以空載體pGCsi/U6/GFP(Mock)為對(duì)照。

1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將待轉(zhuǎn)染細(xì)胞HCT116用培養(yǎng)基稀釋至1×105cells/ml，接種于24孔板，培養(yǎng)過(guò)夜；待其密度至80%左右，將2 μl脂質(zhì)體2000加入48 μl無(wú)血清RPMI 1640培養(yǎng)基中輕輕混勻，37 ℃孵育5 min，分別加入1 μg重組質(zhì)粒pGC/U6/GFP/si-STC-1和1 μg對(duì)照質(zhì)粒pGC/U6/GFP(Mock)至49 μl RPMI-1640無(wú)血清培養(yǎng)基中輕輕混勻，室溫孵育5 min；將上述兩種混合液，輕輕混勻，溫箱中至少孵育20 min；D-Hank’s液洗1次，加入2 ml無(wú)抗生素的完全RPMI 1640培養(yǎng)基，再加入含有重組質(zhì)粒的混合溶液，輕輕混勻，置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6 h；棄上清并換新鮮的RPMI 1640完全培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)24-48 h，棄上清并傳代，加入含400 μg/ml G418的培養(yǎng)基篩選陽(yáng)性克隆。

1.4 RT-PCR鑒定干擾效果

總RNA抽提及RT-PCR按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。逆轉(zhuǎn)錄按FERMENTAS公司的試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。逆轉(zhuǎn)錄條件：42 ℃ 60 min，70 ℃ 10 min，反應(yīng)終止后冰上冷卻，-20 ℃保存。PCR條件：95 ℃ 1 min預(yù)變性；95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，68 ℃ 90 s，循環(huán)30次；68 ℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用溴乙淀染色，1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。其中人STC-1引物為：sense 5′-TTCTGGTGCTGGTGATCAGTG-3′，antisense 5′-TTTGGGCACAGTGGTCTGTCT-3′，產(chǎn)物大小為594 bp。GAPDH sense 5′- AATCCCATCACCATCTTCCA-3′，antisense 5′-CCTGCTTCACCACCTTCT TG -3′，產(chǎn)物大小為580 bp。

1.5 Western blot鑒定干擾效果

細(xì)胞蛋白質(zhì)抽提按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離膠濃度為10%、濃縮膠濃度為5%；上樣時(shí)各取50 μg蛋白樣品，加入5%的巰基乙醇，100 ℃變性5 min；電泳開(kāi)始為恒壓60 V，當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠后，把電壓提高到100 V，電泳至溴酚蘭剛跑到玻璃邊緣時(shí)終止電泳，轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜完成后，將轉(zhuǎn)印后的NC膜置含5%的脫脂奶粉的封閉液中，4 ℃封閉過(guò)夜。封閉后的NC膜經(jīng)PBST洗板3次，每次5 min，加入含1∶400的鼠抗人STC-1的一抗，于搖床上室溫反應(yīng)2 h，將膜取出PBST洗3次， 每次5 min，加1∶3 000稀釋的兔抗鼠IgG-HRP酶標(biāo)二抗，于搖床上室溫下避光反應(yīng)1 h；PBST洗板3次，每次 5 min，暗室曝光、顯影、定影，最后將其曝光結(jié)果掃描。

1.6 MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

以STC-1基因沉默組的HCT116細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，每組細(xì)胞均按5×103/孔接種于96孔培養(yǎng)板，加高糖DMEM培養(yǎng)液(含20%小牛血清，無(wú)抗生素)，置37 ℃、5% CO2，培養(yǎng)24 h貼壁后，每孔再加入MTT至終濃度為5 g/L，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄培養(yǎng)液，加入DMSO 200 μl，待藍(lán)紫色結(jié)晶顆粒充分溶解后于490 nm處測(cè)OD值，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)連續(xù)6 d，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。然后以O(shè)D值為縱軸，時(shí)間為橫軸繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度。

1.7 細(xì)胞倍增時(shí)間測(cè)定

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，每組細(xì)胞均取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞消化后重懸并臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞，按103/孔接種于24孔板，培養(yǎng)24 h，用胰酶消化并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，每組均設(shè)4個(gè)平行孔，實(shí)驗(yàn)連續(xù)5 d，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。計(jì)算每組細(xì)胞的平均倍增時(shí)間。倍增時(shí)間公式如下：TD=t[lg2/(lgNt-lgN0)](TD為細(xì)胞倍增時(shí)間；t為培養(yǎng)時(shí)間；N0，Nt分別代表接種后及培養(yǎng)t小時(shí)后的細(xì)胞數(shù))。

1.8 平板克隆形成能力測(cè)定

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞和空白的HCT116細(xì)胞為陰性對(duì)照和空白對(duì)照組。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，胰酶消化后用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基重懸并用臺(tái)盼染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞，接種6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入100個(gè)細(xì)胞, 置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)2-3周；棄上清液，PBS洗板2次，甲醇固定15 min；加Giemsa染色15 min，然后用水緩慢洗去染色液，空氣干燥；顯微鏡下計(jì)數(shù)克隆數(shù)，細(xì)胞數(shù)大于50個(gè)的計(jì)數(shù)為1個(gè)克隆數(shù)。每個(gè)濃度組細(xì)胞均設(shè)3個(gè)平行樣，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算平均克隆形成數(shù)。

1.9 細(xì)胞周期的測(cè)定

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，每組細(xì)胞均取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞5×103接種于培養(yǎng)瓶，待貼壁后，用無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌2次，再用無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h，用胰酶消化，離心收集細(xì)胞，PBS洗2次，PI染色30 min。300目尼龍網(wǎng)過(guò)濾后，上流式細(xì)胞儀分析，并按以下公式計(jì)算其增殖指數(shù)(proliferative index,PI):PI=(G2M+S)/(G0/1+S+G2M)×100%。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 HCT116/si-STC-1、HCT116/si-M細(xì)胞系的構(gòu)建

分別將重組質(zhì)粒HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-①、HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-②、HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-③和對(duì)照質(zhì)粒pGC/U6/GFP用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞，經(jīng)400 μg/ml G418篩選約2周，挑單克隆擴(kuò)大培養(yǎng)(見(jiàn)圖1A，B)，采用RT-PCR分別檢測(cè)HCT116，HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-①、HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-②、HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-③和HCT116/pGC/U6/GFP細(xì)胞中的STC-1 mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，在HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-①細(xì)胞中未檢測(cè)到STC-1 mRNA的表達(dá)，而在HCT116、HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-②、HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-③和HCT116/pGC/U6/GFP細(xì)胞的STC-1 mRNA水平變化不明顯，分別將HCT116/pGC/U6/GFP/si-STC-1-①和HCT116/pGC/U6/GFP細(xì)胞系命名為HCT116/si-STC-1和HCT116/si-M(見(jiàn)圖1C)。進(jìn)一步采用Western blot實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)HCT116，HCT116/si-STC-1和HCT116/si-M細(xì)胞中STC-1蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，HCT116/si-STC-1細(xì)胞中未檢測(cè)到STC-1蛋白的表達(dá)(見(jiàn)圖1D)，這一結(jié)果與RT-PCR檢測(cè)結(jié)果相一致。這說(shuō)明成功建立沉默STC-1的細(xì)胞系，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pGC/U6/GFP/si-STC-1和pGC/U6/GFP的實(shí)驗(yàn)結(jié)果Figure 1 Results of cells with stable transfection pGC/U6/GFP/si-STC-1and pGC/U6/GFP

2.2 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-STC-1)為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-M)和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其生長(zhǎng)速度。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞HCT116/si-STC-1的生長(zhǎng)速度明顯下降(見(jiàn)圖2)。

圖2 MTT法檢測(cè)STC-1沉默組細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線Figure 2 Cell proliferation curve of HCT116 cells with or without STC-1 knockdown detected by MTT assay

2.3 細(xì)胞倍增時(shí)間

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-STC-1)為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-M)和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，檢測(cè)其生長(zhǎng)速度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HCT116、HCT116/si-M、HCT116/si-STC-1細(xì)胞平均倍增時(shí)間為分別為(3.718±0.82)h、(3.981±0.918)h、(5.018±0.981) h。與對(duì)照組細(xì)胞相比，沉默STC-1基因后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞平均倍增時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)圖3)。

與其他兩組比較，*P<0.05圖3 沉默STC-1基因后HCT116細(xì)胞的平均倍增時(shí)間 Figure 3 The cells double time of HCT116 with or without STC-1 knockdown

2.4 克隆形成能力

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-STC-1)為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-M)和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，用平板克隆形成檢測(cè)其克隆形成能力。結(jié)果顯示：HCT116、HCT116/si-M、HCT116/si-STC-1細(xì)胞克隆形成數(shù)目分別為65.68±4.826，71.28±4.662，45.95±4.432。與對(duì)照組細(xì)胞相比，沉默STC-1基因后，實(shí)驗(yàn)組HCT116細(xì)胞的克隆形成能力明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)圖4)。

與其他兩組比較，*P<0.05 B.STC-1沉默后HCT116細(xì)胞的克隆形成率 圖4 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Figure 4 Results of colony formation of HCT116 Cells

2.5 細(xì)胞周期的分布

以STC-1基因沉默的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-STC-1)為實(shí)驗(yàn)組，以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的HCT116細(xì)胞(HCT116/si-M)和空白的HCT116細(xì)胞為對(duì)照組，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞周期的分布。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組HCT116/si-STC-1細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞HCT116、HCT116/si-M相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞HCT116/si-STC-1 G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少(見(jiàn)圖5)，其結(jié)果與細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果趨勢(shì)相一致。

圖5 STC-1基因沉默后HCT116細(xì)胞周期檢測(cè)Figure 5 Cells cycle of HCT116 with or without STC-1 knockdown

3 討論

STC-1是一種糖蛋白激素,以旁分泌或自分泌方式參與機(jī)體的多種生理功能。人類STC-1基因位于染色體8(8p11.2-p21的)的短臂，STC-1的cDNA 編碼一個(gè)含247個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),STC-1與腫瘤的關(guān)系密切，STC-1不同程度地過(guò)表達(dá)于肺癌[6]、肝癌[7]和甲狀腺癌[8]等多種腫瘤組織，并參與胃癌[9]、乳腺癌[10]及腎癌[11]的發(fā)生、發(fā)展。但目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)STC-1與結(jié)腸癌的關(guān)系的研究報(bào)道很少。

STC-1在結(jié)腸癌組織中存在過(guò)表達(dá)[4,5]，在結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116中高表達(dá)，本研究利用RNA干擾(RNA interference,RNAi)特異地抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HTC116中STC-1基因的表達(dá)后，MTT、細(xì)胞倍增時(shí)間、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)顯示對(duì)STC-1的抑制顯著地抑制了結(jié)腸癌細(xì)胞HTC116的增殖，因此STC-1可能在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。STC-1介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖的作用機(jī)制尚不明確。STC-1 在多種腫瘤中可能通過(guò)不同途徑參與腫瘤形成。Yeung等[12]研究發(fā)現(xiàn)STC-1具有誘導(dǎo)腫瘤適應(yīng)低氧環(huán)境的作用，其中內(nèi)源性缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1是關(guān)鍵因子。STC-1 在腎癌細(xì)胞中促進(jìn)腫瘤增殖，其機(jī)制可能是HIF-1 調(diào)控STC-1 的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[13]。Murai等[10]研究顯示，在乳腺癌中，STC-1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移是通過(guò)活化PI3K途徑來(lái)發(fā)揮作用。關(guān)于STC-1在結(jié)腸癌中作用機(jī)制的研究是我們下一步研究的目標(biāo)。

綜上所述，干擾STC-1 基因表達(dá)可明顯地引起細(xì)胞周期阻滯，繼而導(dǎo)致細(xì)胞增殖能力和惡性程度的降低，提示STC-1 在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，為以STC-1為靶點(diǎn)的結(jié)腸癌的診斷及治療提供理論依據(jù)及靶向策略。

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Effect of RNA interference-mediated STC-1 silencing on proliferation of colon cancer cell line HCT116

ZI Yonghong1*, LI Xiaobao1, CHEN Hongmei2

(1DepartmentofGeneralSurgery,AffiliatedHospitalofYan’anUniversity,Yan’an716000,China;2DepartmentofMedicine,Yan’anVocationalandTechnicalCollege;*Correspondingauthor,E-mail:ziyonghong2016@163.com)

ObjectiveTo investigate the effects of RNA interference-mediated STC-1 gene silencing on the proliferation of colon cancer cell line HCT116.MethodsColon cancer cell line HCT116 was transfected by STC-1 small interfering RNA(siRNA), and the expression of STC-1 was determined by RT-PCR and Western blot. HCT116 cells with STC-1 knockdown were chosen as experimental group, and HCT116 cells transfected with empty plasmid and blank HCT116 cells were chosen as negative and blank control groups. Then the proliferation of HCT116 was examined by MTT assay, the cell doubling time of HCT116 was examined by doubling time assay, the colony formation ability of HCT116 was examined by colony formation assay, and the cell cycle of HCT116 was examined by flow cytometry.ResultsCompared with control groups,the growth ability in experimental group was significantly decreased and G1phase cells increased and S phase cells decreased. The doubling time was(3.718±0.82)h,(3.981±0.918)h, (5.018±0.981)h in blank control group, negative control group and experimental group, respectively.The colony numbers were 65.68±4.826, 71.28±4.662, 45.95±4.432 in blank control group, negative control group and experimental group，respectively. The doubling time and colony numbers were significantly different between control groups and experimental group(P<0.05).ConclusionSTC-1 gene may play an important role in proliferation of colon cancer cell line HCT116,which lay a solid foundation for further study of the pathogenesis of colorectal cancer.Key words: RNA interference; STC-1; colon cancer; HCT116

陜西省教育廳科研計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(12JK0765)

訾永宏，男，1979-02生，本科，主治醫(yī)師，E-mail:ziyonghong2016@163.com

2016-06-23

R735.35

A

1007-6611(2016)11-0973-05

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.003