張鵬

（青海大學附屬醫(yī)院介入科，青海 西寧 810000）

論著

氬氦刀治療對肝癌患者癌細胞惡性生物學行為的影響

張鵬

（青海大學附屬醫(yī)院介入科，青海 西寧 810000）

目的分析氬氦刀治療對肝癌患者癌細胞惡性生物學行為的影響。方法選取2013年7月-2014年7月于該院接受治療的肝癌患者88例作為研究對象。按照隨機數字表法將所有入組患者分為觀察組及對照組各44例，對照組患者接受單純肝動脈化療栓塞（TACE）治療，觀察組患者接受TACE聯合氬氦刀治療。比較兩組患者的治療后血清血管新生相關指標、侵襲相關指標、腫瘤預后相關指標等水平差異。結果觀察組患者的治療后血清內皮生長因子（VEGF）、缺氧誘導因子-α（HIF-1α）、層黏連蛋白（Lam）水平值低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組患者接受治療后的血清細胞間黏附分子-1（ICAM-1）、內皮細胞特異性分子-1（ESM-1）、基質金屬蛋白酶-13（MMP-13）、尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）水平均低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組患者的治療后甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、a-L-巖藻糖苷酶（AFU）、可溶性B7-H3（sB7-H3）水平低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論肝癌患者接受氬氦刀治療，可以降低腫瘤細胞的惡性生物學行為，有助于治療效果的實現以治療預后的改善，具有積極的臨床意義。

肝癌；氬氦刀；惡性生物學行為

原發(fā)性肝癌是臨床最常見、惡性程度最高的腫瘤之一，對于無法接受手術治療的患者肝動脈化療栓塞（transarterial chemoembolization，TACE）是首選方式。隨著TACE的應用增多，逐漸發(fā)現其無法阻斷

所有腫瘤血供、腫瘤細胞壞死不完全，術后早期的復發(fā)率較高，多需要進行反復手術治療，對患者免疫功能及肝功能均造成沖擊[1]。氬氦刀靶向冷凍消融治療在近年獲得迅速發(fā)展，主要通過理化效應破壞肝癌細胞及供血血管，進一步引起相應組織細胞的壞死，達到殺滅腫瘤細胞的目的。氬氦刀創(chuàng)傷小、療效肯定，據目前研究顯示治療有效率達90%以上，是腫瘤又一有效的輔助治療手段[2]。目前，有較多學者推薦將TACE與氬氦刀靶向冷凍消融治療組合成新的肝癌治療方案，擴大腫瘤殺滅效果、優(yōu)化肝癌的治療有效性。本次研究主要分析氬氦刀治療對肝癌患者癌細胞惡性生物學行為的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年7月-2014年7月于青海大學附屬醫(yī)院接受治療的肝癌患者88例作為研究對象。納入標準：①經細胞學或者病理確診為肝癌；②因腫瘤侵犯肺血管無法切除、患者拒絕手術治療、年齡較大等不適宜進行手術的患者；③治療前1周未接受放化療及分子靶向治療；④預計生存時間不短于3個月；⑤不伴妊娠、哺乳，急慢性感染性疾病；⑥不伴有精神異常、無精神病史。

按照隨機數表法將所有入組患者分為觀察組及對照組各44例，兩組患者的性別、年齡、腫瘤直徑等基線資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組肝癌患者的基線資料比較（n=44，±s）

表1 兩組肝癌患者的基線資料比較（n=44，±s）

組別男/女/例年齡/歲腫瘤直徑/cm觀察組24/2062.18±7.053.81±0.41對照組23/2161.76±7.223.76±0.37 t/χ2值0.310.290.16 P值0.3710.4280.572

1.2 治療方法

對照組患者接受TACE治療，具體如下：改良Seldinger法經股動脈穿刺，經腹腔動脈及腸系膜上動脈造影、了解腫瘤血供，采用微導管超選到腫瘤供血動脈。經導管緩慢注入化療混合藥物（FUDR750～1 000 mg，奧沙利鉑100～150 mg，吡柔比星10～20 mg），其后采用吡柔比星及超液態(tài)碘化油、在DSA透視下對供血動脈進行栓塞（吡柔比星10～20 mg+超液態(tài)碘化油10～20 ml充分乳化），對于血供豐富難以栓塞者可以加用350～560μm明膠海綿栓塞，間隔4～6周后進行再次TACE術治療。

觀察組患者接受TACE聯合氬氦刀治療，先T ACE治療，后氬氦刀冷凍消融治療，TACE方法同對照組，氬氦刀治療方法如下：所有患者均經計算機體層攝影（computed tomography，CT）引導下治療，采用利多卡因局部浸潤麻醉后，按照手術需要擺放患者體位。根據患者腫瘤大小選擇不同規(guī)格的冷凍消融刀，術前CT掃描以確定進針點、進針方向。常規(guī)消毒鋪巾后切開預定穿刺點的皮膚，冷凍消融刀穿刺至預定的腫瘤部位，開啟冷凍主機并引入氬氣冷媒，刀尖區(qū)域降溫至-140℃以下，持續(xù)時間10～15 min（根據腫瘤大小合理調整冷凍消融的持續(xù)時間）。冷凍消融期間持續(xù)進行CT掃描監(jiān)測，理想的冰球范圍為超過腫瘤邊緣。關閉氬氣后引入氦氣熱媒，復溫至20℃～30℃，重復冷熱循環(huán)，最后拔除氬氦刀并布局包扎。術后注意進行心電圖、血壓、血氧飽和度等基本生命體征監(jiān)護。

1.3 觀察指標

1.3.1 血管新生相關指標治療后3周，抽取患者空腹外周靜脈血5 ml，高速離心后取血清，采用酶聯免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）測定其中血管新生相關指標水平，包括內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及缺氧誘導因子-α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）、Ⅳ型膠原纖維（collagenⅣ，CollⅣ）、層黏連蛋白（Laminin，Lam）。

1.3.2 侵襲相關指標治療后3周，抽取患者空腹外周靜脈血5 ml，高速離心后取血清，采用ELISA測定其中侵襲相關指標水平，包括細胞間黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、內皮細胞特異性分子-1（endothelialcellspecific molecule-1，ESM-1）、基質金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）、尿激酶型纖溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator，uPA）。

1.3.3 腫瘤預后相關指標治療后3周，采用ELISA法測定患者血清中腫瘤活性相關指標，具體包括甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、癌胚抗原（Carcinoembryonicantigen，CEA）、a-L-巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）、可溶性B7-H3（soluble B7-3 molecule，sB7-H3）。

1.4 統計學方法

選用SPSS 21.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，用t檢驗，計數資料用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血管新生相關指標

治療前兩組患者的血清血管新生相關指標水平，差異無統計學意義（P＞0.05），觀察組患者的治療后血清VEGF、HIF-1α、Lam水平值低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.2 侵襲相關指標

治療前兩組患者的血清侵襲相關指標水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05），觀察組患者接受治療后的血清ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA水平均低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.3 腫瘤預后相關指標

觀察組患者的治療后AFP、CEA、AFU、sB7-H3水平低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表2 兩組患者的治療前后血清血管新生相關指標值比較（n=44，±s）

表2 兩組患者的治療前后血清血管新生相關指標值比較（n=44，±s）

組別VEGF/（pg/ml）HIF-1α/（ng/L）CollⅣ/（pg/ml）Lam/（ng/ml）治療前治療前治療前治療前治療后觀察組2194.73±264.92734.56±80.47112.84±16.7247.26±6.33672.18±73.66113.72±10.67316.25±40.3753.18±4.88對照組2231.64±283.61 1063.27±105.61119.52±19.6266.42±7.47683.62±70.59316.09±34.28309.62±45.17114.67±10.81 t值0.537.380.398.270.428.380.369.63 P值0.4320.0190.4730.0150.4030.0130.4930.011治療后治療后治療后

表3 組患者的治療前后血清侵襲相關指標值比較（n=44，±s）

表3 組患者的治療前后血清侵襲相關指標值比較（n=44，±s）

組別ICAM-1/（ng/ml）ESM-1/（ng/ml）MMP-13/（ng/ml）uPA/（μg/ml）治療前治療前治療前治療前治療后觀察組18.35±2.736.38±0.7421.73±2.647.39±0.85264.36±30.5193.73±9.524.73±0.511.17±0.21對照組19.17±2.9313.15±2.5317.15±2.5912.76±1.42271.84±34.21173.25±20.184.89±0.621.92±0.26 t值0.266.480.325.890.478.290.175.83 P值0.3920.0230.3510.0320.2630.0170.4630.041治療后治療后治療后

表4 兩組患者的治療后血清腫瘤預后相關指標值比較（n=44，±s）

表4 兩組患者的治療后血清腫瘤預后相關指標值比較（n=44，±s）

組別AFP/（μg/L）CEA/（μg/L）觀察組105.33±13.856.33±0.74對照組245.18±28.3714.27±2.83 t值8.239.16 P值0.0100.007 AFU/（u/L）sB7-H3/（ng/L）57.32±4.9163.92±5.88 92.61±7.88113.71±8.04 7.349.48 0.0150.004

3 討論

原發(fā)性肝癌是臨床腫瘤惡性程度排名前3位的疾病，5年生存率較低，由于肝臟代償能力強、早期不表現出明顯軀體不適，多數患者至臨床確診時已經到達中晚期。因此保守治療是治療肝癌的最主要方式，對于錯失腫瘤手術切除時機的患者，目前臨床治療首選TACE。TACE通過將導管選擇性的插入腫瘤供血動脈中并注入栓塞劑，達到閉塞腫瘤供血動脈、阻斷腫瘤細胞營養(yǎng)供應的作用，最終實現腫瘤組織缺血壞死的目的。TACE治療后短期內可以迅速縮小腫瘤直徑、效果顯著，但是該術式多難以完全殺滅腫瘤細胞、完全阻斷腫瘤血供。故TACE治療長期療效有限，反復多次TACE治療可以加重患者的肝功能損傷，制約TACE在肝癌中的應用。

氬氦刀是氬氦冷凍消融技術的簡稱，是一種微創(chuàng)超低溫冷凍消融腫瘤的先進醫(yī)療技術，于上世紀90年代興起，是微創(chuàng)腫瘤治療技術發(fā)展的新成果，目前在臨床中也有所應用[3]。氬氦刀治療的機制是冷凍后腫瘤細胞內冰晶的物理損傷，不可逆性使腫瘤細胞壞死。氬氦刀技術純屬物理治療，具有徹底摧毀腫瘤的作用，治療中不會導致腫瘤細胞擴散，且治療過程痛苦小、患者術后恢復快，還可以有效地調控細胞因子和抗體的分泌。在TACE治療基礎上加入氬氦刀進行聯合治療是一種最新的肝癌治療模式，有望彌補單純TACE治療的不足，擴大整體治療效果。本次研究中觀察組患者接受TACE聯合氬氦刀治療，在先行TACE治療后對碘油缺失區(qū)域進行氬氦刀治療，對照組患者接受單純TACE治療，從肝癌相關惡性生物學行為指標的血清表達上判斷治療效果的差異[4]。

肝臟腫瘤細胞的活性有賴于動脈血液提供氧需及營養(yǎng)，TACE治療也是基于該原理阻斷腫瘤血供。血管新生因子的存在可以促進腫瘤新血管生成，為殘留的腫瘤細胞供氧、促使腫瘤增殖形成新病灶，甚至可以發(fā)生遠處轉移，是TACE治療效果不佳、術后復發(fā)轉移的主要原因之一[5]。肝癌患者的血清血管新生因子的表達可以一定程度上反映臨床治療的有效性，也直接關系到治療后患者的腫瘤復發(fā)可能性。VEGF、HIF-1α、CollⅣ、Lam均是臨床多見的血管新生相關指標。VEGF是最主要的促血管生成因子，HIF-1α在缺氧條件下穩(wěn)定表達，與靶基因結合后可加速腫瘤生長，CollⅣ、Lam是血管基膜及腫瘤包膜的主要成分之一。本次研究中觀察組患者的治療后血清VEGF、HIF-1α、Lam水平均較低，提示加入氬氦刀治療后可以更為徹底的阻斷腫瘤細胞血供、進一步抑制腫瘤血管新生的能力，有助于臨床效果的實現及維持。

惡性腫瘤細胞與良性腫瘤區(qū)別的關鍵之處在于前者具有侵襲能力，TACE及氬氦刀治療的最終目的均是殺滅腫瘤細胞、最大程度的解除其侵襲轉移能力。TACE聯合氬氦刀可以取長補短，TACE治療減少腫瘤血供并閉塞多處小血管后，大幅減少腫瘤內部的熱池效應、提升氬氦刀冷凍區(qū)域的冷凍效應，靶區(qū)穩(wěn)定降低更為徹底、腫瘤細胞完全壞死[6]。ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA均為侵襲相關因子，ICAM-1可以介導細胞間機制的相互作用，參與細胞黏附轉移過程；MMP-13可以降解多種細胞外基質成分，促進腫瘤細胞的游走、轉移；uPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，在病理條件下參與細胞遷移、細胞周圍基質降解過程[7]。上述研究中觀察組患者的血清ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA表達水平較低，提示在TACE治療基礎上進行氬氦刀冷凍消融治療，可以更為徹底的殺滅腫瘤細胞活性、大幅降低其侵襲轉移能力。這與氬氦刀毀損范圍超過腫瘤邊緣，冷凍時刀尖區(qū)域降溫至-140℃以下且進行冷熱循環(huán)操作、徹底殺滅腫瘤關系密切。

對于無法接受根治性手術治療的肝癌患者，治療的最終目的為延長患者有質量的生存時間，故治療后的復發(fā)情況是臨床最為關注的指標之一。較多因子與腫瘤復發(fā)相關，其水平亦可間接預測是否存在腫瘤復發(fā)[8]。AFP是肝癌的首選檢測指標，與肝癌存在較強的特異性，當肝癌存在以及復發(fā)時其水平可大幅上升；CEA是人類胚胎抗原特異決定簇的糖類抗原，存在于原發(fā)性肝癌組織中，雖然是一種廣譜腫瘤標志物，但是當肝癌患者治療后CEA水平大幅上升時具有一定的腫瘤復發(fā)指向性；AFU在腫瘤組織中的轉換增加，與AFP聯合檢測是可以作為肝癌診斷的有效指標；sB7-H3是B7家族的免疫調控分子，在多種腫瘤細胞中均有表達，當腫瘤復發(fā)時其水平可大幅上升[9]。上述研究中觀察組患者的血清AFP、CEA、AFU、sB7-H3表達量均較低，提示TACE聯合氬氦刀治療殺滅腫瘤細胞更為徹底，在抑制腫瘤的遠期復發(fā)方面也更有優(yōu)勢。

綜上所述，得出以下結論：肝癌患者接受氬氦刀治療，可以降低腫瘤細胞的惡性生物學行為，有助于治療效果的實現以治療預后的改善，值得在日后臨床實踐中推廣應用。

[1]方肇勤,梁超,任紅艷.肝癌常用治法復方抑制肝癌細胞惡性增殖的機制研究[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,2013,19(1):34-36.

[2]WANG Y,KAN H L,SUN H,et al.Magnetic resonance imaging-navigated argon-helium cryoablation therapy against a rabbit VX2 brain tumor[J].Exp Ther Med,2015,9(6):2229-2234.

[3]傅斌生,劉煒,張劍文,等.肝細胞肝癌患者血清和肝癌組織中fibulin-1蛋白的表達及其臨床意義[J].中華肝臟外科手術,2013, 2(3):175-177.

[4]HU K Q.Advances in clinical application of cryoablation therapy for hepatocellular carcinoma and metastatic liver tumor[J].J Clin Gastroenterol,2014,48(10):830-836.

[5]李丁,向華,張智明,等.肝細胞肝癌氬氦刀聯合肝動脈介入治療前后血清VEGF的變化[J].介入放射學雜志,2015,24(5):400-402.

[6]葉偉東,紀建松,涂建飛,等.氬氦刀冷凍消融聯合肝動脈栓塞化療術治療中晚期肝癌的療效分析[J].介入放射學雜志,2015,24(5): 392-394.

[7]DE CASTRO ABREU A L,BAHN D,CHOPRA S,et al.Realtime transrectal ultrasonography-guided hands-free technique for focal cryoablation of the prostate[J].BJU Int,2014,114(5):784-789.

[8]趙晨陽,惠林萍,何琳,等.紫金牛三萜皂苷TSP02抑制人肝癌細胞增殖和侵襲作用機制研究[J].2013,38(6):861-863.

[9]MORGAN M A,ROBERTS N R,PINO L A,et al.Percutaneous cryoablation for recurrent low grade renal cell carcinoma after failed nephron-sparing surgery[J].Can J Urol,2013,20(5):6933-6937.

（張蕾 編輯）

Effect of argon-helium cryoablation on malignant biological behavior of cancer cells in liver cancer patients

Peng Zhang
(Department of Interventional Radiology,the Affiliated Hospital of Qinghai University, Xining,Qinghai 810000,China)

Objective To analyze the effect of argon-helium cryoablation on cancer cell biological behavior in liver cancer patients.Methods A total of 88 cases of liver cancer patients in our hospital between July 2013 and July 2014 were chosen as research subjects and divided into observation group and control group according to random number table method,each group had 44 patients.The patients in the ontrol group received transarterial chemoembolization(TACE)alone,while the patients in the observation group received TACE and argon-helium cryoablation.Serum angiogenesis-related indicators,invasion related indicators and tumor prognostic indicators were compared between the two groups.Results Serum VEGF,HIF-1α and Lam levels in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).Serum ICAM-1,ESM-1,MMP-13 and uPA levels in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).AFP,CEA,AFU and sB7-H3 levels in the observation group were lower than those in the control group,the differences were statistically significant(P＜0.05).Conclusions Argon-helium cryoablation treatment can reduce the malignant behavior of tumor cells in patients with liver cancer,is helpful to achieve a better therapeutic effect and improve the prognosis,and has positive clinical significance.

liver cancer;argon-helium cryoablation;malignant behavior

R735.7

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.009

1005-8982（2016）22-0042-04

2016-03-23