趙曉婷，孫潔，王翠芳*

（1沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院病理學與病理生理學系，沈陽 110034；2沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽 110024）

Ki-67在基底細胞樣型乳腺癌中的診斷價值

趙曉婷1，孫潔2，王翠芳2*

（1沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院病理學與病理生理學系，沈陽 110034；2沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽 110024）

目的 分析細胞增殖抗原Ki-67與雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）在乳腺癌表達的相關(guān)性，探討Ki-67在基底細胞樣型乳腺癌和非基底細胞樣型乳腺癌的表達與臨床病理特征的關(guān)系。方法 選取65例女性浸潤性乳腺癌標本，其中包括27例基底細胞樣型乳腺癌，38例非基底細胞樣型乳腺癌及癌旁組織標本，采用免疫組織化學技術(shù)檢測Ki-67、ER、PR、HER2在乳腺癌的表達。結(jié)果 65例乳腺癌中，Ki-67表達與ER、PR呈負相關(guān)，與HER2無相關(guān)性。在基底細胞樣型乳腺癌組織中，Ki-67在細胞核強陽性表達?；准毎麡有腿橄侔┡c非基底細胞樣型乳腺癌比較，Ki-67表達與組織學分級相關(guān)，組織學分級越高，Ki-67表達越強。結(jié)論 Ki-67可能參與基底細胞樣型乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，對預(yù)后評價有重要的參考價值。

乳腺癌；基底細胞樣型乳腺癌；Ki-67；ER；PR；HER2

浸潤性乳腺癌是女性最常見的腫瘤，是一種高度異質(zhì)性惡性腫瘤［1］。乳腺癌分子亞型的最初證據(jù)來自于cDNA微芯片的基因表達研究?；准毎麡有腿橄侔╞asal-like breast carcinoma，BLBC）是指具有基底細胞基因表型并不同程度的表達基底細胞角蛋白和肌上皮標記物的乳腺癌，是一組以基因表達譜確定的預(yù)后較差的高級別乳腺癌。其免疫組織化學常常ER、PR、HER2均為陰性，CK5／6和（或）EGFR陽性。Ki-67的表達與惡性腫瘤存在密切關(guān)系，能較好地反映腫瘤的惡性程度和預(yù)后。本文主要通過研究具有或不具有基底細胞樣型乳腺癌的臨床病理學因素（年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移情況、組織學分級）與Ki-67、ER、PR、HER2蛋白相互之間的關(guān)系，探討兩型乳腺癌中Ki-67蛋白表達的差異性。

材料和方法

1 材料

收集沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院2013年1月至2015年12月女性浸潤性乳腺癌65例，其中基底細胞樣型乳腺癌標本27例，非基底細胞樣型乳腺癌標本38例，癌旁組織標本作為對照組。患者年齡45～85歲，平均年齡65歲。

2 試劑

即用型鼠抗人單克隆抗體Ki-67（克隆號MIB-1）、兔抗人單克隆抗體ER（克隆號SP1）、兔抗人單克隆抗體PR（克隆號SP2）、兔抗人單克隆抗體HER2（克隆號EP3）均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。SP檢測試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

3 SP法免疫組織化學染色

所有乳腺癌患者組織切除后都使用4%的甲醛固定，依據(jù)病理規(guī)定規(guī)范取材，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)石蠟脫水，檸檬酸抗原高壓修復(fù)（pH6.0）25min，室溫冷卻30min，用0.01mol／L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）沖洗3min，每次3次，用油筆圈定玻片上的待測組織區(qū)域。每張切片加1滴或50μl過氧化酶阻斷試劑（試劑A），室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3次，每次3min。除去PBS液，每張切片加1滴或50μl正常非免疫動物血清（試劑B），室溫下孵育10min。除去血清，每張切片加1滴或50μL的第一抗體，4℃過夜。PBS沖洗3次，每次3min。除去PBS液，每張切片加1滴或50μl生物素標記的第二抗體（試劑C），室溫下孵育10min，PBS沖洗3次，每次3min。除去 PBS液，每張切片加1滴或50μl鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液（試劑D），室溫下孵育10min，PBS沖洗3次，每次3min。除去 PBS液，每張切片加2滴或100μl新鮮配置的DAB，顯微鏡下觀察3～10min。自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，PBS或自來水沖洗返藍。用DAB顯色，則切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

4 免疫組織化學結(jié)果判定

所有切片標本由2名經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法進行閱片并判斷陰、陽性表達。Ki-67、ER、PR定位于腫瘤細胞的細胞核，HER2定位于細胞膜。ER、PR陽性細胞數(shù)值 ＜10% 為（-），10% ～25% 為（＋），25%～50%為（＋＋），≥50%為（＋＋＋，強陽性［2］）。HER2：陽性細胞著色定位于細胞膜。0：無染色或≤10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細胞膜染色；＋：＞10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細胞膜染色；＋＋：有兩種情況，第一種為：＞10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)不完整和／或弱至中等強度的細胞膜染色，第二種為：≤10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)強而完整的細胞膜染色；＋＋＋：＞10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)強而完整的細胞膜染色［3］。Ki-67判定標準Ki-67陽性細胞數(shù)＜10%為陰性（-），10%～29%為低表達（＋），30%～49%為中度表達（＋＋），＞50% 為強陽性表達（＋＋＋）［4］。為統(tǒng)計學方便，本研究顯色0～＋定為陰性，＋＋～＋＋＋為陽性。

5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，采用四格表卡方檢驗和非參數(shù)統(tǒng)計中Spearman等級相關(guān)檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)　果

1 Ki-67、ER、PR、HER2在基底細胞樣型乳腺癌的免疫組織化學表達

免疫組織化學染色顯示，在基底細胞樣型乳腺癌組織中，Ki-67在細胞核強陽性表達，ER、PR在細胞核陰性表達，HER2在細胞膜陰性表達；在癌旁組織中，Ki-67在細胞核陰性表達，ER在細胞核強陽性表達、PR在細胞核中度陽性表達，HER2在細胞膜陰性表達（圖1）。

2 乳腺癌中Ki-67與ER、PR、HER2的相關(guān)性

65例乳腺癌中，ER陽性24例（36.9%），ER陰性41例（63.1%），PR陽性15例（23.1%），PR陰性50例（76.9%），HER2陽性12例（18.5%），HER2陰性53例（81.5%）。Spearman等級相關(guān)檢側(cè)分析顯示，Ki-67表達與ER、PR呈負相關(guān)（r＝-0．377，P＝0．002；r＝-0．280，P＝0．024），與HER2無相關(guān)性（r＝-0．004，P＝0．973）（表1）。

圖1　Ki-67、ER、PR、HER2在癌旁乳腺組織和基底細胞樣乳腺癌組織中的免疫組織化學表達；比例尺：癌旁組織，20μm；基底細胞樣乳腺癌組織，40μmFig.1　Immunohistochemical expression of Ki-67，ER，PR and HER2 in para-carcinoma tissues and BLBC tissues.Scale bar，20μm in para-carcinoma tissues；40μm in BLBC tissues

表1　Ki-67表達與 ER、PR、HER2的相關(guān)性Table 1　Expression correlation of Ki-67 to ER，PR and HER2 in BLBC

3 基底細胞樣乳腺癌與Ki-67表達和臨床病理特征的關(guān)系

65例乳腺癌患者標本中，基底細胞樣乳腺癌27例，非基底細胞樣乳腺癌38例?；缀头腔准毎麡尤橄侔┡c年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小、組織學分級以及Ki-67表達的關(guān)系由卡方檢驗檢測（表2）。在27例基底細胞樣乳腺癌中，Ki-67陽性25例（92.6%），陰性2例（7.4%）；在38例非基底細胞樣乳腺癌中，Ki-67陽性24例（63.2%），陰性 14例（36.8%）?；准毎麡尤橄侔┖头腔准毎麡尤橄侔┍容^，年齡（χ2＝0.035）、原發(fā)腫瘤的大小（χ2＝0.028）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（χ2＝0.074）無統(tǒng)計學差異，而組織學分級（χ2＝30.236）和Ki-67（χ2＝7.37）表達均有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。組織學分級越高，Ki-67表達越強。

表2　基底細胞樣型乳腺癌與Ki67表達和臨床病理特征的關(guān)系Table 2　Relation of Ki-67 expression to clinicopathologicalfeatures and breast cancer subtypes

討　論

基底細胞樣型乳腺癌是乳腺癌的一種特殊亞型，由于基因表型獨特、惡性程度高、預(yù)后差，成為國內(nèi)外研究乳腺癌的熱點。2000年P(guān)erou等［5］通過cDNA微陣列技術(shù)將乳腺癌分為5個亞型，其中包括基底亞型。根據(jù)基因芯片表達譜分析，基底細胞樣型乳腺癌的發(fā)病率約為15%，約占全部乳腺癌的8%～20%［6］。有報道認為基底細胞樣型乳腺癌在年輕的亞裔和南美洲婦女中較常見。因為腫瘤生長較快，所以常常被患者自己發(fā)現(xiàn)。此外，基底細胞樣型乳腺癌的組織學特點目前還不完全清楚，盡管某些形態(tài)學特征，比如高組織學級別、地圖狀壞死、推擠性邊緣提示腫瘤為基底細胞樣型乳腺癌，但這些形態(tài)學特征特異性不高，即不是所有的基底細胞樣型乳腺癌都具有這些特征。

ER、PR、HER2的陽性表達對乳腺癌內(nèi)分泌治療和靶向治療有指導(dǎo)意義。研究表明［7］，當乳腺上皮細胞在發(fā)生癌變時，ER、PR有不同的表達形式，一種是ER、PR為陽性表達，說明原來的激素對癌細胞仍起著調(diào)節(jié)作用，往往分化較好，稱之為激素依賴性腫瘤；另一種是ER、PR為陰性表達，說明激素對細胞生長不起調(diào)節(jié)作用，腫瘤分化較差，稱之為非激素依賴性腫瘤。Hussein等研究表明［8］HER2在乳腺癌中表達率一般為10%～34%，其表達與預(yù)后不良有關(guān)。本研究中，HER2陽性表達率為18.5%，與報道相近。另外，本研究表明Ki-67與ER、PR呈負相關(guān)，而與HER2無相關(guān)性，從某種程度上說明HER2可作為一種獨立的預(yù)后指標。

Ki-67是由Gerdes等［9］在1983年從霍奇金淋巴瘤系發(fā)現(xiàn)的一種增殖細胞相關(guān)的核抗原，僅在增殖細胞核中表達，被普遍認為是一種評價腫瘤細胞增殖活性較理想的標記物，也是現(xiàn)階段應(yīng)用最廣泛的增殖細胞標記物之一［10］。Ki-67表達可反映腫瘤細胞活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)［11］。本實驗發(fā)現(xiàn)，Ki-67在乳腺癌的陽性表達率為75.4%，與Bhatavdekar［12］等報道Ki-67在乳腺癌的陽性表達率78.0%結(jié)果相近，說明Ki-67參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。此外，研究報道［13］Ki-67陽性表達率高的乳腺腫瘤細胞的惡性度更高，細胞增殖活躍，容易發(fā)生侵襲、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。我們的研究也發(fā)現(xiàn)，本研究通過分析兩組乳腺癌與臨床病理特征及Ki-67表達的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Ki-67表達與組織學分級有關(guān)，而與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。由于基底細胞樣型乳腺癌具有組織學分級高，預(yù)后差特點，以及本實驗表明Ki-67在基底細胞樣型乳腺癌中表達高，提示其可以作為預(yù)后指標?？傊琄i-67、ER、PR、HER2分子標記物的表達情況，在臨床化療、內(nèi)分泌治療和靶向治療以及預(yù)后提供重要的意義。

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The value of Ki-67 in the diagnosis of basal-like breast carcinoma

Zhao Xiaoting1,Sun Jie2,Wang Cuifang2*
（1Pathology and Pathophysiology Major，College of Basic Medical Sciences，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2Department of Pathology，The Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College，Shenyang 110024）

Objective To analyze the correlation of Ki-67 expression with estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR) and human epidermal growth factor receptor-2(HER-2)in breast cancer,and to explore the relationship between Ki-67 expression and the clinicopathological features of basal cell-like(BLBC)／non-basal cell-like breast cancer(NBLBC).Methods 65 cases of female invasive breast cancer were selected for immunohistochemistry,including 27 cases of BLBC and 38 cases of NBLBC with para-carcinoma tissue.The expressions of Ki-67,ER,PR and HER2 in breast cancer were detected by immunohistochemistry.Results In the 65 cases of breast cancer,the expression of Ki-67 was negatively correlated with those of ER and PR,while unrelated to HER2.In BLBC tissue,strong positive expression of Ki-67 was detected in cell nuclei.A comparison of the BLBC and NBLBC showed a correlation between Ki-67 expression and the histological grade of the cancer.Ki-67 expression was stronger in cancer tissues with higher histological grades[1].Conclusions Ki-67 may be involved in the occurrence and development of BLBC and has important reference value in the evaluation of BLBC prognosis.

Breast cancer；basal-like breast carcinoma；clinicopathological characteristics；Ki-67；ER；PR；HER2

R737.9

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2016.05.009

2016-07-12

2016-10-15

趙曉婷，女（1990年），漢族，碩士研究生

（To whom correspondence should be addressed）：sywcf321＠sohu.com