李 歡，羅向霞，馮玉沛，王 晗

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·實(shí)驗(yàn)論著·

右歸丸對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

李 歡1，羅向霞2，馮玉沛3，王 晗3

Foundation item:National Nature Science Foundation Project (No.81460685)

1Children’s eye health Department, Xiangtan City of Hunan Province Maternal and Child Health Hospital, Xiangtan 411100, Hunan Province, China;2Department of Ophthalmology, Gansu Provincial Hospital of Chinese Medicine, Lanzhou 730050, Gansu Province, China;3Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730050, Gansu Province, China

?METHODS: A total of 80 SPF SD rats were selected, 10 rats were selected to set up normal group. The remaining 70 rats were given streptozotocin (60mg/kg) peritoneal injection combined with intravitreal injection of VEGF (0.05μg) to establish proliferative diabetic retinopathy rat model. After the model successful, the rats were divided into four groups: YouguiWan high dose group, YouguiWan middle dose group, YouguiWan low dose group and model group. The treatment groups were fed daily YouguiWan concentrate, model group and the normal group received daily doses of distilled water. After intragastric administration for 3mo, the PI3K, Akt expression of retinal tissue were observed by SP-immunohistochemistry and Western-blot method respectively.

?RESULTS: Immunohistochemical observation showed PI3K, Akt expression immunohistochemical staining, were brown particles on the retina. Normal PI3K, Akt expression weakly positive immunological reaction unit located in the ganglion cell layer. The kernel was also a small amount of expression. Model group, each YouguiWan treatment group rat retinal ganglion cell layer, inner plexiform layer and the inner and outer layer of the particles had a positive expression. Compared with the model group, YouguiWan high dose group PI3K, Akt expression were decreased. YouguiWan low dose group decreased expression was not obvious. Compared with the low dose group, YouguiWan high dose group PI3K, Akt expression was decreased. The expression of the strength of the YouguiWan, high dose group showed no significant difference. Western-blot test results showed that compared with the normal group, model group, treatment group, the expression difference was statistically significant (P<0.01). Model group, treatment group, PI3K, Akt protein levels were significantly increased. Compared with the model group, the YouguiWan high-dose group was statistically significant (P<0.05). YouguiWan high dose group PI3K, Akt protein expression were decreased, YouguiWan low dose group was no significant difference (P>0.05). Compared with the low dose group, YouguiWan high-dose group was statistically significant (P<0.05). YouguiWan high dose group PI3K, Akt expression levels were decreased. YouguiWan high dose group was not statistically significant difference (P>0.05).

?CONCLUSION:Reinforcingyangfromyinof YouguiWan can affect PI3K, Akt protein expression and inhibit PI3K/Akt signaling pathway, delay the disease process of diabetic retinopathy, propose new ideas and scientific basis for the treatment of diabetic retinopathy and blindness prevention treatment.

目的：探討“陰中求陽(yáng)”立法之右歸丸對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠PI3K/Akt信號(hào)通路的影響。

方法：SD大鼠80只，隨機(jī)分組，10只為正常組，余大鼠通過一次性腹腔注射鏈脲佐菌素溶液(60mg/kg)聯(lián)合大鼠玻璃體腔注射VEGF(0.05μg)的方式建立糖尿病視網(wǎng)膜病變?cè)鲋称诖笫竽Ｐ汀ＤＰ徒⒊晒?，將最終成模大鼠隨機(jī)分為4組：右歸丸高中低劑量組、模型組，右歸丸高中低劑量組每天給予相應(yīng)右歸丸濃縮液濃度進(jìn)行灌胃，模型組、正常組每天給予等劑量蒸餾水灌胃。連續(xù)灌胃3mo后，采取SP免疫組織化學(xué)、Western-blot法分別觀察檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜組織PI3K和Akt的表達(dá)情況。

結(jié)果：免疫組織化學(xué)觀察顯示PI3K和Akt免疫組化染色的陽(yáng)性表達(dá)，在視網(wǎng)膜上均為棕黃色顆粒；正常組PI3K和Akt表達(dá)部分分布于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，內(nèi)核也有少量表達(dá)，呈弱陽(yáng)性免疫反應(yīng)；模型組、右歸丸各治療組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層及內(nèi)外顆粒層都有陽(yáng)性表達(dá)；與模型組比較，右歸丸中、高劑量組PI3K和Akt表達(dá)均減弱，右歸丸低劑量組表達(dá)減弱不明顯；與右歸丸低劑量組比較，右歸丸中、高劑量組PI3K和Akt表達(dá)減弱；右歸丸中、高劑量組表達(dá)強(qiáng)弱比較無差異。Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示與正常組比較，模型組、治療組表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，模型組、治療組PI3K和Akt蛋白表達(dá)水平顯著升高；與模型組比較，右歸丸中、高劑量組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，右歸丸中、高劑量組PI3K和Akt蛋白表達(dá)水平均降低，右歸丸低劑量組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與右歸丸低劑量組比較，右歸丸中、高劑量組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，右歸丸中、高劑量組PI3K和Akt表達(dá)水平下降；右歸丸中、高劑量組表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

結(jié)論：基于“陰中求陽(yáng)”立法之右歸丸可以通過影響PI3K和Akt蛋白表達(dá)水平，抑制PI3K/Akt 信號(hào)通路活化，延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的病變進(jìn)程，為糖尿病視網(wǎng)膜病變防盲治療提出新的治療思路與科學(xué)依據(jù)。

右歸丸；陰中求陽(yáng)法；糖尿病視網(wǎng)膜病變；PI3K/Akt

引用：李歡，羅向霞，馮玉沛，等.右歸丸對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠PI3K/Akt信號(hào)通路的影響.國(guó)際眼科雜志2016;16(12):2195-2199

0引言

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)作為糖尿病最常見、嚴(yán)重影響視功能且治療最為棘手的眼部并發(fā)癥，同時(shí)也已成為當(dāng)前世界致盲率最高的疾病之一。隨著我國(guó)糖尿病發(fā)病率的激增，DR患病率已達(dá)44%～51.3%，視功能損害、致盲率日益見長(zhǎng)[1]。國(guó)際糖尿病研究所的一份報(bào)道顯示：幾乎所有的1型DM以及超過60%的2型DM患者在20a后均發(fā)生不同程度的DR，其中發(fā)生增殖期改變者約18%，致盲者占20%[2]。中國(guó)北方邯鄲DR流行病學(xué)調(diào)査顯示：30歲以上DM患者的DR發(fā)病率為43.1%，糖尿病患者失明率是非糖尿病患者的25倍，如果不及時(shí)治療，50%的DR患者在進(jìn)入增殖期之后的5a若不積極采取治療將完全失明[3]。PI3k/Akt信號(hào)通路作為參與內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和血管發(fā)生功能紊亂的重要途徑之一，在DR的新生血管形成過程中同樣發(fā)揮著重要作用。近年來隨著DR中醫(yī)病機(jī)研究的深入，越來越多證據(jù)表明DR在進(jìn)入增殖期后主要以陽(yáng)虛病機(jī)為關(guān)鍵?！瓣幹星箨?yáng)”法作為溫陽(yáng)類方劑的經(jīng)典配伍方法，其治療陽(yáng)虛功效已被基礎(chǔ)研究或臨床研究所證實(shí)，但有關(guān)對(duì)PI3K/Akt表達(dá)的影響少有文獻(xiàn)報(bào)道?；诖吮尘?，本實(shí)驗(yàn)旨在探討“陰中求陽(yáng)”法是否可以通過影響PI3K和Akt蛋白的表達(dá)，抑制PI3K/Akt通路激活，進(jìn)而探討基于“陰中求陽(yáng)”立法之右歸丸延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變進(jìn)程的作用機(jī)制。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠80只，8周齡，雌雄各半(分籠喂養(yǎng))，體質(zhì)量200～220g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào)：SCXK(甘)2011-0001]。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備 鏈脲佐菌素(北京博愛科貿(mào)生物有限公司)；VEGF(上海派普泰克生物制劑有限公司)；10%熒光素鈉注射液(Alcon Laboratories，Inc)；Rabbit Anti-AKT antibody、Rabbit Anti-PI3K/P85 alpha antibody(北京博奧森生物技術(shù)公司)；HRP標(biāo)記兔抗鼠一抗、濃縮型DAB溶液及底物、SP檢測(cè)試劑盒(Solarbio生物公司)；血糖儀、血糖試紙(羅氏上海公司)；微量加樣器、微量加樣吸頭(上海飛鴿生物有限公司)；Topcon眼底血管造影設(shè)備(HRA-II型，日本Topcon公司)；光學(xué)顯微鏡(日本Nikon公司)；解剖顯微鏡(德國(guó)OPMJ-CS公司)；-80℃冰箱(青島海爾)；電泳儀、電泳槽、轉(zhuǎn)移槽(北京六一儀器廠)；凝膠玻璃板、固定夾(上海漢諾儀器有限公司)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)藥物 按照《中華人民共和國(guó)藥典2010版》中所規(guī)定的右歸丸方藥組成劑量如下：熟地黃240g，山茱萸、當(dāng)歸各90g，山藥、枸杞、杜仲、菟絲子、鹿角膠各120g，制附子、肉桂各60g，以上藥材均購(gòu)自蘭州安泰堂藥店。右歸丸由甘肅省中醫(yī)院中藥研究院提取濃縮至2.3g/mL，4℃冷藏。

1.2方法

1.2.1造模方法 80只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1wk后，隨機(jī)分組，10只設(shè)為正常組，其余大鼠采用鏈脲佐菌素液60mg/kg行腹腔注射(注射前禁食不禁水16h)，注射后分別于72h，1、2、3、4wk測(cè)定大鼠空腹血糖，以血糖值≥16.7mmol/L者確定為糖尿病大鼠；繼而微量進(jìn)樣器抽取0.05μgVEGF，于顳側(cè)角膜緣后2mm水平經(jīng)過睫狀體平坦部進(jìn)入玻璃體腔，緩慢推動(dòng)進(jìn)樣器留針10s，4wk后對(duì)玻璃體腔注藥的大鼠分批行眼底熒光造影檢查，造影出現(xiàn)背景熒光增強(qiáng)、血管迂曲擴(kuò)張、新生血管熒光滲漏等表現(xiàn)者為糖尿病視網(wǎng)膜病變?cè)鲋称诖笫竽Ｐ徒⒊晒Α?/p>

1.2.2分組與給藥 將最終成模的大鼠篩選40只隨機(jī)分為右歸丸低劑量組、右歸丸中劑量組、右歸丸高劑量組、模型組4組，以及模型建立前所設(shè)立正常組，共5組，每組10只。依照賀石林《中醫(yī)科研設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)方法》進(jìn)行的給藥劑量換算如下：(1)右歸丸高劑量組：每天灌胃中藥右歸丸濃縮液2.32g/100g體質(zhì)量，相當(dāng)于12倍成人劑量；右歸丸中劑量組：每天灌胃中藥右歸丸濃縮液1.16g/100g體質(zhì)量，相當(dāng)于6倍成人劑量；右歸丸低劑量組：每天灌胃中藥右歸丸濃縮液0.58g/100g體質(zhì)量，相當(dāng)于3倍成人劑量；模型組、正常組每天給予等劑量蒸餾水灌胃，連續(xù)灌胃給藥3mo。

圖1 各組大鼠視網(wǎng)膜PI3k的陽(yáng)性表達(dá)情況(×400) A：正常組；B模型組；C：高劑量組；D：中劑量組；E：低劑量組。

圖2 各組大鼠視網(wǎng)膜Akt的陽(yáng)性表達(dá)情況。PI3k和Akt免疫組化染色的陽(yáng)性表達(dá)，在視網(wǎng)膜上均表現(xiàn)為棕黃色顆粒。正常組PI3k和Akt表達(dá)部分分布于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，內(nèi)核也有少量表達(dá)，呈弱陽(yáng)性免疫反應(yīng)。模型組、右歸丸各治療組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層及內(nèi)外顆粒層都有陽(yáng)性表達(dá)(×400) A：正常組；B：模型組； C：高劑量組；D：中劑量組：E：低劑量組。

1.2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材 給藥3mo后，處死大鼠，迅速摘除眼球，部分眼球浸泡于4%多聚甲醛溶液內(nèi)；部分眼球于解剖顯微鏡下迅速剝?nèi)∫暰W(wǎng)膜組織，置于一次性無菌EP管后，放入-80℃冰箱保存，備用。

1.2.4指標(biāo)檢測(cè)

1.2.4.1 SP-免疫組織化學(xué)檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜組織PI3K/p85和Akt陽(yáng)性表達(dá) (1)石蠟切片常規(guī)烤片，二甲苯脫蠟和梯度酒精水化；(2)將切片置于檸檬酸鹽緩沖液中行防脫處理；(3)每張切片滴加過辣根氧化酶阻斷溶液50μL，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；(4)滴加5%正常山羊血清50μL，室溫下孵育15min；(5)滴加一抗PI3k/p85(工作液濃度1∶100)50μL，4℃孵育24h，其中Akt(工作液濃度 1∶150)，操作流程同PI3k/p85的操作流程。(6)滴加生物素標(biāo)記兔抗鼠多抗50μL，37℃孵育10min；(7)滴加50μL鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶溶液，37℃孵育60min；(8)滴加DAB溶液100μL，顯微鏡下控制顯色時(shí)間；(9)蘇木素復(fù)染；(10)二甲苯透明，樹膠封片。

1.2.4.2 Western-blot法檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜組織PI3K/p85和Akt活性蛋白表達(dá) 以每20mg組織加200～400μL裂解液的比例進(jìn)行裂解，運(yùn)用電動(dòng)組織細(xì)胞勻漿器進(jìn)行1min勻漿后，離心取各組上清測(cè)濃度；取80μg蛋白與加樣緩沖液混勻變性；電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉；PI3k/p85和Akt一抗(抗體稀釋度均為1∶300，內(nèi)參抗體稀釋度為1∶1000)4℃孵育過夜，二抗孵育1h，進(jìn)行后續(xù)發(fā)光、壓片、顯影、定影等，β-actin為內(nèi)參；Image J軟件分析其灰度值。

2結(jié)果

2.1一般狀態(tài)觀察 造模期間，鏈脲佐菌素注射后大鼠死亡5只，7只由于血糖持續(xù)低于16.7mmo/L予以剔除；玻璃體腔注射后出現(xiàn)玻璃體積血4只，并發(fā)眼內(nèi)炎2只，最終成模62只。給藥期間，右歸丸高劑量組死亡1只大鼠，模型組、右歸丸中劑量組及右歸丸低劑量組各死亡2只。分析死亡原因可能為血糖水平過高以及個(gè)別大鼠鏈脲佐菌素注射后所引起的腸脹氣。

2.2 SP-免疫組織化學(xué)法觀察各組大鼠視網(wǎng)膜組織PI3k和Akt的陽(yáng)性表達(dá)情況 與模型組比較，右歸丸中、高劑量組PI3k和Akt表達(dá)均減弱，右歸丸低劑量組表達(dá)減弱不明顯；與右歸丸低劑量組比較，右歸丸中、高劑量組PI3k和Akt表達(dá)減弱；右歸丸中、高劑量組表達(dá)強(qiáng)弱比較無差異(圖1、2)。

2.3 Western-blot法檢測(cè)各組大鼠視網(wǎng)膜組織PI3k和Akt活性蛋白的表達(dá) Western-blot法檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜PI3k和Akt蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組、治療組表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，模型組、治療組PI3k和Akt蛋白表達(dá)水平顯著升高；與模型組比較，右歸丸中、高劑量組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，右歸丸中、高劑量組PI3k和Akt蛋白表達(dá)水平均降低；與右歸丸低劑量組比較，右歸丸中、高劑量組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，右歸丸中、高劑量組PI3k和Akt表達(dá)水平下降；右歸丸中、高劑量組表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1，圖3、4)。

3討論

DR的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的病理過程，引起DR發(fā)生一系列病理改變的原因涉及細(xì)胞因子、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝酶、炎癥及離子通道等相關(guān)基因的異常變化[4]。新生血管形成是DR進(jìn)入增殖期的特征性病理標(biāo)志，防止并抑制DR新生血管形成是延緩其病變進(jìn)程的關(guān)鍵靶點(diǎn)。PI3K-AKT通路廣泛存在細(xì)胞中，是參與作為細(xì)胞中廣泛存在的信號(hào)通路之一，PI3K/Akt通路的主要作用是通過參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化的調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)的[5]。當(dāng)該信號(hào)通路處于激活狀態(tài)時(shí)不僅能加速內(nèi)皮細(xì)胞的存活周期，與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子協(xié)同作用于細(xì)胞的存活、遷移，最終誘導(dǎo)新生血管形成，從而形成一條完整的促存活信號(hào)通路[6]。Akt作為調(diào)節(jié)絲氨酸激酶的抗凋亡信號(hào)之一，主要是通過調(diào)節(jié)作為內(nèi)皮細(xì)胞從細(xì)胞周期G1期到S期重要中介的細(xì)胞周期蛋白D1的水解以及其在細(xì)胞內(nèi)的定位，以達(dá)到干擾G1過度S期的目的，從而發(fā)揮其調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移以及誘導(dǎo)血管新生的關(guān)鍵作用[7]。同時(shí)，PI3k被激活后，其第二信使PIP3可刺激下游更多的信號(hào)分子，致使信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)，進(jìn)一步使PI3k信號(hào)通路在內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖以及血管形成方面等病理改變方面的作用增強(qiáng)[8]。周賽君等在進(jìn)行高糖體外實(shí)驗(yàn)室時(shí)發(fā)現(xiàn)，由于高糖所引起的缺血缺氧環(huán)境可激活加速內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路PI3k/Akt中Akt的表達(dá)，并使其磷酸化增加，繼而加速新生血管形成[9]。

基于DR源于中醫(yī)“消渴”，故其屬于中醫(yī)“消渴目病”范疇。李志英等在對(duì)糖尿病中醫(yī)證型與DR分期關(guān)系進(jìn)行探討時(shí)發(fā)現(xiàn)，DR在進(jìn)入PDR后其癥候以血瘀氣滯證和陰陽(yáng)兩虛證居多，病程超過10a者均以陽(yáng)虛證為主[10]。為進(jìn)一步研究并證實(shí)陽(yáng)虛與DR病情進(jìn)展的關(guān)系，明確陽(yáng)虛在DR進(jìn)入PDR病變過程中所起到的關(guān)鍵作用。段俊國(guó)等在對(duì)DR病情進(jìn)展與陽(yáng)虛病機(jī)關(guān)系進(jìn)行研究時(shí)也證實(shí)陽(yáng)虛可能影響機(jī)體能量代謝，致使機(jī)體內(nèi)環(huán)境發(fā)生重大變化，促使那些能刺激DR發(fā)生增殖性改變的新生血管因子的相關(guān)基因異常表達(dá)，使DR從非增殖期進(jìn)入增殖期，繼而推動(dòng)DR的病變進(jìn)程[11]。同期，羅向霞等在對(duì)DR陽(yáng)虛病機(jī)的代謝組學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí)結(jié)果也表明，DR患者中無陽(yáng)虛證與陽(yáng)虛證在代謝組指紋圖譜上存在一定的差異性，陽(yáng)虛可能影響整個(gè)機(jī)體的能量代謝，從而引起機(jī)體的內(nèi)環(huán)境發(fā)生一系列重大變化，最終加速DR的病變進(jìn)展[12]。

“陰中求陽(yáng)”作為中醫(yī)方劑配伍的經(jīng)典形式之一，更是溫陽(yáng)類方劑最主要的配伍形式，明代張介賓《景岳全書》的右歸丸是其進(jìn)一步發(fā)展，故有張介賓“善補(bǔ)陽(yáng)者，必于陰中求陽(yáng)，則陽(yáng)得陰助而生化無窮”這一配伍意義精辟而深刻的概括[13]。仲景在《金匱要略》中云“男子消渴，小便反多，以飲一斗，小便一斗，腎氣丸主之”首開溫陽(yáng)治療消渴的先河[14]。近代，諸多醫(yī)家也皆延用溫陽(yáng)法治療本病，也取得了一定療效。如桑景武在治療久施養(yǎng)陰潤(rùn)燥之品無效的糖尿病患者時(shí)，認(rèn)為多因腎陽(yáng)虛所致，因而在遣方用藥過程中喜加用附子以達(dá)到溫陽(yáng)之效[15]。然而，各醫(yī)家在單純使用溫陽(yáng)法治療消渴的同時(shí)，也都一致主張須兼顧氣血，以免溫補(bǔ)太過，應(yīng)在眾多補(bǔ)陽(yáng)之品中，適當(dāng)?shù)靥砑右恍┳剃幥鍧?rùn)之品，以達(dá) “陰中求陽(yáng)”之效[16]。如劉文華[17]觀察中醫(yī)對(duì)DR治療療效時(shí)也發(fā)現(xiàn)，單純運(yùn)用溫陽(yáng)法治療，多數(shù)DR患者眼底病理性改變?nèi)栽诶^續(xù)惡化，從而得出臨床上一味地采用辛、甘、溫?zé)岬臏仃?yáng)之品，使整個(gè)機(jī)體處于溫燥的狀態(tài)中，能一定程度上加速DR眼底改變的結(jié)論；因此對(duì)陰陽(yáng)兩虛者，他用右歸丸作為基礎(chǔ)方，另配伍茯苓、太子參、益母草等養(yǎng)陰滋陰之品后療效確切。同時(shí)，現(xiàn)代諸多醫(yī)家臨癥治療糖尿病以及其并發(fā)癥DR時(shí)，皆認(rèn)為一味地執(zhí)養(yǎng)陰清熱的治法有失偏頗，皆喜在采用溫陽(yáng)法時(shí)，適當(dāng)佐以養(yǎng)陰之法，以達(dá)到扶正固本，標(biāo)本兼治之效，且臨證每獲佳效[18]。

表1 各組大鼠Akt和PI3k蛋白表達(dá)量比較

(±s，n=8)

注：aP<0.05vs模型組；dP<0.01vs正常組；eP<0.05vs右歸丸低劑量組。

圖3 各組大鼠視網(wǎng)膜組織中Akt和PI3k蛋白的相對(duì)表達(dá) A：Akt；B：PI3k。aP<0.05vs模型組；dP<0.01vs正常組；eP<0.05vs右歸丸低劑量組。

圖4 Akt和PI3k蛋白在視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)水平 1：右歸丸低劑量組；2：右歸丸中劑量組；3：右歸丸高劑量組；4：正常組；5：模型組。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示與正常組比較，模型組、治療組PI3k和Akt表達(dá)顯著，提示在DR病變進(jìn)程中，PI3k和Akt的表達(dá)增強(qiáng)，PI3k/Akt信號(hào)通路處于激活狀態(tài)。國(guó)內(nèi)外也有類似文獻(xiàn)證實(shí)在DR的發(fā)生發(fā)展的過程中，居高不下血糖環(huán)境可激活PI3k/Akt這一信號(hào)通路，促使各類細(xì)胞因子合成與釋放增多，進(jìn)而加速DR病變進(jìn)程。給予“陰中求陽(yáng)”立法之右歸丸灌胃治療后，右歸丸中、高劑量組PI3k和Akt表達(dá)降低，PI3k/Akt信號(hào)通路一定程度上被抑制，表明“陰中求陽(yáng)”法可能通過調(diào)控PI3k/Akt信號(hào)通路，一定程度上抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成，延緩DR病變進(jìn)程，對(duì)其增殖期起到一定的治療作用。

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Effects of a traditional Chinese patent medicine for PI3K/Akt pro-survival signal channel in diabetic retinopathy rat

Huan Li1, Xiang-Xia Luo2, Yu-Pei Feng3, Han Wang3

Xiang-Xia Luo. Department of Ophthalmology, Gansu Provincial Hospital of Chinese Medicine, Lanzhou 730050, Gansu Province, China. jessica_lxx@163.com

?AIM: To investigate the effects ofreinforcingyangfromyinof a traditional Chinese patent medicine called YouguiWan for PI3K/Akt pro-survival signal channel in diabetic retinopathy rat.

YouguiWan;reinforcingyangfromyin; diabetic retinopathy; PI3K/Akt

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81460685)

1(411100)中國(guó)湖南省湘潭市婦幼保健院兒童眼保健科；2(730050)中國(guó)甘肅省蘭州市，甘肅省中醫(yī)院眼科；3(730050)中國(guó)甘肅省蘭州市，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

李歡，2013級(jí)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)五官科學(xué)碩士研究生，研究方向：中醫(yī)中藥治療眼底病。

羅向霞，2005級(jí)成都中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)五官科學(xué)博士研究生，主任醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)中藥治療眼底病.jessica_lxx@163.com

2016-07-13

2016-11-16

:Li H, Luo XX, Feng YP,etal. Effects of a traditional Chinese patent medicine for PI3K/Akt pro-survival signal channel in diabetic retinopathy rat.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(12):2195-2199

10.3980/j.issn.1672-5123.2016.12.06

Received：2016-07-13 Accepted：2016-11-16