胡英芳，王燦敏，宋云峰，王朦夏，魏宜，李澤華，李夏西

(1.廣東省第二人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，廣東 廣州 510310；2.南方醫(yī)科大學深圳醫(yī)院a.整形外科,b.腫瘤科，廣東 深圳 518000)

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Toll樣受體4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性的Meta分析

胡英芳1，王燦敏1，宋云峰1，王朦夏1，魏宜1，李澤華2a，李夏西2b

(1.廣東省第二人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，廣東 廣州 510310；2.南方醫(yī)科大學深圳醫(yī)院a.整形外科,b.腫瘤科，廣東 深圳 518000)

目的 探討Toll樣受體4(TLR4)基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性的關(guān)系。方法 檢索Pubmed，Cohrance，Embase，CNKI，維普，萬方等數(shù)據(jù)平臺從建庫截止到2015 年12 月31日的文獻，搜尋符合納入和排除條件的隨機對照研究，RevMan5.0.0軟件進行Meta分析。結(jié)果 共納入4 篇文獻，樣本總量3 707例，其中研究組1 681例，對照組2 026例。Meta分析未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性相關(guān)(等位基因AvsG∶OR=1.01，95%CI=0.84～1.23，P=0.89；基因型AA/AGvsGG∶OR=1.05，95%CI=0.55～2.02，P=0.87；基因型AAvsAG/GG∶OR=1.01，95%CI=0.82～1.24，P=0.95)。結(jié)論 未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性相關(guān)。

TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性；多態(tài)性;單核苷酸；腦膜炎球菌病；Meta分析

腦膜炎球菌(meningococcus)亦名腦膜炎奈瑟球菌(neisseria meningitides)，是導(dǎo)致細菌性腦膜炎的主要病原體。侵襲性腦膜炎球菌病(invasive meningococcal disease)在發(fā)達國家是兒童死亡和殘疾的主要病因，平均死亡率達10%[1]。研究發(fā)現(xiàn)免疫功能在一定程度上決定機體對腦膜炎球菌病的易感性及嚴重程度，缺乏腦膜炎球菌抗原特異抗體的人群更易發(fā)生腦膜炎球菌病[2]。某些基因如Toll樣受體(TLRs)基因可影響人體的先天和后天免疫反應(yīng)，從而與腦膜炎球菌病相關(guān)[3]。Toll樣受體4(TLR4)基因是Toll樣受體基因中研究最廣泛的一種[4]，研究表明TLR4基因12874位點A/G的突變(Asp299Gly)可以改變胞外受體結(jié)構(gòu)，影響個體對內(nèi)毒素和脂多糖(LPS)的反應(yīng)性，從而影響個體對腦膜炎球菌病的易感性[5]。但目前研究對于TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病是否相關(guān)仍存在爭議，由于Meta分析可綜合多種研究提供更可信證據(jù)，因此我們搜集現(xiàn)有文獻進行Meta分析，以期提供TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性關(guān)系的證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索策略 以“Toll-like receptor”或“TLR”、“polymorphism”、“meningococcal”或“meningitides”為檢索詞來檢索Pubmed，Cohrance，Embase數(shù)據(jù)庫，以“Toll樣受體” 或“TLR”、“腦膜炎球菌病”為檢索詞來檢索CNKI、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫。對象為不限語種公開發(fā)表的關(guān)于TLR4基因多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性關(guān)系的論文。采用參考文獻回溯法搜集更多文獻。所有檢索截止至2015年12月31日。

1.2 文獻納入標準 (1)關(guān)于TLR4基因多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性關(guān)系的病例對照研究；(2)研究數(shù)據(jù)完善，包含研究組和對照組的各基因型分布頻數(shù)；(3)論文中報告數(shù)據(jù)完整或根據(jù)報告結(jié)果能計算出各基因型分布頻數(shù)，文中統(tǒng)計方法無誤；(4)去除重復(fù)研究、數(shù)據(jù)不清無法計算基因型頻數(shù)的文獻；(5)納入文獻健康對照組符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗。

1.3 質(zhì)量評價及資料提取 參考英國牛津循證醫(yī)學中心文獻嚴格評價項目(Oxford critical appraisal skill program，OxfordCASP，2004)[6]評價納入病例對照研究的質(zhì)量：(1)樣本量是否充足；(2)診斷標準交待是否清楚；(3)對照組是否與研究組具有可比性；(4)基因檢測方法是否合理；(5)分組配匹情況；(6)數(shù)據(jù)是否充分完整等進行嚴格的質(zhì)量評價。由第一作者與通信作者商議確定每篇文章的評分以及是否納入，如存在爭議，通過與第三方討論解決分歧。

1.4 統(tǒng)計學方法 Meta分析采用Review Manager5.0.0軟件(Cochrane網(wǎng)下載)。各項研究的異質(zhì)性根據(jù)Cochrane手冊，采用Q檢驗和I2檢驗來評價。如I2<50%，表明異質(zhì)性尚可，采用固定效應(yīng)模型進行Meta分析；如I2>50%，表明異質(zhì)性較大，采用隨機效應(yīng)模型，同時采用敏感性分析排除異質(zhì)性最大的研究，最后采用固定效應(yīng)模型比較Meta分析的結(jié)果。發(fā)表偏倚通過漏斗圖來評價。

2 結(jié)果

2.1 文獻檢索結(jié)果 最終納入4篇英文文獻，納入研究的患者均為腦膜炎球菌病，對照組均為健康人群，經(jīng)驗證所有對照組均服從Hardy-Weinberg定律。樣本量總計為3 707例，其中研究組1 681例，對照組2 026例，具體見表1。

2.2 Meta分析結(jié)果

2.2.1 結(jié)果匯總 對TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病關(guān)系進行Meta分析，具體見表2。

表2 Meta分析結(jié)果

表1 納入文獻基本特征及數(shù)據(jù)提取

2.2.2 最終結(jié)果 對納入研究的進行Meta分析，檢驗結(jié)果示等位基因AvsG時Q=4.66，P=0.20，I2=36%，異質(zhì)性尚可，采用固定效應(yīng)模型得到OR=1.01(95%CI=0.84～1.23)，Z=0.14，P=0.89(圖1)，差異無統(tǒng)計學意義，即未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性相關(guān)。采用相同方法分析基因型AA/AGvsGG時：I2=0，OR=1.05(95%CI=0.55～2.02)，Z=0.16，P=0.87(圖2);基因型AAvsAG/GG時：I2=33%，OR=1.01(95%CI=0.82～1.24)，Z=0.06，P=0.95(圖3)。均未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性相關(guān)。漏斗圖評價納入的4項研究未見明顯發(fā)表偏倚(圖4)。

圖4 漏斗圖評價納入文獻的發(fā)表偏倚

3 討論

此研究采用Meta分析來評價TLR4基因Asp299Gly基因多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性的關(guān)系，Meta分析可綜合已發(fā)表的研究得出更全面客觀的結(jié)果[11]。個體對腦膜炎球菌的反應(yīng)一定程度上取決于免疫系統(tǒng)對細菌LPS的反應(yīng)[12]。CD14可與LPS結(jié)合蛋白與共同作用，使LPS轉(zhuǎn)移到Toll樣受體4/髓樣分化蛋白-2復(fù)合物TLR4/MD-2復(fù)合體上，相關(guān)信號通路的激活可導(dǎo)致NF-κB和AP-1活化，從而激活其他炎癥因子的表達[13]。因此，TLR4基因與各種炎癥相關(guān)疾病密切相關(guān)，如膿毒血癥[14]、肺結(jié)核[15]、潰瘍性結(jié)腸炎等[16]。TLR4基因有多種基因多態(tài)性，Orange等[17]在白種人中發(fā)現(xiàn)有13種TLR4基因多態(tài)性。Asp299Gly (rs4986790) 和Thr399Ile (rs4986791)是TLR4中最常見的錯義突變，在人群中占5%以上。TLR4 Asp299Gly是在TLR4第四外顯子896A/G的替換導(dǎo)致天門冬氨酸被甘氨酸替換，從而對LPS低反應(yīng)[18]。理論上說，TLR4 Asp299Gly可能與感染性疾病存在一定關(guān)聯(lián)，Read等[7]最早研究TLR4 Asp299Gly與腦膜炎球菌病的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)兩者無關(guān)聯(lián)。其后Smirnova等[8]的研究表明TLR4 Asp299Gly與腦膜炎球菌病存在臨界相關(guān)。關(guān)于TLR4 Asp299Gly與腦膜炎球菌病的關(guān)系一直存在爭議。我們采用Meta分析的方法，綜合納入4篇文獻，最終得到結(jié)論：TLR4 Asp299Gly與腦膜炎球菌病不論是在等位基因AvsG，還是在AA/AGvsGG或者AAvsAG/GG，其OR值的95%可信區(qū)間均經(jīng)過1，P>0.05，即未見TLR4 Asp299Gly與腦膜炎球菌病的相關(guān)性。分析原因是：(1)TLR4 Asp299Gly確實與腦膜炎球菌病不相關(guān)，在腦膜炎球菌病的發(fā)生發(fā)展中，TLR4 Asp299Gly主要是通過引起免疫功能改變來影響個體對感染的易感性[3]，可能TLR4 Asp299Gly未起到作用或作用較小不足以引起腦膜炎球菌病易感性統(tǒng)計學意義的改變；(2)腦膜炎球菌病易感性不僅與基因多態(tài)性相關(guān)，更與腦膜炎球菌的侵襲能力和生物學特性、個體的種族、年齡、性別、遺傳因素、生活環(huán)境等相關(guān)[2]。由于對腦膜炎球菌病與TLR4 Asp299Gly基因多態(tài)性關(guān)系的研究較少，本研究納入的研究數(shù)量及樣本量均較小，故未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病易感性相關(guān)性，隨著今后對TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與腦膜炎球菌病相關(guān)性研究的增加與深入，可能得出更切實可信的結(jié)論。雖然Meta分析可以綜合各項研究得到更可靠結(jié)論，但由于各研究之間的的異質(zhì)性和本身的發(fā)表偏倚對Meta分析結(jié)果存在影響，故本結(jié)論仍待更多隨機對照臨床研究來證實。

圖1 等位基因A vs G的森林圖

圖2 基因型AA/AG vs GG的森林圖

圖3 基因型AA vs AG/GG的森林圖

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A Meta-analysis of TLR4 Asp299Gly polymorphism contributing to meningococcal disease

HU Yingfang,WANG Canmin,SONG Yunfeng,et al

(DepartmentofICU,GuangdongNo.2ProvincialPeople'sHospital,Guangzhou,Guangdong510310,China)

Objective To investigate the association between TLR4 Asp299Gly polymorphism and meningococcal disease.Methods Pubmed,Embase,Cohrance,CNKI,VIP,Wanfang Database were searched to get related literature of clinical controlled trials.Meta-analysis was conducted by RevMan 5.0.0 software.Results Four case-control studies with 1681 patients and 2026 healthy controls were included.Meta-analysis showed that there was no significant correlation between TLR4 Asp299Gly polymorphism and meningococcal disease (allele AvsG∶OR=1.01,95%CI=0.84～1.23,P=0.89;AA/AGvsGG∶OR=1.05,95%CI=0.55～2.02,P=0.87;AAvsAG/GG∶OR=1.01,95%CI=0.82～1.24,P=0.95).Conclusion No significant correlation between TLR4 Asp299Gly polymorphism and meningococcal disease was found in the meta-analysis.

TLR4 Asp299Gly;Polymorphism;Single nucleotide;Meningococcal disease;Meta-analysis

廣東省醫(yī)學科學技術(shù)研究基金(A2016568)

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.032

2016-06-29，

2016-09-26)