吳青,李艷,徐萬洲,龔衛(wèi)杰,吳澤剛,蔡璇,韓瑞玲

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北 武漢 430060)

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結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在小兒結(jié)核診斷中的應(yīng)用研究

吳青,李艷,徐萬洲,龔衛(wèi)杰,吳澤剛,蔡璇,韓瑞玲

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北 武漢 430060)

目的 探討結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)在小兒結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值。方法 回顧性分析78例疑似小兒結(jié)核患者病例，收集患者年齡、性別、是否接種卡介苗、臨床表現(xiàn)及診斷、結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)試驗(yàn)及T-SPOT.TB檢測結(jié)果。結(jié)合最終臨床診斷，對比分析PPD與T-SPOT.TB檢測在小兒結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值。結(jié)果 78例疑似小兒結(jié)核患者分為確診及臨床診斷小兒結(jié)核組13例，排除小兒結(jié)核組65例。T-SPOT.TB和PPD檢測的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為84.6%、100.0%、100.0%、97.0%和69.2%、76.9%、37.5%、90.9%。T-SPOT.TB檢測的敏感度、特異性均高于PPD，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 T-SPOT.TB檢測診斷小兒結(jié)核的敏感性、特異性均較高。T-SPOT.TB檢測可輔助診斷小兒結(jié)核，陰性結(jié)果有助于排除小兒結(jié)核。

結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn);小兒結(jié)核;結(jié)核菌素試驗(yàn);診斷

近年來，結(jié)核分枝桿菌 (MTB) 感染所致的結(jié)核病已成為嚴(yán)重危害人類健康的傳染病之一[1-2]。0～14歲兒童由于其免疫力較低初次感染結(jié)核分枝桿菌后就有可能發(fā)展成結(jié)核病，如未能及時發(fā)現(xiàn)并診斷極易發(fā)展成重癥肺結(jié)核和肺外結(jié)核[3]。目前結(jié)核病確診手段依然是細(xì)菌學(xué)方法。但由于結(jié)核菌的遺傳特性，致使常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢查方法存在著取材困難、靈敏度低、操作復(fù)雜，需時間較長等缺點(diǎn)[4]。結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)試驗(yàn)是MTB感染篩查與輔助診斷的經(jīng)典方法，但其診斷敏感性、特異性均不能滿足臨床需要。因此，盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌感染是預(yù)防與控制結(jié)核病的關(guān)鍵，尋求一個敏感度及特異度均較高的檢測方法已成為臨床的迫切需求。結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)是一種新型免疫學(xué)診斷方法。大量研究表明[5-7]結(jié)核特異抗原誘導(dǎo)活化分泌γ干擾素的T淋巴細(xì)胞可作為結(jié)核分枝桿菌感染的一種可靠標(biāo)志物，已被廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的基礎(chǔ)研究和早期診斷等方面。本研究主要探討T-SPOT.TB在小兒結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年8月至2016年4月武漢大學(xué)人民醫(yī)院收治的疑似小兒結(jié)核的患者78例，其中男性37例，女性41例，年齡2個月～14歲，平均年齡(6.34±0.73)歲。根據(jù)病史、臨床表現(xiàn)、 影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)檢查、病原學(xué)檢查結(jié)果以及抗結(jié)核治療效果進(jìn)行診斷，分為小兒結(jié)核組(確診及臨床診斷組)患者13例，排除小兒結(jié)核患者65例。分組標(biāo)準(zhǔn)為：(1)確診組：結(jié)核桿菌培養(yǎng)、涂片或gene檢測陽性或有病理學(xué)證據(jù)者；(2)臨床診斷組：結(jié)核桿菌培養(yǎng)陰性，但臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查等支持結(jié)核感染，且抗結(jié)核治療有效；(3)排除患者：明確為其他疾病所致，或者經(jīng)其他治療(未經(jīng)抗結(jié)核治療) 病情改善或治愈。

1.2 PPD檢測 結(jié)核菌素純蛋白衍生物TB.PPD(北京祥瑞生物制品有限公司生產(chǎn))；于患者前臂掌側(cè)皮內(nèi)注射TB.PPD 0.1 mol·L-1(5 U)，72 h后觀察注射部位的反應(yīng)情況。參照《中國結(jié)核病防治規(guī)劃實(shí)施工作指南》(2008版)[8]標(biāo)準(zhǔn)：硬結(jié)直徑<5 mm為陰性(-)，≥5～<10 mm為弱陽性(+)，≥10～≤20 mm為陽性(+++)，>20 mm或局部出現(xiàn)水泡、淋巴管炎、壞死等為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 T-SPOT.TB檢測 收集患者新鮮5 mL肝素鈉抗凝全血，使用試劑盒(T-SPOT TB，Oxford Immunote Ltd，Abingdon，UK) 從外周抗凝全血中分離出單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，在每個預(yù)包被抗人-γ干擾素抗體的板孔中加入2．5×105個單個核細(xì)胞(PBMCs)，再往4個單獨(dú)板孔中分別加入陰性對照試劑(細(xì)胞培養(yǎng)液)、兩種抗原(ESAT-6，CFP-10)及陽性對照，并置于37 ℃，5%CO2，且保持一定濕度(60%～80%)的培養(yǎng)箱孵育16～20 h后，利用堿性磷酸酶偶聯(lián)的二抗和底物顯色，洗板后對斑點(diǎn)進(jìn)行計數(shù)。結(jié)果判定：抗原ESAT-6或CFP-10板孔中任意一孔點(diǎn)數(shù)與對照孔點(diǎn)數(shù)之差為6即為檢測陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，分別計算PPD和T-SPOT.TB試驗(yàn)的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。兩組比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

根據(jù)患者臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)檢查、病原學(xué)檢查等結(jié)果，最終診斷為小兒結(jié)核共13例(確診小兒結(jié)核5例、臨床診斷小兒結(jié)核8例)；臨床診斷排除小兒結(jié)核65例。T-SPOT.TB與PPD檢查的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為84.6%、100.0%、100.0%、97.0%和69.2%、76.9%、37.5%、90.9%。T-SPOT.TB檢測的靈敏度(84.6%)和特異度(100.0%)均高于PPD,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。臨床診斷、T-SPOT.TB、PPD檢測結(jié)果見表1，兩種檢測方法的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值見表2。

表1 T-SPOT.TB與PPD檢測結(jié)果比較/例

表2 T-SPOT.TB與PPD對小兒結(jié)核診斷效能的比較/%

3 討論

結(jié)核是一種常見傳染病，由于居住條件的逐步提高和抗結(jié)核藥物的廣泛使用，使得結(jié)核的發(fā)病率明顯下降。但近年來，由于耐藥性結(jié)核桿菌的增加，結(jié)核的發(fā)生率有所上升[2]。0～14歲小兒作為一個特殊的群體，其感染后患病率高，病情嚴(yán)重，預(yù)后差。小兒結(jié)核自覺癥狀少，肺結(jié)核特別是肺外結(jié)核的標(biāo)本采集困難。因此，臨床診斷小兒結(jié)核十分困難，如何早期診斷小兒結(jié)核是臨床共同關(guān)注的問題。PPD試驗(yàn)具有快速、簡便、成本低的優(yōu)點(diǎn)，但在小兒檢測的靈敏度、特異度方面受患者免疫力影響較大。本研究中PPD試驗(yàn)靈敏度為69.2%，與小兒免疫力低有關(guān)；特異度為76.9%，此受我國實(shí)行卡介苗接種的影響。

T-SPOT.TB作為一種新型免疫性診斷方法，為臨床醫(yī)學(xué)帶來了快速準(zhǔn)確的結(jié)核病診斷方法。T-SPOT.TB試驗(yàn)具有耗時少、取材方便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。目前，歐美等發(fā)達(dá)國家均將T-SPOT.TB試驗(yàn)列入結(jié)核病診療指南，成為替代診斷結(jié)核病的主要方法[9]。本研究顯示T-SPOT.TB試驗(yàn)檢測小兒結(jié)核靈敏度為84.6%，與鐘一鳴等[10]報告的靈敏度為82.5%基本一致。T-SPOT.TB試驗(yàn)可作為診斷小兒結(jié)核的有效方法。

小兒結(jié)核診斷困難，晚期引起嚴(yán)重的后遺癥。因此，早期診斷或鑒別診斷意義重大，本研究中11例診斷結(jié)核的患兒 T-SPOT.TB試驗(yàn)檢測結(jié)果均為陽性，特異度為100%，盡管本研究的數(shù)量不足以得出明確結(jié)論，但研究提示T-SPOT.TB試驗(yàn)陽性結(jié)果可以診斷小兒結(jié)核。

綜上所述，T-SPOT.TB試驗(yàn)具有較高靈敏度、特異度，優(yōu)于PPD試驗(yàn)，可輔助診斷小兒結(jié)核。T-SPOT.TB試驗(yàn)陽性可診斷小兒結(jié)核。

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Diagnostic performance of T-SPOT.TB assay in children with tuberculosis

WU Qing,LI Yan,XU Wanzhou,et al

(ClinicalLaboratoryDepartment，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan,Hubei430060,China)

Objective To evaluate the application value of T-SPOT.TB assay in the diagnosis of tuberculosis in children.Methods A total of 78 patients of children with suspected tuberculosis were enrolled in this retrospective study.Age,gender,imageology character,clinical manifestation and diagnosis,PPD and T-SPOT.TB testing result were collected.According to the results of clinical diagnosis,the diagnostic value of the two tests were evaluated and compared with each other.Results Thirteen patients had culture-confirmed or probable tuberculosis,and the remaining 65 patients did not have tuberculosis.The sensitivity,specificity,positive predictive value,and negative predictive value of PPD and T-SPOT.TB test were 84.6%,100.0%,100.0%,97.0% and 69.2%,76.9%,37.5%,90.9% respectively.The sensitivity and specificity of T-SPOT.TB assay were higher than PPD test (P<0.05).Conclusions Compared with PPD,T-SPOT.TB assay possesses more satisfactory sensitivity and specificity in the diagnosis of tuberculosis in children,which could provide useful support in diagnosing tuberculosis in children.And tuberculosis could be excluded based on a negative T-SPOT.TB assay.

T-SPOT.TB;Children;PPD test;Diagnosis

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.023

2016-05-20，

2016-10-08)