杜妍，宗凱，夏泉，余曉峰

(1.安徽出入境檢疫檢驗(yàn)局，安徽 合肥 230022;2.安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230032；3.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230022)

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◇藥物分析◇

氣相色譜法檢測(cè)黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量

杜妍1，2，宗凱1，夏泉3，余曉峰1

(1.安徽出入境檢疫檢驗(yàn)局，安徽 合肥 230022;2.安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230032；3.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230022)

目的 了解目前安徽省部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)中所使用的的黃芪中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的現(xiàn)狀。方法 從安徽省部分三級(jí)甲等醫(yī)療機(jī)構(gòu)采集樣品并收集相關(guān)產(chǎn)地信息，按照2010版《中國(guó)藥典》中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留氣相色譜檢測(cè)方法，黃芪飲片粉粹后以有機(jī)溶劑超聲提取、用濃硫酸磺化后，采用不分流進(jìn)樣方式，經(jīng)兩次程序升溫技術(shù)分離，后采用電子捕獲檢測(cè)器(ECD)檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果 所采集的黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留遠(yuǎn)低于《中國(guó)藥典》2010年版一部規(guī)定要求。但不同產(chǎn)地來(lái)源的樣品仍存在差異。結(jié)論 該方法可以快速準(zhǔn)確的檢測(cè)黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的含量，為安全用藥提供保障。

黃芪飲片；有機(jī)氯農(nóng)藥殘留；現(xiàn)狀調(diào)查

中藥農(nóng)藥殘留關(guān)系到安全用藥的問(wèn)題，嚴(yán)重阻礙了中藥走向國(guó)際市場(chǎng)的步伐。如何確保中藥材的質(zhì)量安全成為目前迫在眉睫的首要問(wèn)題。在過(guò)去的幾十年中，有機(jī)氯農(nóng)藥是一種高效廣譜殺蟲(chóng)劑，被世界各地廣泛使用，并有嚴(yán)重的神經(jīng)毒性和實(shí)質(zhì)臟器毒性，可以引發(fā)癌癥。而且在禁用十幾年后，由于其穩(wěn)定性高，部分難以分解的農(nóng)藥有效化學(xué)成分在藥材中的聚集，仍能形成危害使用者健康的農(nóng)藥殘留問(wèn)題。中藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥主要為六六六、滴滴涕及五氯硝基苯三個(gè)品種。1983年，我國(guó)就明確禁止使用有機(jī)氯農(nóng)藥，但是由于藥材的種植期較長(zhǎng)，特別是像黃芪這種多年生的根類藥材，十分容易受到有機(jī)氯農(nóng)藥的污染。國(guó)內(nèi)關(guān)于有機(jī)氯殘留檢測(cè)多集中在土壤[1]、中藥材[2-4]、煙草[5]、河流、茶、地表水、地下水、水產(chǎn)品等領(lǐng)域。但近年來(lái)并未有關(guān)于藥食同源的中藥材中有機(jī)氯殘留量檢測(cè)的報(bào)告。黃芪飲片作為傳統(tǒng)中藥材，具有扶正補(bǔ)氣之功效，更有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、利尿、保肝、抗應(yīng)激、抗衰老、降壓和較廣泛的抗菌作用，是最為常用的補(bǔ)中益氣、藥食兩用中藥材[6]，市場(chǎng)需求較大，其安全性必須得到保障。2010版《中國(guó)藥典》中明確規(guī)定了其有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的含量限定[總六氯甲苯(BHC)不得過(guò)千萬(wàn)分之二；總滴滴涕(DDT)不得過(guò)千萬(wàn)分之二；五氯硝基苯(PCNB)不得過(guò)千萬(wàn)分之一][7]。為了解目前安徽省部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀，判斷其是否符合《中國(guó)藥典》2010版標(biāo)準(zhǔn)十分有必要，我們參照了2010年版《中國(guó)藥典》一部有機(jī)氯農(nóng)藥殘留測(cè)定法，對(duì)采集于安徽省不同醫(yī)療機(jī)構(gòu)中黃芪飲片的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，調(diào)查和評(píng)價(jià)目前黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥是否符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 黃芪藥材10份，分別購(gòu)自安徽省部分三級(jí)甲等醫(yī)療機(jī)構(gòu)，分別以H1～H10表示(見(jiàn)表1)。有機(jī)氯農(nóng)藥對(duì)照品溶液：六氯甲苯(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)，滴滴涕(PP′-DDE，PP′-DDD，OP′-DDT，PP′-DDT)，五氯硝基苯(PCNB)均由安徽出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心提供。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備 Agilent Technologies7890A型氣相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)，配備63Ni ECD型電子捕獲檢測(cè)器，vortex-genie2旋渦混合器(美國(guó)SI公司)，Gen-Probe超聲儀(美國(guó)基因探針(Gen-Probe)公司)，avanti 301高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)貝克曼公司)，N-EVAP-112氮吹儀(美國(guó)Organomation公司)。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 檢測(cè)器溫度：300 ℃，進(jìn)樣口：230 ℃，不分流進(jìn)樣。初始程序升溫100 ℃，每分鐘10 ℃升至220 ℃，每分鐘8 ℃升至250 ℃，保持10 min。高純氮?dú)?>99．999%);載氣流速:1.5 mL·min-1，恒流模式，尾吹流量:58.5 m L·min-1，不分流，進(jìn)樣量為1 μL。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備[7]適量稱取六氯甲苯(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)，滴滴涕(PP′-DDE，PP′-DDD，OP′-DDT，PP′-DDT)，五氯硝基苯(PCNB)三種農(nóng)藥對(duì)照品，分別用石油醚稀釋成約5 mg·L-1的溶液，作為儲(chǔ)備液。精密量取上述儲(chǔ)備液各0.5 mL，用石油醚稀釋至10 mL，混合制成0.25 mg·L-1的混合液，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用適量石油醚分別稀釋成5、10、20、50、100 μg·L-1的溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備[7]參考《中國(guó)藥典》2010年版一部制備方法。取適量黃芪飲片在烘箱內(nèi)干燥4 h，用中藥粉碎機(jī)粉碎，稱取2 g，置于100 mL燒杯中加水浸泡過(guò)夜。加40 mL丙酮，稱重后超聲30 min，用丙酮補(bǔ)足損失的重量后，加6 g氯化鈉，再加30 mL二氯甲烷，稱重后超聲15 min，用二氯甲烷補(bǔ)足損失的重量。迅速將有機(jī)相轉(zhuǎn)入100 mL燒杯中，并加入適量無(wú)水硫酸鈉，靜置4 h。精密稱取35 mL，旋蒸濃縮至近干，加入適量石油醚后旋蒸濃縮，重復(fù)3次，用5 mL石油醚溶解，再緩慢加入1 mL硫酸后移至10 mL離心管內(nèi)，渦旋離心(3 000 r·min-1)10 min。精密量取2 mL上清液，旋轉(zhuǎn)蒸干后，精密稀釋至1 mL。

1.3.4 線性與范圍 精密吸取1 μL混合對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度平行測(cè)定3次，采用氣相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，平均峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算相關(guān)系數(shù)和回歸方程。

2 結(jié)果

2.1 黃芪中藥飲片樣品信息 共收集10家醫(yī)療機(jī)構(gòu)的黃芪飲片樣品，具體見(jiàn)表1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程 有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2，由表2可見(jiàn)，有機(jī)氯農(nóng)藥混合對(duì)照品溶液線性關(guān)系良好。

2.3 實(shí)際樣品分析結(jié)果 檢測(cè)10種不同醫(yī)療機(jī)構(gòu)的黃芪飲片農(nóng)藥殘留量，均發(fā)現(xiàn)有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留(見(jiàn)表3)。色譜圖見(jiàn)圖1，滴滴涕(PP′-DDE，PP′-DDD，PP′-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)均未檢出。

表1 黃芪中藥飲片樣品信息

表2 有機(jī)氯農(nóng)藥線性及回歸方程

表3 樣品的α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、OP′-DDT檢測(cè)結(jié)果

3 討論

測(cè)定結(jié)果表明，在采集的10組樣品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量都很低，均符合2010版《中國(guó)藥典》對(duì)甘草、黃芪兩種藥材規(guī)定(≤0.2 μg·g-1)[7]、《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)藥用植物原料、飲片、提取物及其制劑規(guī)定(≤0.1 μg·g-1)[8]、《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)中藥材規(guī)定(≤0.3 μg·g-1)[9]。在黃芪飲片中六六六有4種異構(gòu)體有殘留，滴滴涕只有部分殘留，而其它含量均低于最低檢出限而未被檢出。但不同批號(hào)的黃芪藥材有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量差異較大，如H5號(hào)樣品的總BHC殘留量較其他樣品的殘留量大，這種現(xiàn)象的出現(xiàn)，可能與黃芪種植過(guò)程有關(guān)[10]，也可能與氣候等環(huán)境因素有關(guān)，農(nóng)藥殘留的轉(zhuǎn)化和積聚的機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究,為控制農(nóng)藥殘留提供安全用藥提供理論依據(jù)。有機(jī)氯農(nóng)藥的穩(wěn)定性好，半衰期長(zhǎng)，雖然在我國(guó)已經(jīng)禁用20多年，但在中藥中仍有一定殘留，因此監(jiān)測(cè)黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留對(duì)于保證其質(zhì)量十分必要。而本次實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果均符合要求，各醫(yī)院黃芪飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留均穩(wěn)定在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

本研究?jī)H對(duì)安徽省部分三級(jí)甲等醫(yī)院黃芪飲片中有機(jī)氯殘留現(xiàn)狀進(jìn)行了調(diào)查，而二級(jí)及以下醫(yī)院的黃芪中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀還待進(jìn)一步的調(diào)查。

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Determination of organochorine pesticide residues in Radix Astragali by GC-ECD

DU Yan1，2， ZONG Kai1， XIA Quan3,et al

(1.AnhuiEntry-ExitInspectionandQuarantineTechnology,Hefei,Anhui230022,China;2.SchoolofPharmaceuticalSciences,AnhuiMedicalUniversity,Hefei,Anhui230032,China;3.TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei,Anhui230022,China)

Objective To investigate organochlorine pesticides residue in Radix Astragali collected from different medical institutions.Methods We collected samples and information of sources from different medical institutions.According to the "Chinese pharmacopoeia" we used gas chromatography method.Samples were extracted with mixed solvents by ultrasonic,then purified with sulfuric acid.Splitless injection was adopted before the detection of ECD detector and determination of contents by external standard method.Results Organochlorine pesticides residue in Radix Astragali produced in Gansu and Inner Mongolia were much lower than the standard of Chinese pharmacopeia,but there were some differences among samples from different sources.Conclusions This method is quick and accurate,which can provide a guarantee for the safe use of drug.

Radix Astragali;Residue of organochlorine pesticides;Status survey

國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015IK001)

余曉峰，男，研究員，研究方向:研究方向?yàn)槭称钒踩?E-mail：amyxf@126.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.011

2016-02-26，

2016-05-22)