鹿慧燕, 仝水田, 張 蘊(yùn), 羅 虹,周 雷, 萬(wàn)義梅, 肖孝輝

(1.浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,浙江 金華 321004;2.浙江師范大學(xué) 地理與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004)

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新型吡唑啉化合物的合成及抑菌活性研究*

鹿慧燕1, 仝水田1, 張 蘊(yùn)1, 羅 虹2,周 雷1, 萬(wàn)義梅1, 肖孝輝1

(1.浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,浙江 金華 321004;2.浙江師范大學(xué) 地理與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004)

通過(guò)1,3-二取代苯駢三氮唑葉立德與α,β-不飽和醛、酮、腈的加成反應(yīng),合成了9個(gè)多官能團(tuán)取代的吡唑啉及2個(gè)多取代的吡唑化合物;通過(guò)生長(zhǎng)速率法測(cè)定了這些化合物對(duì)水稻稻瘟病菌、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌、楊樹(shù)潰瘍病菌、苦瓜枯萎病菌、黃瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、水稻紋枯病菌和小麥赤霉病菌等8種植物致病真菌的抑菌活性.結(jié)果表明:當(dāng)供試劑量為100 μg/mL時(shí),1-[1-(2-乙基胺基苯基)-4,5-二苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮和1-[4-(3-甲基苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮對(duì)水稻稻瘟病菌具有較好的抑菌活性,抑制率分別達(dá)到100%和84%;1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4-對(duì)甲苯基-4,5-二氫-1H-吡唑-3-甲醛對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的抑制率達(dá)到84.2%;1-[4-(2,5-二甲氧基苯基)-1-(2-甲氨基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮對(duì)苦瓜枯萎病菌和水稻稻瘟病菌的抑制率均高于75%.

吡唑;吡唑啉;真菌;抑菌活性

植物病原真菌引起的病害約占植物病害的70%～80%,如水稻稻瘟病菌、小麥赤霉病菌、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌等.及時(shí)噴灑農(nóng)藥是預(yù)防這些病害的有效手段，而長(zhǎng)期使用單一農(nóng)藥會(huì)導(dǎo)致這些病菌的抗藥性增強(qiáng)、不良反應(yīng)增加[1].因此，開(kāi)發(fā)新的抑菌藥物是防治農(nóng)作物病害的重要途徑之一.

吡唑及吡唑衍生物是一類(lèi)重要的五元氮雜環(huán)化合物,是許多生物活性化合物的主要骨架.自1950年美國(guó)Rubbe公司[2]研制開(kāi)發(fā)了吡唑類(lèi)殺菌劑茂葉寧、綠葉寧和安種寧等以來(lái),吡唑類(lèi)化合物的合成[3-7]和應(yīng)用[8-12]備受藥學(xué)研究者的廣泛關(guān)注,已成功開(kāi)發(fā)上市的有銳勁特、茚蟲(chóng)威[13]等吡唑類(lèi)農(nóng)藥.相關(guān)構(gòu)效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，吡唑啉環(huán)上乙?；欣谔岣哌吝蜻目咕壬锘钚訹14-17].為進(jìn)一步探究這種構(gòu)效關(guān)系，本文合成了9個(gè)環(huán)上帶有乙?；蚣柞；倪吝蜻衔锖?個(gè)環(huán)上帶有腈基的吡唑化合物,探討了這些化合物對(duì)水稻稻瘟病菌、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌等8種植物致病真菌的抑菌活性,希望能為新型抑菌藥物的設(shè)計(jì)、合成提供參考.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

生麥芽購(gòu)自亳州市中藥飲片廠;瓊脂粉、蔗糖、蛋白胨均購(gòu)自北京博奧星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;放線菌酮購(gòu)自上海信然生物科技有限公司.其他原料及試劑均為市售分析純化學(xué)試劑.

核磁共振譜(NMR)通過(guò)Bruker公司DRX-400核磁共振儀測(cè)定,氘代氯仿(CDCl3)為溶劑,四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo);高分辨質(zhì)譜(HRMS)通過(guò)美國(guó)安捷倫高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜儀測(cè)定;紅外光譜(IR)用美國(guó)尼高力傅里葉紅外光譜儀(NEXUS670FT-IR)測(cè)定,KBr壓片法.

1.2 供試菌種

水稻稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)、楊樹(shù)潰瘍病菌(Dothiorellagregaria)、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌(Valsamali)、苦瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf. sp.mornordicae)、小麥赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf. sp.cucumerinum)和水稻紋枯病菌(Rhizoctoniasolani),均由浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院微生物應(yīng)用技術(shù)與產(chǎn)品開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室提供.

1.3 培養(yǎng)基的制備

麥芽浸汁培養(yǎng)基(MEA):生麥芽20 g，煮沸20 min,過(guò)濾，保留濾液,加蛋白胨1 g,蔗糖20 g,水1 L.加入20 g瓊脂粉得相應(yīng)的固體培養(yǎng)基.

1.4 化合物的合成

1.4.1 吡唑啉類(lèi)化合物的合成

參照文獻(xiàn)[18]，反應(yīng)式及相關(guān)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1.室溫下,向25 mL圓底燒瓶中依次加入1.65 mmolα,β-不飽和醛酮、1.5 mmol溴化1,3-二取代苯駢三氮唑、2 mL二甲基亞砜(DMSO)和10 mL四氫呋喃(THF),攪拌溶解，冰水浴冷卻降溫至0 ℃,加入1.5 mmol(0.168 g)叔丁醇鉀(t-BuOK),并逐漸攪拌至室溫.用薄層色譜法(展開(kāi)劑:V(乙酸乙酯)/V(石油醚)=1/15)跟蹤至反應(yīng)結(jié)束,減壓濃縮回收溶劑,殘余物中加入15 mL水,分別用20 mL乙酸乙酯萃取3次,合并有機(jī)相,再分別用20 mL飽和食鹽水洗滌2次,有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥,減壓濃縮回收溶劑,濃縮剩余物通過(guò)柱色譜法快速分離(洗脫劑:V(乙酸乙酯)/V(石油醚)=1/15)，得到9個(gè)純的吡唑啉類(lèi)化合物.

1.4.2 吡唑類(lèi)化合物的合成

參照文獻(xiàn)[18]，反應(yīng)式及相關(guān)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖2.室溫下,向10 mL反應(yīng)試管中依次加入1 mmolα,β-不飽和腈、1 mmol(0.304 g)溴化3-甲基-1-芐基苯駢三氮唑、5 mL二甲基亞砜,攪拌至物料全部溶解,加入1 mmol(0.112 g)叔丁醇鉀,繼續(xù)攪拌.氣相色譜儀跟蹤至肉桂腈消耗完全,加入10 mL水,分別用20 mL乙酸乙酯萃取3次,合并有機(jī)相,并用20 mL飽和食鹽水洗滌2次,無(wú)水硫酸鈉干燥,減壓濃縮回收溶劑,棕紅色剩余物通過(guò)柱色譜法快速分離(洗脫劑:V(乙酸乙酯)/V(石油醚)=1/15),得到2個(gè)純的吡唑類(lèi)化合物.

圖1 9個(gè)吡唑啉類(lèi)化合物的合成

圖2 2個(gè)吡唑類(lèi)化合物的合成

1.5 抗菌活性的測(cè)定

利用生長(zhǎng)速率法[19-20]測(cè)定了11個(gè)化合物對(duì)8種植物致病真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性.先將待測(cè)化合物用丙酮溶解,配得質(zhì)量濃度是1 mg/mL的母液.分別吸取1 mL待測(cè)化合物母液和9 mL MEA培養(yǎng)基于無(wú)菌培養(yǎng)皿中,充分振搖使其混合均勻,使培養(yǎng)基中待測(cè)樣品的最終質(zhì)量濃度為100 μg/mL.以等量的放線菌酮作為陽(yáng)性對(duì)照,等量丙酮作空白對(duì)照.將所有的液體培養(yǎng)基靜置冷卻，然后將已活化的植物致病真菌用無(wú)菌打孔器打成直徑為5 mm的菌餅,置于上述培養(yǎng)基中.每個(gè)樣品重復(fù)3次,放置在28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)2～6 d后,采用十字交叉法測(cè)量各供試菌的菌落直徑.計(jì)算抑制率的公式如下:

吡唑啉類(lèi)化合物2～4的IC50值測(cè)定:將待測(cè)吡唑啉類(lèi)化合物2,3和4號(hào)分別用丙酮配制成1 000 μg/mL的溶液,然后采用梯度稀釋法配制成質(zhì)量濃度為1 000，500,250,100和10 μg/mL的溶液,加入培養(yǎng)基后化合物的最終質(zhì)量濃度分別為100,50,25,10和1 μg/mL.參照文獻(xiàn)[19-20]中生長(zhǎng)速率法測(cè)定這些化合物對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的抑制活性.采用劑量對(duì)數(shù)-抑制率法計(jì)算得到化合物抑制蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌絲生長(zhǎng)的IC50值.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 化合物的結(jié)構(gòu)表征

化合物1：4-(2-溴苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-吡唑-3-甲醛，棕色油狀液體,產(chǎn)率75%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:9.84(s,1H),7.60(d,J=8.1 Hz,1H),7.32～7.18(m,6H),7.13(t,J=7.8 Hz,1H),7.02(d,J=7.8 Hz,1H),6.97(t,J=7.8 Hz,1H),6.69(dd,J=8.1,3.8 Hz,2H),6.45(t,J=8.1 Hz,1H),6.35(br,1H),5.44(d,J=5.3 Hz,1H),4.88(d,J=5.3 Hz,1H),2.94(d,J=4.8 Hz,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:183.7,146.8,141.6,138.7,133.7,129.3,129.2,128.5,128.4,128.0,127.4,126.6,126.0,125.7,123.6,118.8,116.0,111.5,77.6,55.0,30.5;IR(KBr)σ/cm-1:3 400,3 129,2 813,1 655,1 601,1 518,1 468,1 401,1 293,1 274,1 151,1 024,739,698;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C23H20BrN3O[M]+為433.079 0,測(cè)量值為433.078 8.

化合物2：1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4-對(duì)甲苯基-4,5-二氫-1H-吡唑-3-甲醛,棕色油狀液體,產(chǎn)率58%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:9.78(s,1H),7.30～7.19(m,3H),7.16～7.09(m,4H),7.07～7.03(m,2H),6.95(t,J=7.8 Hz,1H),6.67(t,J=8.1 Hz,2H),6.47(q,J=4.8 Hz,1H),6.43(t,J=7.8 Hz,1H),5.46(d,J=6.1 Hz,1H),4.30(d,J=6.1 Hz,1H),2.92(d,J=5.0 Hz,3H),2.30(s,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:184.1,147.7,141.5,139.6,137.6,137.4,130.1,129.5,128.5,127.2,126.8,125.6,125.5,118.5,116.0,111.6,78.3,55.9,30.6,21.3;IR(KBr)σ/cm-1:3 413,3 129,2 814,2 796,1 650,1 513,1 401,1 147,743,701;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C24H23N3O[M]+為369.184 1,測(cè)量值為369.184 2.

化合物3：4-(2-氯苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-吡唑-3-甲醛,棕色油狀液體,產(chǎn)率64%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:9.84(s,1H),7.46～7.41(m,1H),7.35～7.18(m,7H),7.07～7.02(m,1H),6.98(t,J=7.8 Hz,1H),6.69(t,J=7.6 Hz,2H),6.46(t,J=7.8 Hz,1H),6.38(br,1H),5.47(d,J=5.8 Hz,1H),4.84(d,J=5.8 Hz,1H),2.96(d,J=4.8 Hz,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:183.8,146.4,141.6,138.9,137.0,133.4,130.4,129.4,129.2,129.0,128.6,127.8,126.6,125.9,125.7,118.8,116.0,111.6,77.4,52.9,30.5;IR(KBr)σ/cm-1:3 401,3 130,2 813,1 654,1 601,1 521,1 401,1 294,1 275,1 151,759,738,697;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C23H20ClN3O[M]+為389.129 5,測(cè)量值為389.129 1.

化合物4：4-(2-甲氧基苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-吡唑-3-甲醛,棕色油狀液體,產(chǎn)率62%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:9.93(s,1H),7.39～7.30(m,4H),7.26(d,J=7.2 Hz,2H),7.10(d,J=7.8 Hz,1H),7.04(t,J=8.1 Hz,1H),7.00～6.94(m,2H),6.76(d,J=7.8 Hz,2H),6.58(q,J=4.6 Hz,1H),6.52(t,J=7.8 Hz,1H),5.56(d,J=5.8 Hz,1H),4.69(d,J=5.8 Hz,1H),3.81(s,3H),3.01(d,J=4.6 Hz,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:184.3,157.0,146.6,141.6,140.0,129.2,129.1,128.9,128.2,127.5,127.0,125.9,125.4,121.1,118.7,116.0,111.4,111.3,76.8,55.4,51.5,30.6;IR(KBr)σ/cm-1:3 404,3 129,2 810,1 661,1 597,1 522,1 401,1 280,1 250,1 144,1 105,1 020,777,748,701;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C24H23N3O2[M]+為385.179 0,測(cè)量值為385.179 2.

化合物5：1-[4-(2,5-二甲氧基苯基)-1-(2-甲氨基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮,棕色油狀液體,產(chǎn)率72%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.27～7.13(m,5H),6.91(t,J=8.1 Hz,1H),6.81～6.78(m,1H),6.72(dd,J=8.8,2.8 Hz,1H),6.66～6.62(m,2H),6.53(d,J=3.0 Hz,1H),6.42(t,J=7.6 Hz,1H),6.34(br,1H),5.36(d,J=6.3 Hz,1H),4.58(d,J=6.3 Hz,1H),3.68(s,3H),3.66(s,3H),2.91(d,J=4.6 Hz,3H),2.48(s,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:191.7,153.8,151.1,145.7,141.5,140.0,129.6,129.0,128.0,127.7,126.0,124.8,118.5,116.0,115.3,112.3,112.2,111.2,76.4,56.0,55.6,52.4,30.6,25.8;IR(KBr)σ/cm-1:3 399,3 127,2 832,1 652,1 600,1 521,1 500,1 400,1 279,1 217,1 148,740,699;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C26H27N3O3[M]+為429.205 2,測(cè)量值為429.205 0.

化合物6：1-[1-(2-乙基胺基苯基)-4,5-二苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮,棕色油狀液體,產(chǎn)率41%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.35～7.22(m,6H),7.17(dd,J=14.0,7.2 Hz,4H),6.93(t,J=7.8 Hz,1H),6.68(dd,J=16.8,8.0 Hz,2H),6.45(t,J=7.8Hz,1H),6.37(br,1H),5.42(d,J=5.8 Hz,1H),4.36(d,J=5.8 Hz,1H),3.27～3.18(m,2H),2.47(s,3H),1.37(t,J=7.6 Hz,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:191.5,146.5,141.1,140.6,139.9,129.4,129.2,128.3,127.6,127.2,127.1,125.6,124.9,118.4,116.1,111.8,77.8,57.4,38.3,26.0,15.0;IR(KBr)σ/cm-1:3 381,3 129,3 035,1 655,1 600,1 521,1 453,1 401,1 275,1 146,739,698,534,518;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C25H25N3O[M]+為383.199 8,測(cè)量值為383.199 9.

化合物7：1-[4-(4-溴苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮,棕色油狀液體,產(chǎn)率59%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.43(d,J=8.3 Hz,2H),7.30～7.20(m,3H),7.12～7.08(m,2H),7.03(d,J=8.3 Hz,2H),6.95(t,J=7.8 Hz,1H),6.66(dd,J=18.9,8.1 Hz,2H),6.45(t,J=7.8 Hz,1H),6.31(br,1H),5.36(d,J=6.6 Hz,1H),4.29(d,J=6.6 Hz,1H),2.93(s,3H),2.44(s,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:191.6,146.2,141.4,140.0,139.4,132.3,129.5,129.0,128.5,127.3,125.6,125.2,121.6,118.3,116.2,111.5,77.6,56.9,30.6,26.0;IR(KBr)σ/cm-1:3 402,3 129,3 024,2 813,1 655,1 601,1 521,1 401,1 279,1 147,741,700,522;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C24H22BrN3O[M]+為447.094 6,測(cè)量值為447.094 1.

化合物8：1-[4-(2-甲苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮,棕色油狀液體,產(chǎn)率65%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.31～7.21(m,3H),7.19～7.12(m,5H),7.02～6.98(m,1H),6.95(t,J=7.8 Hz,1H),6.67(t,J=8.1 Hz,2H),6.46(t,J=7.8 Hz,1H),6.34(br,1H),5.38(d,J=5.8 Hz,1H),4.61(d,J=5.8 Hz,1H),2.93(d,J=4.6 Hz,3H),2.47(s,3H),2.29(s,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:191.6,147.5,141.5,140.0,139.6,135.6,130.8,129.4,128.3,127.5,127.4,127.1,126.4,125.7,124.9,53.3,30.6,26.0,20.1;IR(KBr)σ/cm-1:3 402,3 131,2 926,2 814,1 642,1 601,1 519,1 401,1 297,1 208,1 155,745,725,702;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C25H25N3O[M]+為383.199 8,測(cè)量值為383.199 9.

化合物9：1-[4-(3-甲基苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-4,5-二氫-1H-3-吡唑基]乙酮,棕色油狀液體,產(chǎn)率64%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.31～7.18(m,4H),7.16～7.12(m,2H),7.10～7.05(m,1H),7.00～6.93(m,3H),6.69(dd,J=12.4,8.1 Hz,2H),6.47(t,J=8.1 Hz,1H),6.43(br,1H),5.43(d,J=6.1 Hz,1H),4.33(d,J=6.1 Hz,1H),2.96(d,J=4.6 Hz,3H),2.48(s,3H),2.33(s,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:191.7,146.7,141.4,141.1,139.9,138.9,129.4,129.1,128.4,128.3,127.9,127.4,125.6,124.9,124.2,118.3,116.1,111.3,77.6,57.3,30.6,26.0,21.6;IR(KBr)σ/cm-1:3 413,3 129,3 027,2 814,1 652,1 599,1 525,1 401,1 280,1 140,934,883,790,742,699;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C25H25N3O[M]+為383.199 8,測(cè)量值為383.199 2.

化合物10：1-(2-甲胺基苯基)-4,5-二苯基-1H-吡唑-3-腈,白色固體,產(chǎn)率45%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.36～7.16(m,9H),7.02(d,J=7.6 Hz,2H),6.77(d,J=8.4 Hz,1H),6.71(d,J=7.6 Hz,1H),6.50(t,J=7.6 Hz,1H),4.42～4.34(br,1H),2.86(d,J=4.8 Hz,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:145.2,142.4,130.7,129.9,129.4,129.2,129.0,128.9,128.6,128.1,127.9,127.7,125.9,125.5,124.2,116.3,114.0,111.7,30.3;IR(KBr)σ/cm-1:3 418,3 053,2 815,2 235,1 608,1 524,1 323,1 170,975,744,695;高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C23H18N4[M]+為350.153 1,測(cè)量值為350.153 4.

化合物11：4-(4-甲氧基苯基)-1-(2-甲胺基苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-腈,白色固體,產(chǎn)率40%.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.32～7.18(m,6H),7.06～7.00(m,2H),6.87(d,J=8.4 Hz,2H),6.78(d,J=8.4 Hz,1H),6.71(d,J=7.6 Hz,1H),6.51(t,J=7.6 Hz,1H),4.44～4.36(br,1H),3.81(s,3H),2.88(d,J=5.2 Hz,3H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:159.4,145.2,142.0,130.7,130.2,129.9,129.1,128.6,127.8,125.8,125.4,124.3,121.6,116.3,114.3,114.2,111.6,55.3,30.3;IR(KBr)σ/cm-1:3 440,3 399,3 052,2 960,2 937,2 818,2 234,1 611,1 518,1 447,1 292,1 254,1 174,840,752,699.高分辨質(zhì)譜:計(jì)算值C24H20N4O[M]+為380.163 7,測(cè)量值為380.163 9.

2.2 化合物抗植物致病真菌的檢測(cè)

11個(gè)化合物對(duì)8種植物致病真菌的生長(zhǎng)抑制作用檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1.

從表1可以看出:當(dāng)供試濃度為100 μg/mL時(shí),含有吡唑啉環(huán)的化合物1～9對(duì)水稻稻瘟病菌、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌具有較好的抗菌活性,而含有吡唑環(huán)的化合物10和化合物11對(duì)水稻稻瘟病菌、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的抑制活性要低一些.相對(duì)而言:吡唑啉環(huán)上連有乙?；幕衔飳?duì)水稻稻瘟病菌的抑制率更高,如：化合物5的抑制率為76.0%，化合物6的抑制率達(dá)到了100%，化合物7的抑制率為73.3%,化合物9的抑制率為84.0%;而吡唑啉環(huán)上連有甲酰基的化合物則對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌表現(xiàn)出更優(yōu)的抑制活性,如:化合物1的抑制率為73.1%，化合物2的抑制率為84.2%，化合物3的抑制率為79.0%;化合物1和化合物2對(duì)小麥赤霉菌表現(xiàn)出了較好的抑制活性,抑制率分別達(dá)到78.4%和72.6%;含有吡唑啉環(huán)的化合物5和吡唑環(huán)的化合物10對(duì)苦瓜枯萎病菌具有較好的抑菌作用,抑制率分別達(dá)到81.1%和77.7%;化合物1～11對(duì)番茄早疫病菌、苦瓜枯萎病菌、楊樹(shù)潰瘍病菌和水稻紋枯病菌等菌種的抑制活性較弱,抑制率均在50%以下.基于初步的抑制活性篩選結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)還測(cè)定了吡唑啉類(lèi)化合物2～4(初步篩選活性較優(yōu))對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的半抑制濃度(IC50),測(cè)得化合物2的IC50值為98.3 μg/mL,化合物3的IC50值為22.2 μg/mL,化合物4的IC50值為41.7 μg/mL.陽(yáng)性對(duì)照藥放線菌酮的IC50值為0.3 μg/mL.

表1 化合物1～11對(duì)8種供試真菌的抑制活性

注：1)表中數(shù)據(jù)為平均抑制率±標(biāo)準(zhǔn)差;2)所有測(cè)試樣品的質(zhì)量濃度為100 μg/mL;3)陽(yáng)性對(duì)照藥為放線菌酮.

3 結(jié) 論

通過(guò)抑菌活性分析,可以看出:含有吡唑啉骨架的化合物1～9對(duì)水稻稻瘟病菌、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌具有較好的抗菌活性;吡唑啉環(huán)上的乙?；欣谔岣邔?duì)水稻稻瘟病菌的抑制活性,而吡唑啉環(huán)上的甲?；鶆t有利于提高對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的活性.

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(責(zé)任編輯 薛 榮)

A study on antifungal activity of novel pyrazolines

LU Huiyan1, TONG Shuitian1, ZHANG Yun1, LUO Hong2,ZHOU Lei1, WAN Yimei1, XIAO Xiaohui1

(1.CollegeofChemistryandLifeSciences,ZhejiangNormalUniversity,Jinhua321004,China; 2.CollegeofGeographyandEnvironmentalSciences,ZhejiangNormalUniversity,Jinhua321004,China)

A series of novel pyrazolines and pyrazoles were prepared via the reaction of 1,3-disubstituted benzotriazolium ylide andα,β-unsaturated aldehydes, ketones or nitriles. Their antifungal bioactivities against eight kinds of phytopathogenic fungi were tested respectively by the mycelium growth rate method in vitro, and the results of separate cultivating condition showed that 1-(1-(2-(ethylamino) phenyl)-4,5-diphenyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol-3-yl) ethanone and 1-(4-(3-(methylamino) phenyl)-5-phenyl-4-m-tolyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol-3-yl) ethanone exhibited high activities againstMagnaporthegrisea(inhibition rate: 100% and 84% respectively) at the concentration of 100 μg/mL. At the same concentration, the inhibition rate of 1-(2-(methylamino) phenyl)-5-phenyl-4-p-tolyl-4,5-dihydro-1H-pyrazole-3-carbaldehyde was up to 84.2% againstValsamali. It was also found that 1-(4-(2,5-dimethoxyphenyl)-1-(2-(methylamino) phenyl)-5-phenyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol-3-yl) ethanone had good antifungal properties againstMagnaporthegriseaandFusariumoxysporumf. sp.mornordicae.

pyrazole; pyrazoline; fungi; antifungal activity

10.16218/j.issn.1001-5051.2016.04.009

2015-12-22；

2016-03-02

浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(LY12B02003 )

鹿慧燕(1988-),女,河南開(kāi)封人,碩士研究生.研究方向:有機(jī)化學(xué). 通信作者：肖孝輝.E-mail: xxh@zjnu.cn

O626.21

A

1001-5051(2016)04-0412-07