劉 亮 陳東林 萬(wàn)路平 丁麗娜 馮 華

1.遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校，貴州 遵義 563002； 2.遵義市食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563000

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黔產(chǎn)天冬飲片切制工藝研究

劉 亮1陳東林1萬(wàn)路平1丁麗娜1馮 華2

1.遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校，貴州 遵義 563002； 2.遵義市食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563000

目的：優(yōu)選天冬飲片的最佳切制工藝，并為其他飲片的切制工藝提供參考。方法：采用單因素及正交試驗(yàn)法，以飲片中總皂苷的得率為主要考察指標(biāo)，選擇軟化方法、切片厚度及干燥方法為考察因素，優(yōu)化飲片的炮制工藝。結(jié)果：優(yōu)選出的炮制工藝為: 天冬藥材水蒸氣蒸3min后，橫切1mm薄片，60℃烘12h。結(jié)論：本法操作簡(jiǎn)便，優(yōu)選出的炮制工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。

天冬；切制；工藝研究

天冬為百合科多年生攀援草本植物天門冬Asparaguscochinchinensis(Lour.)Merr.的塊根，具有養(yǎng)陰清熱，潤(rùn)肺滋腎的功效，是一種臨床常用中藥。天冬是貴州省內(nèi)的大宗藥材，種植面積較大，僅在遵義市鳳岡縣就有近3000畝的種植基地。天冬主要含有糖類、氨基酸、皂苷類等成分[1]，具有抗氧化、抗衰老、抗菌等生理作用[2]。萬(wàn)路平等[3]采用正交試驗(yàn)優(yōu)化了天冬的滲漉工藝；杜芳權(quán)和劉亮等[4-5]對(duì)天冬多糖和總皂苷超聲提取工藝進(jìn)行了研究，但尚未見(jiàn)天冬飲片炮制工藝研究的報(bào)道?！吨袊?guó)藥典》(2015年版)對(duì)天冬的描述也僅是“除去雜質(zhì)，迅速洗凈，切薄片，干燥”，沒(méi)有具體的炮制工藝參數(shù)。本研究對(duì)天冬飲片的炮制工藝進(jìn)行了優(yōu)化，旨在為建立天冬質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV2501紫外分光光度計(jì)(日本島津)；Aquelix 5型試驗(yàn)室高純水系統(tǒng)(重慶市金富科技發(fā)展有限公司)；DHG 90AOA型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(寧波江南儀器廠)；Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；DKS-26型電熱恒溫水浴鍋(寧波江南儀器廠)；FA2004B型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 材料 菝葜皂苷元對(duì)照品(批號(hào)：126-19-2，上海圻明生物科技有限公司)；天冬藥材于2016年6月收集于貴州遵義，經(jīng)張學(xué)愈副教授鑒定為百合科植物天門冬Asparaguscochinchinensis(Lour.)Merr.的塊根；所用水為純化水，試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 軟化方法考察 ①烘軟：取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，置于烘箱中，分別考察60℃、80℃、100℃烘5min后，每隔5min用彎曲法和切制法進(jìn)行檢查，結(jié)果60℃、80℃均在20min時(shí)全部軟化，100℃因溫度過(guò)高未出現(xiàn)全部軟化現(xiàn)象，故烘軟確定為60℃烘20min。②潤(rùn)軟：取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，分別采用搶水洗及適量水浸泡5min后，均用濕紗布蓋潤(rùn)，每隔30min觀察一次軟化情況，結(jié)果搶水洗后潤(rùn)及浸泡后潤(rùn)均在4h時(shí)全部軟化，考慮泡法易損失有效成分，故潤(rùn)軟選擇為搶水洗后濕紗布蓋潤(rùn)4h。③蒸軟：取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，用水蒸氣蒸1min后，每隔1min觀察一次，結(jié)果3min時(shí)可全部軟化。2.1.2 干燥方法考察 取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，搶水洗后，用濕紗布蓋潤(rùn)4h，切制成2mm的片，進(jìn)行以下三種干燥方法試驗(yàn)：①烘干：將天冬片放入烘箱中，60℃加熱干燥，每隔2h觀察一次，結(jié)果12h后，全部硬化，干燥完成。②曬干：將天冬片置于陽(yáng)光下照射，每隔2h觀察一次，結(jié)果28h后，全部干燥。③陰干：將天冬片置于陰涼處，每隔12h觀察一次，結(jié)果96h后，全部干燥。

2.1.3 切片厚度考察 《中國(guó)藥典》(2015年版)對(duì)飲片厚度要求主要有三種，極薄片(0.5mm以下)，薄片(1～2mm)，厚片(2～4mm)。綜合考慮切制的難易程度，確定1mm、2mm、4mm作為正交試驗(yàn)中天冬切片厚度的三個(gè)水平。

2.2 正交試驗(yàn)

2.2.1 因素水平設(shè)計(jì) 試驗(yàn)以天冬中總皂苷的得率為主要考察指標(biāo)，選擇軟化方法、切片厚度、干燥方法三因素為考察因素[6-11]，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)。正交因素水平表見(jiàn)表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 樣品溶液的制備 稱取各試驗(yàn)號(hào)中干燥后的天冬片2g，置于100mL具塞錐形瓶中，分別加入12倍量的水，在恒溫水浴鍋中70℃提取兩次，每次1h，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻。用移液管精密移取10mL于分液漏斗中，用正丁醇(水飽合)15mL萃取，共3次，合并3次正丁醇萃取液，再用水(正丁醇飽和)20mL反萃，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收正丁醇，最后成分用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL無(wú)色容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻后作為樣品溶液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 準(zhǔn)確稱量菝葜皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品7.8mg，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL棕色容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別用移液管精密移取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于具塞試管中，水浴80℃揮干溶劑，再精密移取5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，加入具塞試管中，密塞，搖勻，置于60℃恒溫水浴鍋中反應(yīng)15min后，快速放入冰水中降溫5min，從而停止反應(yīng)，再吸取5mL乙酸混合，搖勻后，等待10min，在UV2501紫外分光光度計(jì)上調(diào)整吸收波長(zhǎng)為455nm，依次測(cè)量A值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的取樣量及最終測(cè)量時(shí)的體積，計(jì)算出六份標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量液的濃度(C值，單位：μg/mL)，再由A值與C值兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸方程計(jì)算，得到回歸方程是A=0.01169C+0.03056，r=0.9994。

2.2.5 樣品溶液的測(cè)定 分別用移液管準(zhǔn)確吸取0.4mL樣品液，按2.2.4中的步驟進(jìn)行吸光度測(cè)定，由回歸方程計(jì)算出總皂苷的濃度Cx，得率計(jì)算公式如下：

表2 L9(34)直觀分析表

表3 方差分析表

2.2.6 試驗(yàn)結(jié)果分析 由表2可知，最好的切制工藝應(yīng)是A1B1C1。分析表3可知，三個(gè)因素對(duì)炮制工藝的影響順序?yàn)榍衅穸醛兏稍锓椒ī儩?rùn)軟方法，即切片厚度影響最大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而干燥方法和潤(rùn)軟方法沒(méi)有差異性?？紤]切制工藝操作的時(shí)間以及切片難易程度等其它指標(biāo)，切制工藝修改為A3B1C1。

2.2.7 工藝驗(yàn)證 為驗(yàn)證該工藝的穩(wěn)定性，按優(yōu)選出的最佳工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證性試驗(yàn)，結(jié)果3批天冬飲片中總皂苷得率分別為2.22%、2.16%、2.17%，平均得率為2.18%，RSD值為1.53%，表明優(yōu)選出的炮制工藝穩(wěn)定、可行。

3 討論

試驗(yàn)之初進(jìn)行了水提取工藝的優(yōu)選，選擇提取溫度(70℃、80℃、90℃)、提取時(shí)間(1h、1.5h、2h)、液料比(8倍、10倍、12倍)、提取次數(shù)(1次、2次、3次)四因素為考察因素，經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)確定最佳水提取工藝為70℃溫度，12倍量水，提取2次，每次1h，從而確定了炮制工藝中提取的操作。

炮制工藝研究經(jīng)方差分析可以得出，只有切片厚度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，故切片厚度確定為1mm。軟化方法中，考慮烘軟法有時(shí)會(huì)出現(xiàn)軟化度不夠，切片困難，洗后潤(rùn)軟法天冬外層松泡，切片易碎，且時(shí)間較長(zhǎng)，故軟化方法確定為蒸軟法。干燥方法中，考慮操作時(shí)間及干燥后成色等情況，確定為烘干法。故試驗(yàn)的最佳切制工藝為天冬藥材經(jīng)水蒸氣蒸3min后，橫切1mm薄片，60℃烘12h。

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(編輯：陶希睿)

2016-08-25

遵義市科技局-遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校聯(lián)合科技計(jì)劃項(xiàng)目(遵市科合社字【2013】24號(hào))；匯川區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目。

劉亮(1981-)，男，副教授，主要從事中藥、民族藥化學(xué)成分及質(zhì)量研究。E-mail: jikman1@163.com

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