王元麗 唐明珠 楊學(xué)習(xí)

·論著·

11 339例孕婦無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析

王元麗1唐明珠2楊學(xué)習(xí)3★

目的探討不同年齡段及不同高危因素孕婦無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比分析。方法回顧性分析2014年12月至2015年8月進(jìn)行無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)的11 339例孕婦資料，分別計(jì)算21、18、13號(hào)染色體發(fā)生變異的概率。將孕婦按年齡段（＜35歲組，35～39歲組和≥40歲組）、孕產(chǎn)史（無不良孕產(chǎn)史組和有不良孕產(chǎn)史組）、受孕情況（自然受孕組和試管嬰兒組）分組，分別比較各組間的胎兒患21、18、13?三體綜合征的概率。結(jié)果11 339例樣本中共檢出82例胎兒染色體異常者，占樣本總數(shù)7.2‰（82/11 339），其中，21?三體最常見，所占比例為67.07％（55/82）?！?0歲組陽性發(fā)生率2.45％，較＜35歲組（0.59％）和35～39歲組（0.61％）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。孕產(chǎn)史和受孕情況2組的陽性發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論高齡孕婦是胎兒患染色體非整倍體疾病的重要危險(xiǎn)因素，應(yīng)提高無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)在此類人群中的應(yīng)用。

無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)；三體綜合征；高齡孕婦

21?三體綜合征、18?三體綜合征、13?三體綜合征發(fā)病率占胎兒染色體非整倍體疾病的絕大多數(shù)，其中，21?三體綜合征最為常見，年發(fā)病率為1/800～1/ 600，占新生兒三體型染色體疾病的70％～80％［1?2］。隨著國家計(jì)劃生育政策的放寬、外界環(huán)境因素影響以及輔助生殖技術(shù)的不斷進(jìn)步，高齡孕婦、具有不良孕產(chǎn)史夫婦以及試管嬰兒的數(shù)量逐漸增多。近年來發(fā)達(dá)國家試管嬰兒的出生比例明顯增高，約占新生兒總數(shù)的1％～3％［3?4］。這些都有可能成為出生缺陷發(fā)生率升高的因素。目前，利用孕婦外周血游離DNA開展的無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)已成為胎兒染色體非整倍體疾病篩查的臨床探索新方向［2，5］。本研究利用下一代測(cè)序技術(shù)對(duì)孕婦外周血中的游離DNA進(jìn)行測(cè)序，通過生物信息學(xué)分析胎兒遺傳信息，從而檢測(cè)胎兒染色體非整倍體疾病，并根據(jù)孕婦年齡和不良孕產(chǎn)史等高危因素分組，研究胎兒21、18、13?三體綜合征的發(fā)生率，為無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)在染色體非整倍體疾病高發(fā)人群中的應(yīng)用提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014年12月至2015年8月在廣州達(dá)安臨床檢驗(yàn)中心進(jìn)行無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)的孕12周及以上的單胎妊娠孕婦11 339例，孕婦年齡范圍在16～50歲，平均年齡31.34歲，其中高齡（≥35歲）4 033例，有不良孕產(chǎn)史996例，試管嬰兒262例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集

對(duì)孕婦提供遺傳咨詢并簽署知情同意書后，按正常靜脈采血方式采集7～10m L靜脈血。采血管使用Cell?Free DNA BCTTM管（Streck公司，美國）。采血后輕輕顛倒混勻8～10次，使血液與管內(nèi)保護(hù)劑充分混勻，達(dá)到保護(hù)作用。采集的血液可常溫運(yùn)輸，72 h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血漿分離，或立即分離后將血漿用干冰運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室。

1.2.2 無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)

使用基因測(cè)序儀DA8600和胎兒染色體非整倍體21三體、18三體和13三體檢測(cè)試劑盒（半導(dǎo)體測(cè)序法）（中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司）對(duì)標(biāo)本進(jìn)行無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)，并使用配套算法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，判斷21、18、13號(hào)染色體的風(fēng)險(xiǎn)值（正常參考范圍值為?3.0～3.0），檢測(cè)值在正常參考范圍內(nèi)則判為“低風(fēng)險(xiǎn)”，超出則為“高風(fēng)險(xiǎn)”。由廣州達(dá)安臨床檢驗(yàn)中心出具篩查報(bào)告，并隨訪獲取確診結(jié)果，以核實(shí)無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 整體檢測(cè)結(jié)果

11 339例樣品中，無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)為高風(fēng)險(xiǎn)孕婦82例，篩查陽性率為7.2‰（82/11 339），其中21?三體55例，發(fā)生率67.07％（55/82），遠(yuǎn)高于18?三體的29.27％（24/82）和13?三體的3.66％（3/82）。

2.2 不同年齡孕婦組胎兒三體結(jié)果比較

將孕婦按年齡組分為＜35歲組，35～39歲組和≥40歲組。＜35歲組共檢出陽性43例，發(fā)生率0.59％（43/7 306），35～39歲組檢出20例，發(fā)生率0.61％（20/3 256），≥40歲組檢出19例，發(fā)生率2.45％（19/777），結(jié)果見表1。＜35歲和35～39歲2個(gè)組間陽性發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），≥40歲和＜35歲、35～39歲組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。其中，21?三體和18?三體的發(fā)生率組間的差異性和總體陽性發(fā)生率相似，13?三體發(fā)生率在各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 不同孕產(chǎn)史組胎兒三體結(jié)果比較

按照孕產(chǎn)史情況分為無不良孕產(chǎn)史組和有不良孕產(chǎn)史組。無不良孕產(chǎn)史組共檢出陽性71例，發(fā)生率0.69％（71/10 343），有不良孕產(chǎn)史組共檢出陽性11例，發(fā)生率1.1％（11/996），結(jié)果見表2。有不良孕產(chǎn)史組陽性發(fā)生率比無不良孕產(chǎn)史組高，但2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 不同受孕方式組胎兒三體結(jié)果比較

按照受孕方式情況分為自然受孕組和試管嬰

兒組。自然受孕組共檢出陽性81例，發(fā)生率0.73％（81/11 077），試管嬰兒組共檢出陽性1例，發(fā)生率0.38％（1/262），結(jié)果見表3。2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 不同年齡孕婦組胎兒三體結(jié)果比較Table 1 Comparation of fetal trisomy syndrome results in differentwomen age groups

表2 不同孕產(chǎn)史組胎兒三體結(jié)果比較Table 2 Comparation of fetal trisomy syndrome results in differentwomen pregnancy history groups

表3 不同受孕方式組三體結(jié)果比較Table 3 Comparation of fetal trisomy syndrome results in different fertilization ways groups

3 討論

21?三體綜合征、18?三體綜合征、13?三體綜合征發(fā)病率占胎兒染色體非整倍體疾病的絕大多數(shù)，其中，21?三體綜合征發(fā)病較高，為1/800～1/600［2］。本研究人群中，篩查陽性率為7.2‰（82/11 339），其中21?三體55例，發(fā)生率67.07％（55/82）。這比國內(nèi)水平稍低，考慮可能與本研究所選擇標(biāo)本來源和年齡范圍偏廣有關(guān)。在國內(nèi)研究中，Liao等［6］對(duì)1 760例孕婦進(jìn)行無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)，共報(bào)道16例異常，陽性率為9‰。鄭靜等［1］對(duì)1 566例孕婦進(jìn)行分析得出，該人群陽性發(fā)生率為14.7‰，21?三體發(fā)生率為78.26％。劉叢叢［7］在對(duì)2 152例孕婦無創(chuàng)檢測(cè)結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)有22例陽性，綜合陽性率為10.2‰。目前，孕期胎兒染色體異常的檢測(cè)方法主要以侵入性的產(chǎn)前診斷技術(shù)為主，均存在一定的流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，難以被廣大孕婦和家庭接受。而傳統(tǒng)的血清學(xué)篩查方法檢出率為60％～65％，假陽性率高。自1997年胎兒游離DNA被發(fā)現(xiàn)存在于孕婦外周血以來，基于下一代測(cè)序技術(shù)的無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)以其安全、快速以及準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)被迅速用于孕婦特別是高齡孕婦的產(chǎn)前染色體非整倍體篩查［2，5，8?9］。劉叢叢［7］在對(duì)2 152例孕婦無創(chuàng)基因檢測(cè)的結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)對(duì)21、18、13號(hào)染色體非整倍體的檢測(cè)靈敏度為92.3％～100％，特異性度99.95％～100％。Palomaki等［10］也通過該技術(shù)分析得出，283例染色體非整倍體異常樣本復(fù)合檢出率為98.9％，總的假陽性率僅0.5％。所以，無創(chuàng)產(chǎn)前

檢測(cè)技術(shù)在染色體異常篩查中具有很高的應(yīng)用價(jià)值。

醫(yī)學(xué)上將年齡≥35歲的初產(chǎn)產(chǎn)婦界定為高齡產(chǎn)婦，隨著孕產(chǎn)婦年齡增大，其卵巢內(nèi)處于減數(shù)分裂期的初級(jí)卵母細(xì)胞在體內(nèi)停留時(shí)間會(huì)逐漸延長(zhǎng)，且高齡孕產(chǎn)婦更易受內(nèi)外環(huán)境影響，其卵巢功能發(fā)生老化和退化，使胚胎期染色體變異的幾率增加［11］。國際和國內(nèi)相關(guān)法規(guī)也明確建議應(yīng)對(duì)高齡產(chǎn)婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，孕婦年齡≥40歲其胎兒發(fā)生染色體異常的比例明顯高于其他2組（P＜0.001），35～39歲組雖與＜35歲組間陽性發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但其概率也略高于＜35歲組。鄭靜等［1］在對(duì)1 566例標(biāo)本的三體結(jié)果分析中，也發(fā)現(xiàn)≥40歲組孕婦陽性發(fā)生率明顯高于35～39歲組與＜35組。譚衛(wèi)荷等［11］對(duì)898例孕婦進(jìn)行核型結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)21?三體和18?三體在≥40歲組孕婦中發(fā)生率也顯著高于35～39歲組與＜35組。

不良孕產(chǎn)史包括自然流產(chǎn)、死胎和胎兒發(fā)育畸形等，在引起不良孕產(chǎn)史的眾多因素中，染色體異常是一個(gè)重要的病因之一［3，13］。在本研究中，有不良孕產(chǎn)史組共檢出21、18和13?三體11例，發(fā)生率1.1％（11/996）。較無不良孕產(chǎn)史組0.69％（71/ 10 343）無顯著差異。不良孕產(chǎn)史多發(fā)生在染色體位置異常和多態(tài)性核型中。何淑貞等［3］在對(duì)217對(duì)有不良孕產(chǎn)史的夫婦進(jìn)行染色體核型分析中發(fā)現(xiàn)有9例異常的核型和55例多態(tài)性核型，檢出率分別為2.07％和12.67％。其中異常核型包括4例羅伯遜易位，4例平衡易位，1例倒位。湯素環(huán)等［13］對(duì)375對(duì)不良孕產(chǎn)夫婦進(jìn)行核型分析發(fā)現(xiàn)，有81例異常核型（5.0％），其中51例常染色體異常（6.8％）如相互異位、倒位等。因此，不良孕產(chǎn)史與染色體核型異常之間存在密切聯(lián)系，而多態(tài)性核型如Y染色體異質(zhì)性等具有遺傳效應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致胎兒患染色體核型異常疾病概率增加。

隨著體外受精技術(shù)的不斷發(fā)展，近年來，發(fā)達(dá)國家試管嬰兒約占新生兒總數(shù)的1％～3％，出生比例明顯升高［4］。由于試管嬰兒技術(shù)采用體外受精—胚胎移植，其過程皆在體外完成，很多因素可引起遺傳物質(zhì)發(fā)生改變［14］。試管嬰兒出生缺陷和圍產(chǎn)期合并癥日益受到人們的關(guān)注，許多學(xué)者對(duì)此做了研究，但研究結(jié)論各不相同［15］。本研究人群中，自然受孕組陽性發(fā)生率0.73％（81/11 077），與試管嬰兒組0.38％（1/262）的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），這與許小艷等［15］的分析相似，該研究對(duì)150例試管嬰兒和200例自然受孕嬰兒的出生缺陷及新生兒期并發(fā)癥等指標(biāo)進(jìn)行比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，試管嬰兒出生缺陷與自然受孕嬰兒無顯著差異。而米弘瑛等［14］對(duì)43例試管嬰兒和50例自然受孕嬰兒的出生缺陷及圍生期疾病等情況進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)，試管嬰兒出生缺陷發(fā)生率顯著高于自然受孕嬰兒。

綜上所述，高齡孕婦是胎兒患染色體異常疾病的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。應(yīng)用無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)對(duì)高齡孕婦進(jìn)行胎兒染色體異常篩查，并結(jié)合侵入性產(chǎn)前診斷技術(shù)對(duì)篩查陽性結(jié)果進(jìn)行核實(shí)。這樣可降低有創(chuàng)性檢測(cè)的人數(shù)及孕婦的負(fù)擔(dān)。同時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)在其他出生缺陷疾病方面的研發(fā)與應(yīng)用，提高除21、18、13?三體綜合征以外的染色體疾病的準(zhǔn)確性，更好地應(yīng)用于不良孕產(chǎn)史和試管嬰兒等高危因素孕婦的異常檢測(cè)，才能更好地降低新生兒出生缺陷的發(fā)生率。

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Com parative analysis of the non?invasive prenatal test results among 11 339 pregnantwomen

WANG Yuanli1,TANGM ingzhu2,YANG Xuexi3★
(1.Guangzhou Darui Biotechnology Co.,Ltd.,Guangzhou,Guangdong,China,510665;2.Guangzhou Daan Clinical Laboratory Centre,Guangzhou,Guangdong,China,510665;3.School of Laboratory Medicine and Biotechnology,Southern MedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong,China,510515)

Objective The objective is to explore non?invasive prenatal test for pregnantwomen in different age and risk factor groups.Methods Non?invasive prenatal test results from 11 399 pregnant women were recorded from December 2014 to August 2015,and the incidence rates of trisomy 21/18/13 variationswere calculated.The pregnantwomenwere divided into differentgroupsaccording to age(＜35?years?old group,35～39?years?old group,and≥40?years?old group),pregnancy history(normalpregnancy history group and abnormal pregnancy history group)and conception method(natural conception group and IVF group).The incidence rates of trisomy 21/18/13 syndrome w ithin these groupswere compared.Results In 11 339 cases, 82 were found w ith fetal chromosomal abnormalities,accounting for 7.2‰(82/11 339),the trisomy 21 syndrome was themost common w ith the rate of 67.07％(55/82).The proportion of positive trisomy syndrome in the≥40?years?old group(2.45％)was statistically significantly different(P＜0.001)compared w ith the＜35?years?old group(0.59％)and 35～39?years?old group(0.61％).There was no significant differences of the

Non?invasive prenatal test;Trisomy syndrome;Advancedmaternalage pregnantwomen

廣東省科技計(jì)劃下一代基因測(cè)序生物信息云分析服務(wù)平臺(tái)及其關(guān)鍵技術(shù)研究（2015A030401040）；廣州市科技計(jì)劃基于下一代測(cè)序技術(shù)的唐氏綜合征無創(chuàng)篩查系統(tǒng)研發(fā)和應(yīng)用研究（201400000004?4）

1.廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司，廣東，廣州510665 2.廣州達(dá)安臨床檢驗(yàn)中心，廣東，廣州510665 3.南方醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)與生物技術(shù)學(xué)院，廣東，廣州510515

★通訊作者：楊學(xué)習(xí)，E?mail：yxxzb@sohu.com

positive trisomy syndrome rate between the pregnancy history and different fertilization ways groups(P＞0.05).Conclusion The advanced age of the pregnant women is an important risk factor in the fetal chromosomalaneuploidy disease,which should be improved the use of non?invasive prenatal test.