張文華，謝 文*，侯建波，童赟愷 ，陸 順，汪 鵬

(1.浙江省檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究院，浙江 杭州 310016；2.浙江立德產(chǎn)品技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310016)

?

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豆芽與番茄中6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

張文華1，謝 文1*，侯建波1，童赟愷2，陸 順2，汪 鵬2

(1.浙江省檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究院，浙江 杭州 310016；2.浙江立德產(chǎn)品技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310016)

建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)同時(shí)測(cè)定豆芽和番茄中4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、2，4-二氯苯氧乙酸丁酯、吲哚丁酸6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量的分析方法。試樣經(jīng)酸性乙腈提取，鹽析、離心、濃縮、復(fù)溶，經(jīng)三氟化硼甲醇溶液甲酯化，再加入2，4-二氯苯氧乙酸丁酯的溶解液，經(jīng)過(guò)液液萃取后，通過(guò)氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。方法的定量下限(S/N>10)均為15 μg/kg；在豆芽、番茄中分別添加15，30，60 μg/kg 3個(gè)濃度水平的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，其回收率為70.0%～127%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為4.1%～11.4%。該方法的定量下限滿足目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)法規(guī)對(duì)豆芽和番茄中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的最大殘留限量要求，可為進(jìn)出口豆芽和番茄中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的監(jiān)管提供技術(shù)支持。

豆芽；番茄；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是人工合成的對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的化學(xué)物質(zhì)或從生物中提取的天然植物激素[1]，其生理作用與內(nèi)源激素相似，可以促進(jìn)植物葉片的擴(kuò)大生長(zhǎng)、維管束的分化、根的形成。不法商販在生產(chǎn)種植蔬菜時(shí)通過(guò)添加激素，使植物長(zhǎng)得粗壯，果實(shí)膨大、亮澤，縮短種植周期，從而迎合群眾的選購(gòu)意愿。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在人體內(nèi)可以通過(guò)新陳代謝降解，合理使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，將其在蔬菜中的殘留量控制在一定范圍內(nèi)不會(huì)對(duì)人體造成危害。但長(zhǎng)期食用含過(guò)量植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的食品會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生蓄積危害。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014[2]規(guī)定，經(jīng)表面處理的新鮮蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的最大使用量為0.01 g/kg，最高殘留限量≤2.0 mg/kg，其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑未被收錄。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局、農(nóng)業(yè)部、國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)關(guān)于豆芽生產(chǎn)過(guò)程中禁止使用6-芐基腺嘌呤等物質(zhì)的公告(2015年第11號(hào))[3]中明確指出，生產(chǎn)者不得在豆芽生產(chǎn)過(guò)程中使用6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸鈉、赤霉素等物質(zhì)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 2763-2014)[4]規(guī)定，番茄中2,4-D的最大殘留限量為0.5 mg/kg。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的食藥監(jiān)食監(jiān)三便函[2014]73號(hào)文件[5]提供了一種氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)檢測(cè)豆芽和番茄中4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、2，4-二氯苯氧乙酸丁酯(2,4-D-丁酯)、吲哚丁酸(IBA) 6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，要求定量下限(LOQ)為0.03 mg/kg。美國(guó)規(guī)定了果蔬類(lèi)蔬菜中2,4-D的殘留限量為0.1 mg/kg[6]。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于豆芽和番茄的藥物殘留分析報(bào)道很多，但同時(shí)分析豆芽和番茄的藥物殘留報(bào)道較少。目前，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)[7-8]、氣相色譜法(GC)[9-11]、氣相色譜-質(zhì)譜法[12-14]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)[15]、高效液相色譜法(HPLC)[16-20]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/ MS)[21-31]。GC和GC-MS法對(duì)前處理要求高，樣品基質(zhì)干擾較大，尤其是對(duì)IAA和IBA的回收率低，無(wú)法對(duì)其準(zhǔn)確定量。ELISA 和HPLC的靈敏度較低且難以實(shí)現(xiàn)確證分析。LC-MS/MS法快速簡(jiǎn)便，定量準(zhǔn)確，但由于儀器成本較高，很多實(shí)驗(yàn)室難以普及。

為了解決現(xiàn)有豆芽和番茄中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留檢測(cè)的難題，本文建立了一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豆芽和番茄中4-CPA,2,4-D,NAA,IAA,2,4-D-丁酯和IBA殘留量的方法。該方法準(zhǔn)確、快速、高效，方法的回收率和精密度等均符合檢測(cè)要求，可用于豆芽和番茄中6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、材料與試劑

Agilent 7890A/5975C 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent公司)，配有電子轟擊離子源(EI)；臺(tái)式離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司)；R215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；AE260電子天平(瑞士Mettler公司)；MS2渦旋混勻器(上海醫(yī)大儀器廠)；超純水凈化系統(tǒng)(英國(guó)Elga公司)；微孔過(guò)濾膜(0.22 μm，有機(jī)相)，氮吹儀。

正己烷(色譜純，美國(guó)Honeywell公司)；甲醇、乙酸乙酯、乙腈、甲酸(色譜純，西班牙Scharlau公司)；三氟化硼甲醇溶液：優(yōu)級(jí)純；水為超純水；其他實(shí)驗(yàn)所用試劑除特殊說(shuō)明外均為分析純。

4-CPA,2,4-D,NAA,IBA,2,4-D-丁酯(純度均大于99.0%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試劑配制

6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑儲(chǔ)備液(1.0 mg/mL)：分別稱取0.01 g(精確至0.1 mg)上述植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇分別溶解定容至10 mL，4 ℃保存。分別準(zhǔn)確量取適量的4-CPA,2,4-D,NAA,IAA,IBA 5種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，2,4-D-丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液按照此法單獨(dú)配制成100.0 μg/mL和10.0 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，4 ℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確吸取一定量的4-CPA,2,4-D,NAA,IAA,IBA 5種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇稀釋至200，300，600，1 200，2 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，2,4-D-丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液按照此法單獨(dú)配制成200，300，600，1 200，2 000 ng/mL，4 ℃保存。20%乙酸乙酯-正己烷混合液：吸取10 mL乙酸乙酯和40 mL正己烷混合而成。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品提取 分別稱取兩份豆芽試樣各10.0 g(精確至0.01 g)于兩個(gè)50 mL離心管中，分別加入40 μL甲酸、20 mL乙腈和3.0 g氯化鈉，渦旋混勻，4 000 r/min離心5 min后，取10 mL上層乙腈，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，分別以甲醇復(fù)溶。

1.3.2 衍 生 在其中1份復(fù)溶液中加入1 mL三氟化硼甲醇衍生溶液，渦旋混勻，40 ℃加熱衍生10 min，取出冷卻后待凈化用。

1.3.3 凈 化 將衍生液和2,4-D-丁酯的復(fù)溶液合并后轉(zhuǎn)移至離心管中，加入2.0 mL 20%乙酸乙酯-正己烷混合溶液和2.0 mL水，渦旋混勻，4 000 r/min離心5 min，取出上層有機(jī)相，向下層水相再加入2.0 mL 20%乙酸乙酯-正己烷混合溶液重復(fù)萃取1次，合并兩次萃取液，40 ℃水浴下氮吹至1.0 mL以下，再用20%乙酸乙酯-正己烷混合溶液定容至1.0 mL，過(guò)膜后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中供GC-MS/MS測(cè)定。

1.4 分析條件

1.4.1 色譜條件 色譜柱：HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國(guó)安捷倫J&W公司)；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；載氣：氦氣，純度≥99.999%，恒流模式，流速1.0 mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：2 μL；程序升溫：80 ℃，保持1.0 min，以10 ℃/min升至230 ℃，保持4 min，再以30 ℃/min升至320 ℃，保持3 min。

1.4.2 質(zhì)譜條件 電離模式：電子轟擊源(EI)，電離能量為70 eV；離子源溫度：230 ℃;傳輸線溫度：280 ℃；離子檢測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)；Q2碰撞氣：高純氮?dú)猓槐O(jiān)測(cè)離子對(duì)及碰撞能量見(jiàn)表1。

表1 6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的色譜保留時(shí)間及質(zhì)譜條件

* quantitative ion

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)溶液：移取0.25 mL 4-CPA,2,4-D,NAA,IAA,IBA的混合工作溶液于10 mL玻璃離心管中，再加入1.0 mL三氟化硼甲醇溶液，渦旋混勻，40 ℃加熱衍生10 min，取出冷卻后加入0.25 mL 2,4-D-丁酯工作溶液，按照“1.3.3 ”方法凈化，制備成濃度為50，75，150，300，500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，相當(dāng)于樣品中添加10，15，30，60，100 μg/kg 6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確吸取適量空白樣品基質(zhì)，氮?dú)獯蹈?，分別加入等量的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，混勻后，配成系列基質(zhì)匹配的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2 結(jié)果與討論

2.1 穩(wěn)定性的考察

將4-CPA,2,4-D,NAA，IAA和IBA 5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑經(jīng)衍生酯化后和2,4-D-丁酯混合，于4 ℃下保存放置。將剛衍生酯化后以及已酯化并分別儲(chǔ)存1，3，5，7，15，20，25，30，40 d的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的含量作圖比較。結(jié)果顯示，6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑衍生酯化后4 ℃下放置20 d之內(nèi)的含量變化小于10%，放置20 d以上含量變化大于10%，表明6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑衍生酯化后的溶液在20 d內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.2 提取方法的優(yōu)化

豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑多殘留的提取溶劑主要有甲醇、乙腈，考慮到乙腈提取可與目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法提取溶劑相一致。在保證目標(biāo)農(nóng)藥的提取效率的同時(shí)，應(yīng)使提取液中的共提取基質(zhì)含量盡可能低。本文優(yōu)選乙腈為提取溶劑，由于本研究中的5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑含羧基(2,4-D-丁酯不含羧基)，在乙腈中適當(dāng)添加甲酸可明顯改善植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的提取效率。文獻(xiàn)報(bào)道的方法[13]是移取全部提取液進(jìn)行濃縮，之后移取一半的復(fù)溶液進(jìn)行衍生反應(yīng)，而本實(shí)驗(yàn)只移取了一半的提取液濃縮，復(fù)溶液全部參與后續(xù)的衍生反應(yīng)，大大節(jié)約了濃縮時(shí)間，提高了實(shí)驗(yàn)效率，且回收率未受影響。

2.3 衍生條件的優(yōu)化

采用1 mL衍生劑，隨著植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度(50，75，150，300，500 ng/mL)的增加，衍生產(chǎn)物呈相應(yīng)的線性增加，說(shuō)明1 mL衍生劑對(duì)于高濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑反應(yīng)也是完全的，故采用1 mL衍生劑。

衍生溫度會(huì)影響目標(biāo)物在檢測(cè)器上的響應(yīng)值。本實(shí)驗(yàn)選擇衍生化時(shí)間15 min，考察了不同衍生溫度(40，50，60，70，80 ℃)對(duì)5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑衍生反應(yīng)的影響(2,4-D-丁酯是酯類(lèi)物質(zhì)，無(wú)需衍生)，結(jié)果如圖1A所示。5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在40 ℃和50 ℃時(shí)，衍生產(chǎn)物變化不明顯。從50 ℃開(kāi)始隨著衍生溫度的升高，4-CPA，2,4-D和NAA的衍生產(chǎn)物逐漸增加，增幅不大，而IAA和IBA的衍生產(chǎn)物急劇減少，且在80 ℃降至最低。為使5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的衍生產(chǎn)物均達(dá)到較高值，實(shí)驗(yàn)選擇40 ℃作為衍生化溫度。

選擇衍生化溫度40 ℃，進(jìn)一步考察了不同衍生化時(shí)間(5，10，15，30 min)對(duì)5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑衍生反應(yīng)的影響，結(jié)果如圖1B所示。由圖1B可知，隨著衍生時(shí)間的增加，NAA的衍生產(chǎn)物逐漸增加，當(dāng)衍生時(shí)間超過(guò)10 min時(shí)，4-CPA和2,4-D的衍生產(chǎn)物無(wú)明顯增加，而IAA和IBA的衍生化產(chǎn)物逐漸減少。說(shuō)明衍生反應(yīng)10 min時(shí)，4-CPA，2,4-D，IAA和IBA已反應(yīng)完全，繼續(xù)延長(zhǎng)衍生時(shí)間，則IAA和IBA衍生化產(chǎn)物可能會(huì)發(fā)生分解，綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇10 min作為衍生化時(shí)間。通過(guò)對(duì)影響衍生化反應(yīng)的主要因素進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)最佳衍生化條件為40 ℃下反應(yīng) 10 min，5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性較好。

2.4 萃取條件的優(yōu)化

考察了萃取試劑和萃取次數(shù)對(duì)回收率的影響。文獻(xiàn)報(bào)道的萃取試劑有20%乙酸乙酯-正己烷[12-13]、正己烷[9]和石油醚[15]，本文比較了上述3種試劑的萃取效率，并將萃取4次的結(jié)果分別進(jìn)行了測(cè)試(見(jiàn)圖2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，20%乙酸乙酯-正己烷的萃取效率最高。同時(shí)由圖2A可知，6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑經(jīng)兩次萃取后，萃取回收率均大于80%。因此本文采用20%乙酸乙酯-正己烷進(jìn)行兩次萃取。

將衍生后的溶液不經(jīng)過(guò)萃取，氮吹至近干定容后，直接進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果顯示，4-CPA，2,4-D，NAA的回收率小于50%，而2,4-D-丁酯，IAA和IBA幾乎未檢出，推測(cè)可能由于甲醇濃縮后，衍生產(chǎn)物極性低，難以溶解所致。

2.5 儀器測(cè)定方法的優(yōu)化

文獻(xiàn)報(bào)道[12]將2,4-D-丁酯和4-CPA，2,4-D，NAA，IAA，IBA 5種需衍生酯化的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑分成兩組，分兩次用儀器進(jìn)行分析檢測(cè)，而本文在衍生化后將6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑混合，實(shí)現(xiàn)了一次進(jìn)樣即可同時(shí)檢測(cè)6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，提高了檢測(cè)效率，降低了檢測(cè)成本。

為減少基質(zhì)干擾，提高方法的選擇性，降低檢出限，采用GC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)檢測(cè)。對(duì)6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的母離子、子離子、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。首先選擇母離子，分別用濃度為10 μg/mL的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，在EI源能量為70 eV時(shí)，進(jìn)行質(zhì)譜全掃描，確定每種化合物的保留時(shí)間。然后從一級(jí)質(zhì)譜圖中選擇有代表性的母離子碎片，在不同碰撞能量下對(duì)母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，優(yōu)化碰撞能量，選擇強(qiáng)度較大、靈敏度高的離子作為子離子，其中1對(duì)離子對(duì)用于定量，1對(duì)離子對(duì)用于定性。優(yōu)化后6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的母離子、子離子及其碰撞能量見(jiàn)表1。

比較了氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)對(duì)豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè)定效果。按照文獻(xiàn)[12-13]報(bào)道的前處理方法進(jìn)行提取和凈化，采用GC-MS法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，譜圖有許多雜峰，基質(zhì)干擾較大，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑未能得到有效分離，如圖3A所示。而采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，相當(dāng)于在GC-MS的基礎(chǔ)上增加了子離子結(jié)構(gòu)信息，增強(qiáng)了特異性離子的靈敏度，減少了雜質(zhì)峰的干擾，提高了本方法對(duì)6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑檢測(cè)的準(zhǔn)確度(如圖3B)。因此，本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)豆芽中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑進(jìn)行測(cè)定。

2.6 線性關(guān)系

基質(zhì)效應(yīng)是在提取基質(zhì)中的目標(biāo)物時(shí)，基質(zhì)中的干擾物影響目標(biāo)化合物的離子化，使得目標(biāo)化合物在儀器上的響應(yīng)發(fā)生增強(qiáng)或者抑制的現(xiàn)象[32]。為提高目標(biāo)化合物的測(cè)定準(zhǔn)確度，需對(duì)不同基質(zhì)產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)作出評(píng)價(jià)，并采用內(nèi)標(biāo)法或基質(zhì)加標(biāo)曲線[33]以減小基質(zhì)效應(yīng)的干擾?；|(zhì)效應(yīng)值在1.2以上視為強(qiáng)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，在0.8～1.2之間視為弱基質(zhì)效應(yīng)，在0.8以下視為強(qiáng)基質(zhì)抑制效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)將基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算兩者質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)度的比值。結(jié)果顯示，豆芽和番茄中6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑響應(yīng)強(qiáng)度的比值均大于1.2，說(shuō)明6種目標(biāo)物存在明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。因此，本文采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正補(bǔ)償。在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)6種目標(biāo)物50，75，150，300，500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度(X，μg/L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在50～500 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.992。

2.7 回收率、精密度與定量下限

分別在空白豆芽和番茄中添加15，30，60 μg/kg 3個(gè)濃度水平的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行方法學(xué)考察，按優(yōu)化條件進(jìn)行提取并分析，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次。鑒于吲哚乙酸為植物內(nèi)源性生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，本實(shí)驗(yàn)所選用的空白豆芽中吲哚乙酸含量為6 μg/kg(低于最低添加量的50%，且計(jì)算回收率時(shí)已扣除空白)。如表2所示，方法的回收率為70.0%～127%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均不大于11.4%。同時(shí)，當(dāng)添加濃度為15 μg/kg時(shí)，6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的信噪比均大于10，因此確定方法的LOQ為15 μg/kg，而國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局要求LOQ為0.03 mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的準(zhǔn)確度與精密度完全能滿足豆芽和番茄中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè)定要求。

表2 6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在2種基質(zhì)中的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

2.8 樣品分析

從杭州超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中采集黃豆芽、綠豆芽和番茄12份進(jìn)行6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留分析，其中番茄中均未檢出，而豆芽中主要檢出4-CPA和IAA，其中黃豆芽中4-CPA的含量為0.023～0.594 mg/kg，IAA的含量為0.003～0.01 mg/kg；綠豆芽中4-CPA的含量為0.015～0.104 mg/kg，IAA的含量為0.008～0.049 mg/kg。此外，為排除人為添加的干擾，本實(shí)驗(yàn)還對(duì)自制的豆芽進(jìn)行了檢測(cè)，主要檢出IAA，其在黃豆芽中的含量為0.01～0.06 mg/kg，綠豆芽中的含量為0.006～0.023 mg/kg。

3 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)影響氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離分析的主要因素進(jìn)行優(yōu)化，建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)豆芽中6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的分析方法。相比已報(bào)道的分析方法，本方法縮短了前處理時(shí)間，提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性。

[1] Wang Y Q, Zhang G H, He H J.Mod.Instrum.(王一茜，張廣華，何洪巨.現(xiàn)代儀器)，2012, 18(2):6-10.

[2] GB 2760-2014.National Food Safety Standard-Standards for Uses of Food Additives.National Standards of the People's Republic of China(食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn).中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).[3] China Food and Drug Administration, Ministry of Agriculture.National Health and Family Planning Commission.No.11, 2015(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局 農(nóng)業(yè)部 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)公告2015年第11號(hào)).[2016-04-14].http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0050/118260.html.

[4] GB 2763-2014.National Food Safety Standard-Maximum Residue Limits for Pesticides in Food.National Standards of the People's Republic of China(食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).

[5] The Announcement of [2014]73(The Third Department of Food Safety Supervision of China Food and Drug Administration)(食藥監(jiān)食監(jiān)三便函(2014)73號(hào) 2014年食品安全監(jiān)督抽查和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)指定檢驗(yàn)方法 附件).

[6] Jin F, Shao H, Yang M, Wang J.Agric.Qual.Standards(金芬，邵華，楊錨，王靜.農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn))，2007,6:26-27.[7] Wu S R, Chen W F, Zhou X.PlantPhysiol.Commun.(吳頌如，陳婉芬，周燮.植物生理學(xué)通訊)，1988,5:53-57.[8] Zhou Z H, Chu X, Shen G L, Yu R Q.Chem.Sens.(周振華，楚霞，沈國(guó)勵(lì)，俞汝勤.化學(xué)傳感器)，2009,29(3):29-33.

[9] Chang Y W，Wu X Z，Li W，Hao L H.Sci.Technol.FoodInd.(常宇文，吳曉宗，李偉，郝莉花.食品工業(yè)科技)，2007,28(12):203-205.

[10] Du L M, Xu Q Q.Chin.J.Chromatogr.(杜黎明，許慶琴.色譜)，2000,18(3):160-161.

[11] Zhou Y, Zhuang W J.J.Instruml.Anal.(周昱，莊無(wú)忌.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，1993,12(4):49-51

[12] Shi J E，Hou Y，Wang Y, Han X H, Wang Y.JilinVeget.(石金娥，侯宇，王瑩，韓曉紅，王宇.吉林蔬菜)，2014,2:54-55.

[13] Liu Y P, Wang L Y, Lu Y, Chang F Q, Yang L X, Zhang Y M.FoodSaf.Qual.Detect.Technol.(劉印平，王麗英，路楊，常鳳啟，楊立新，張永茂.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào))，2015,6(10):3827-3833.

[14] Kuang K, Zhao J L, Ying G G, Yuan Y Q, Yang X B, Li Z J.J.Instruml.Anal.(匡科，趙建亮，應(yīng)光國(guó)，袁永欽，楊小兵，李忠軍.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2008,27(8):816-819.

[15] Li Y, Xu X, Yuan H F, Gao H W, Feng H G.AnhuiAgric.Sci.(李殷，徐霞，袁荷芳，高蕙文，馮華剛.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)), 2014,42(27):9527-9528.

[16] Chai Y, Yang J Y, Li B Q, Zhou Y L，Xiong Y.SouthwestChin.J.Agric.Sci.(柴勇，楊俊英，李必全，周優(yōu)良，熊英.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào))，2007,20(4):698-701.

[17] Ma Y L，Zhu B， Xu X R，Ou XL．GuangdongChem.Ind.(馬瑜璐，朱斌，徐昕榮，區(qū)雪連.廣東化工)，2013,40(15):166-167.

[18] Peng S, Zhang H, Xun Z Y, Gao A Y.ShandongAgric.Sci.(彭姝，張昊，郇正玉，高艾英.山東農(nóng)業(yè)科學(xué))，2010,2:95-98.

[19] Lu Y M, Yi G B, Chen C B, Cai J L, Du B Y, Chen R Z.J.Instrum.Anal.(陸益民，易國(guó)斌，陳創(chuàng)彬，蔡金亮，杜彬仰，陳如珠.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2011,30(2):186-189.

[20] Zhang Y, Lu Y, Yang T, Zhang H T, Li M, Wang J D.J.Anal.Sci.(張瑩，鹿毅，楊濤，張煌濤，李明，王吉德.分析科學(xué)學(xué)報(bào))，2012,28(5):629-633.

[21] Ma L Y, Zhang H Y, Xu W T, He X Y, Yang L L, Luo Y B, Huang K L.FoodAnal.Methods, 2013,6(3):941-951.[22] Zhang F Z, Zhao P Y, Shan W L, Gong Y, Jian Q, Pan C P.Bull.Environ.Contam.Toxicol.,2012,89(3):674-679.[23] Liu C S, Luo H Y, Xian Y P, Wang B, Wang L, Luo D H, Guo X D.J.Chin.MassSpectrom.Soc.(劉春生，羅海英，冼燕萍，王斌，王莉，羅東輝，郭新東.質(zhì)譜學(xué)報(bào))，2014,35(4):302-310.

[24] Ding L, Zeng S D, Wei X Y, Wang M Y, Li J H, Cheng S H.FoodSci.(丁麗，曾紹東，魏曉奕，王明月，李積華，程盛華.食品科學(xué))，2014,35(22):169-175.

[25] Hu X N, Gu Y P, Lin H C, Wang R, Fang C F.FoodSci.(胡祥娜，顧亞萍，林慧純，王瑞，方長(zhǎng)發(fā).食品科學(xué))，2014,35(20):253-257.

[26] Zhang J W，Guo C H，Ge S H，Zhang H C，Wang J，Dou C Y，Ai L F.Chin.J.FoodHyg.(張婧雯，郭春海，葛世輝，張海超，王敬，竇彩云，艾連峰.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志)，2014，26(5):441-445.

[27] Mou Y L, Guo D H, Ding Z P, Yi X H.Chin.J.Anal.Chem.(牟艷莉，郭德華，丁卓平，伊雄海.分析化學(xué))，2013,41(11):1640-1646.

[28] Huang H H, Xu D M, Zhou Y, Luo J, Lü M L, Chen S B, Wang L Z.J.FoodSaf.Qual.(黃何何，徐敦明，周昱，羅佳，呂美玲，陳樹(shù)賓，王連珠.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào))，2014，5(4):1133-1141.

[29] Mou Y L, Guo D H, Ding Z P.Chin.J.Chromatogr.(牟艷莉，郭德華，丁卓平.色譜)，2013,13(10):1016-1020.[30] Xie W, Shi Y Z, Hou J B, Huang C Q, Zhao D , Pan L L, Dong S Z.Chin.J.Chromatogr.(謝文，史穎珠，侯建波，黃超群，趙棟，潘璐璐，董鎖拽.色譜)，2014, 32(2):179-183.

[31] Zhang Y L, Liu H, Wang S L, Ding T, Xu N S, Yu K Y, Shen W J, Zhao Z Y, Liu Y, Wu B, Zhang R, Shen C Y.J.Instrum.Anal.(張亞蓮，柳菡，王歲樓，丁濤，徐牛生，余可垚，沈偉健，趙增運(yùn)，劉蕓，吳斌，張睿，沈崇鈺.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2015,34(2):164-170.

[32] Xiang P, Shen M, Zhuo X Y.J.Instruml.Anal.(向平，沈敏，卓先義.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2009,28(6):753-756.[33] Analia E P, Maria V M, Cecilia M, María R S, Cristina C.BioControl,2009, 54(1):113-122.

Determination of 6 Plant Growth Regulators in Bean Sprout and Tomato by Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

ZHANG Wen-hua1, XIE Wen1*, HOU Jian-bo1，TONG Yun-kai2，LU Shun2，WANG Peng2

(1.Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, China;2.Zhejiang Lead Product Technic Co., Ltd., Hangzhou 310016, China)

A gas chromatography-tandem mass spectrometric(GC-MS/MS) method was developed for the determination of 6 plant growth regulators(PGRs),including 4-CPA,2,4-D,NAA,IAA,2,4-D butyl ester and IBA in bean sprout and tomato.The sample was firstly extracted with acided acetonitrile.The extract was concentrated and redissovled with methanol.And then, the solution was methyl esterified with 14% boron trifluoride methanol solution.The esterified solution was extracted with ethyl acetate-hexane(2∶8,by volume) after adding 2,4-D butyl ester solution.The treated extract was determined by GC-MS/MS under multiple reaction monitoring(MRM) mode,and quantified by the external standard method.The limits of quantitation(S/N>10) of 6 PGRs in bean sprout and tomato were 15 μg/kg.The recoveries of PGRs in bean sprout and tomato at three spiked levels of 15,30,60 μg/kg ranged from 70.0% to 127% with relative standard deviations(RSDs) of 4.1%-11.4%.The developed method is easy, fast and accurate,and could be applied in routine test of plant growth regulators in bean sprout and tomato samples.Key words：bean sprout;tomato;plant growth regulator;gas chromatography-tandem mass spectrometry(GC-MS/MS)

2016-03-28；

2016-04-17

浙江出入境檢驗(yàn)檢疫局一般科研計(jì)劃項(xiàng)目(ZK201514)

10.3969/j.issn.1004-4957.2016.10.004

O657.63;TQ314.254

A

1004-4957(2016)10-1241-07

*通訊作者：謝 文，碩士，研究員，研究方向：食品中獸藥殘留檢測(cè)，Tel:0571-81100817，E-mail:xw@ziq.gov.cn