孫芳，李文雙，滕艦，林淑華，于鵬飛

1.煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院腎內(nèi)科，山東煙臺(tái)　264000；2.山東省萊陽(yáng)市結(jié)核病防治所內(nèi)科，山東萊陽(yáng)　265200；3.煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東煙臺(tái)　264000

狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達(dá)譜研究及循環(huán)miR-130b-3p的臨床意義

孫芳1，李文雙2，滕艦1，林淑華1，于鵬飛3

1.煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院腎內(nèi)科，山東煙臺(tái)264000；2.山東省萊陽(yáng)市結(jié)核病防治所內(nèi)科，山東萊陽(yáng)265200；3.煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東煙臺(tái)264000

目的 研究探討狼瘡腎炎患者外周循環(huán)miRNA表達(dá)變化及其可能存在的臨床意義，為狼瘡腎炎的臨床治療提供更多的客觀依據(jù)。方法 方便選取2013年9月—2015年9月于該院診治的50例狼瘡腎炎患者，同時(shí)另選同期于該院體檢的50名健康者作為對(duì)照組。在100例研究對(duì)象中隨機(jī)選取15例患者做循環(huán)miRNA的表達(dá)譜檢測(cè)篩選（檢測(cè)組），85例患者做循環(huán)miRNA的表達(dá)譜驗(yàn)證篩選（驗(yàn)證組），同時(shí)應(yīng)用循環(huán)miR-130b-3p為驗(yàn)證對(duì)象，觀察與比較狼瘡腎炎患者與對(duì)照組患者的血清總RNA水平及檢測(cè)組中兩組患者的血清miRNA水平、驗(yàn)證組中miR-130b-3p的水平，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及相關(guān)性分析。結(jié)果 在驗(yàn)證組中，與對(duì)照組相比較（3.7±1.6）ng/μL，狼瘡腎炎組患者的循環(huán)血清中miR-130b-3p的表達(dá)水平（9.8±1.4）ng/μL顯著上升，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在檢測(cè)組中，與對(duì)照組相比較（28.6±2.4）ng/μL，狼瘡腎炎組患者循環(huán)表達(dá)的miRNA水平（46.8±5.6）ng/μL明顯上升，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達(dá)水平可能隨著腎功能的進(jìn)一步下降而出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)，其循環(huán)miR-130b-3p的表達(dá)與腎臟功能、血脂水平呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，這在狼瘡腎炎的疾病發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的作用。

狼瘡腎炎；miRNA；miR-130b-3p；表觀遺傳調(diào)節(jié)

狼瘡腎炎（Lupus Nephritis,LN）是一種繼發(fā)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的自身免疫性疾病，是SLE臨床上常見的、多發(fā)的并發(fā)癥，其在SLE患者中發(fā)病率高達(dá)80%左右?；荚摬『笠蚱渚哂卸嗥鞴偈芾鄣奶攸c(diǎn)，故嚴(yán)重影響患者的日常生活質(zhì)量，給患者帶來(lái)極大的負(fù)擔(dān)[1]。目前，該病的治療主要以免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素為主，雖然能在一定程度上改善患者的癥狀及其預(yù)后，但仍有不少患者的治療效果不甚滿意，進(jìn)而并發(fā)慢性腎衰竭[2-3]。因此，早期診斷、早期治療、積極改善預(yù)后是治療本病的關(guān)鍵。該研究方便選取該院2013年9月—2015年9月于該院診治的50例狼瘡腎炎患者，同時(shí)另選同期于該院體檢的50名健康者作為對(duì)照組，此100例患者為該研究入選研究對(duì)象。通過(guò)對(duì)LN患者及部分健康者的血清標(biāo)本應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)miRNA并進(jìn)行比較分析，以研究探討循環(huán)中miRNA作為狼瘡腎炎的新型生物標(biāo)志物的可行性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

方便選取2013年9月—2015年9月于該院診治的50例狼瘡腎炎患者，均符合狼瘡腎炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]及該研究的納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)；同時(shí)另選同期于該院體檢的50名健康者作為對(duì)照組。在100例研究對(duì)象中隨機(jī)選取15例患者做循環(huán)miRNA的表達(dá)譜檢測(cè)篩選（檢測(cè)組），85例患者做循環(huán)miRNA的表達(dá)譜驗(yàn)證篩選（驗(yàn)證組），同時(shí)應(yīng)用循環(huán)miR-130b-3p為驗(yàn)證對(duì)象。對(duì)照組組中男性25例，女性25例，年齡為（40.6±9.3）歲；狼瘡腎炎組患者男性30例，女性20例，年齡為（41.9± 9.4）歲。兩組研究對(duì)象在性別、年齡等一般性資料上比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。該研究已通過(guò)該院臨床研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1血清標(biāo)本采集所有研究對(duì)象均抽取空腹靜脈血3～5 mL，離心機(jī)離心15 min（3 000 r/min），于-20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2血清總RNA提取應(yīng)用miRNA試劑盒并依據(jù)其說(shuō)明書操作步驟對(duì)研究對(duì)象的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并記錄數(shù)據(jù)。

1.3觀察指標(biāo)

觀察與比較狼瘡腎炎患者與對(duì)照組患者的血清總RNA水平及檢測(cè)組中兩組患者的血清miRNA水平、驗(yàn)證組中兩組患者的血清miR-130b-3p的水平。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

研究中各項(xiàng)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布及方差齊性，則組間比較采用單因素方差分析，否則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。對(duì)miRNA表達(dá)量及相關(guān)臨床指標(biāo)等相關(guān)數(shù)據(jù)采用Spearman相關(guān)分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1血清總RNA表達(dá)水平比較

與對(duì)照組相比較，狼瘡腎炎組患者循環(huán)表達(dá)的miRNA水平明顯下降，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組患者血清總RNA表達(dá)水平比較[，ng/μL]

表1　兩組患者血清總RNA表達(dá)水平比較[，ng/μL]

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別血清總RNA表達(dá)水平對(duì)照組（n=50）狼瘡腎炎組（n=50）t P 30.6±2.5（19.4±2.6）*1.135＜0.05

2.2檢測(cè)組中兩組患者的血清miRNA表達(dá)譜分析比較

在檢測(cè)組中，與對(duì)照組相比較，狼瘡腎炎組患者循環(huán)表達(dá)的miRNA水平明顯上升，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　檢測(cè)組中miRNA表達(dá)水平比較[，ng/μL]

表2　檢測(cè)組中miRNA表達(dá)水平比較[，ng/μL]

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別血清miRNA表達(dá)水平對(duì)照組（n=7）狼瘡腎炎組（n=8）t P 28.6±2.4（46.8±5.6）* 1.027＜0.05

2.3驗(yàn)證組中兩組患者的血清循環(huán)miR-130b-3p分析比較

在驗(yàn)證組中，與對(duì)照組相比較，狼瘡腎炎組患者的循環(huán)血清中miR-130b-3p的表達(dá)水平顯著上升，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3　驗(yàn)證組中miR-130b-3p表達(dá)水平比較，ng/μL]

表3　驗(yàn)證組中miR-130b-3p表達(dá)水平比較，ng/μL]

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別　血清miR-130b-3p表達(dá)水平對(duì)照組（n=43）狼瘡腎炎組（n=42）t P 3.7±1.6（9.8±1.4）*0.156＜0.05

2.4患者的循環(huán)miR-130b-3p的表達(dá)與相應(yīng)指標(biāo)間的相關(guān)性分析

狼瘡腎炎患者的循環(huán)miR-130b-3p的表達(dá)與腎臟慢性活動(dòng)指數(shù)、24 h尿蛋白含量及血清甘油三酯水平均呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)（r＝0.201，0.319，0.346，P＜0.05）。

3　討論

該研究基于表觀遺傳學(xué)，對(duì)狼瘡腎炎患者血清中異常表達(dá)的miRNA進(jìn)行PCR分析，研究結(jié)果顯示狼瘡腎炎患者的血清總RNA水平和含量較正常健康人是明顯下降的，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明狼瘡腎炎患者廣泛存在循環(huán)miRNA的表達(dá)下調(diào)。這一結(jié)果與王萬(wàn)鵬等[5]研究結(jié)果基本一致，其中可能的原因與狼瘡腎炎患者的慢性腎功能受損存在一定的關(guān)系。因在臨床實(shí)際中，狼瘡腎炎患者的腎功能是逐漸惡化進(jìn)展的，在此過(guò)程中出現(xiàn)的循環(huán)miRNA水平表達(dá)下降或與腎功能密切相關(guān)，但具體病理機(jī)制尚不十分明確。miR-130b-3p最初多見于腫瘤類相關(guān)研究報(bào)道中，如張科等[6]研究指出miR-130b-3p能抑制某些基因的表達(dá)，參與腫瘤的早期轉(zhuǎn)移過(guò)程，很大程度上影響了腫瘤的進(jìn)展及治療預(yù)后。因此，在miR-130b-3p的后續(xù)多項(xiàng)相關(guān)研究報(bào)道中，將其作為疾病診療過(guò)程中的生物學(xué)標(biāo)志，指導(dǎo)疾病的診治。而在該研究中，研究結(jié)果顯示狼瘡腎炎患者的循環(huán)miR-130b-3p較正常健康人是顯著升高的（P＜0.05），且與患者的腎臟慢性活動(dòng)指數(shù)、24 h尿蛋白含量及血清甘油三酯水平均呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)，表明循環(huán)miR-130b-3p的高表達(dá)可能參與了狼瘡腎炎的疾病進(jìn)程，同時(shí)對(duì)狼瘡腎炎的早期診斷具有一定的參考價(jià)值，并能預(yù)測(cè)預(yù)后，這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7-8]。

綜上所述，狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達(dá)水平可能隨著腎功能的進(jìn)一步下降而出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)，其循環(huán)miR-130b-3p的表達(dá)與腎臟功能、血脂水平呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，這在狼瘡腎炎的疾病發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的作用。

[1]任義樂(lè)，馮學(xué)兵，鄒耀紅，等.狼瘡腎炎患者的臨床特點(diǎn)及預(yù)后分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2014，94（13）：973-976.

[2]王萬(wàn)鵬，王玲，車霞靜，等.微小RNA-130b-3p通過(guò)抑制ERBB2IP和PPARγ表達(dá)促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[J].中華腎臟病雜志，2015，31（12）：932-935.

[3]王彬，楊敏，李旻，等.他克莫司和環(huán)磷酰胺治療狼瘡腎炎的Meta分析[J].中華腎臟病雜志，2013，11（3）：210-213.

[4]魏玉翠，列才華，黃海，等.狼瘡腎炎的病理和免疫學(xué)指標(biāo)及臨床相關(guān)性分析[J].臨床腎臟病雜志，2014，11（10）：98-100.

[5]王萬(wàn)鵬，張敏芳，王玲，等．狼瘡腎炎患者循環(huán)miRNA表達(dá)譜研究及循環(huán)miRNA-130b-3p的臨床意義[J].中華腎臟病雜志，2015，4（6）：302-308.

[6]張科,邱茜,廖兢業(yè)，等.甲氨蝶呤聯(lián)合環(huán)孢素A治療難治性狼瘡腎炎的臨床療效[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(13): 2192-2194.

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[8]溫曉宏,鄭毅,陳珊珊，等.中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白單核細(xì)胞趨化蛋白-1及腫瘤壞死因子樣凋亡的微弱誘導(dǎo)劑在狼瘡腎炎中的臨床意義[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志, 2013,17(9):611-615.

Research on the Expression Profiling of Circulating miRNA and Clinical Significance of Circulating miR-130b-3p for LN Patients

SUN Fang1,LI Wen-shuang2,TENG Jian1,LIN Shu-hua1,YU Peng-fei3
1.Nephrology Department,Yantai Mountain Hospital of Yantai City,Yantai,Shandong Province,264000 China;2.Tuberculosis Control and Prevention of Laiyang City,Shandong Province,Internal Medicine,Laiyang，Shandong Province,265200 China;3.Yuhuangding Hospital of Yantai City,Respiratory Medicine,Yantai，Shandong Province,264000 China

Objective To study the clinical expression and significance of circulating miRNA and provide more objective basis in the treatment of LN(Lupus Nephritis).Methods Convenient selection 50 LN patients treated from September 2013 to September 2015 in our hospital were selected.50 healthy check-ups were selected as control group.15 subjects were randomly selected to receive the detection of circulating miRNA expression profiling(detection group);85 subjects 3p was the verification object;Observation and comparison of lupus nephritis patients and the control group of patients and the serum levels of total RNA and detecting group in two groups of patients with serum miRNA levels,the validation group miR-130b-3p level,and data statistical analysis and correlation analysis Results In the validation group,and control group comparison(3.7±1.6)ng/μL,significantly increased the expression levels of miR-130b-3p of circulating serum in patients with lupus nephritis(9.8±1.4)ng/μL,the difference has statistical significance(P＜0.05).In the test group,compared with the control group(28.6±2.4)ng/μL,miRNA levels(46.8±5.6)μg/uL were significantly increased in patients with lupus nephritis, and the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion For LN patients,the expression of circulating miRNA may be degraded with the lower renal function.The expression of circulating miR-130b-3p has an obvious correlation with renal function and blood lipid level,which it plays an important role in the genesis of LN.

the verification of circulating miRNA expression profiling(verification group);at the same time,the circulating miR-130b-

LN;miRNA;miR-130b-3p;Epigenetic regulation

R5

A

1674-0742（2016）10（c）－0001-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.30.001

煙臺(tái)市科技計(jì)劃發(fā)展項(xiàng)目（2013WS237）。

孫芳（1983.1-），女，山東煙臺(tái)人，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腎臟病的研究工作。

于鵬飛（1981.2-），男，山東青島人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：呼吸系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)疾病，E-mail:42246967 @qq.com。

（2016-07-28）