王延朋 劉麗娜 尹先哲

河南南陽市第二人民醫(yī)院腫瘤科 南陽 473000

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TGF-β1在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達及意義

王延朋 劉麗娜 尹先哲

河南南陽市第二人民醫(yī)院腫瘤科 南陽 473000

目的 檢測轉(zhuǎn)換生長因子β1蛋白(TGF-β1)在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織中的表達，探討其在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移中的作用。方法 選擇食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織，采用免疫組化檢測TGF-β1的表達水平。結(jié)果 TGF-β1在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織中的陽性表達率比瘤旁組織和正常腦組織明顯增高，提示TGF-β1的表達量在食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移的組織中明顯增加。結(jié)論 TGF-β1的陽性表達率與食管癌細胞含量的多少有關(guān)，與臨床病理特征無關(guān)。

食管鱗癌；TGF-β1；免疫組化；腦轉(zhuǎn)移

轉(zhuǎn)換生長因子β1蛋白(TGF-β1)于1983年被發(fā)現(xiàn)。幾乎在所有細胞中均有TGF-β1異構(gòu)體的表達，并與多種蛋白結(jié)合成復(fù)合體被分泌到細胞外基質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β信號通路影響細胞增殖、分化、遷移、黏附、細胞凋亡，胚胎發(fā)育，甚至參與人類疾病，包括心血管、纖維化、生殖、受傷等疾病和癌[1]。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇2006-01—2014-12南陽市第二人民醫(yī)院神經(jīng)外科經(jīng)手術(shù)切除的12例食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤手術(shù)標(biāo)本，診斷均有病理檢查支持，男8例，女4例；年齡61～72歲。所有患者術(shù)前均未放療。病理診斷和分級按2011年中國抗癌協(xié)會食管癌專業(yè)委員會制定的食管癌規(guī)范化診治指南標(biāo)準(zhǔn)確定：12例病例均為食管鱗癌Ⅳ級。另選取12例同期住院的經(jīng)手術(shù)切除的正常腦組織的患者(正常腦組織組)，男7例，女5例；年齡23～47歲。標(biāo)本切除離體后，病理科常規(guī)石蠟包埋切片。

1．2 方法

1．2．1 常規(guī)HE染色：脫蠟，按下面步驟依次進行：二甲苯15 min，二甲苯15 min；無水乙醇5 min，無水乙醇5 min，95%乙醇 5 min，95%乙醇 5 min，80%乙醇 5 min，水洗，蘇木精染核 5 min，流水稍洗1～3 s，1%鹽酸酒精分化，0.5%伊紅液染色 5 min，水洗，80%乙醇5 min，95%乙醇5 min，95%乙醇5 min，無水乙醇 5 min，95%乙醇5 min，二甲苯5 min，二甲苯5 min，中性樹膠封片。

1．2．2 免疫組織化學(xué)染色：首先將組織切片進行脫蠟、水化處理，抗原修復(fù)，封閉，置于PBS中10 min，一抗(兔IgG)4℃過夜，TBS漂洗10 min，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗3次，3 min/次，DAB顯色，蒸餾水漂洗，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察。

1．2．3 判定免疫組化的結(jié)果：組織切片在光學(xué)顯微鏡下進行觀察，由本院兩位病理科醫(yī)師進行雙盲閱片，每張切片隨機取6個高倍視野(×400)。對視野內(nèi)陽性細胞計數(shù)，表達陽性細胞的判斷標(biāo)準(zhǔn)：①完全沒有著色 0分，輕度淡黃色著色 1分，中度棕黃色著色 2分，3棕褐色著色 3分。判斷陽性范圍：0分<5%，1分5%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%；最終判定結(jié)果為二者相加分數(shù)：陰性(-)<2分，弱陽性(+)2～3分，中度陽性(++)4～5分，強陽性(+++)6～7分。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。采用Wilcoxon秩檢驗比較配對設(shè)計的等級資料。

2 結(jié)果

2．1 TGF-β1表達的檢測結(jié)果 根據(jù)免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果顯示，細胞染色定位于胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色，彌漫狀分布為TGF-β1表達陽性。食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織中TGF-β1總陽性表達率和強陽性表達率分別為100.00%(12/12)、50.00%(6/12)；食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤瘤旁組織為58.3.00%(7/12)、0；正常腦組織為 41.7%(5/12)、0。根據(jù)Wilcoxon秩檢驗結(jié)果看出食管鱗癌腦轉(zhuǎn)移瘤、瘤旁組織及正常腦組織中TGF-β1的表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 12例患者TGF-β1表達情況

注：與瘤旁組比較，*P<0.05；與正常組比較，#P<0.05

2．2 TGF-β1的表達與臨床病理特征二者之間關(guān)系 不同腫的瘤轉(zhuǎn)移部位、分化程度、腫瘤的體積、轉(zhuǎn)移個數(shù)等對TGF-β1的表達顯示無顯著性差異(P>0.05)。

3 討論

惡性腫瘤出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移幾率為 15%～40%，食管癌腦轉(zhuǎn)移比較少見，僅為 1.4%～1.7%[1]。 我院 8 a間共收治食管癌腦轉(zhuǎn)移患者 12 例，占同期食管癌患者的 2.03 %。國內(nèi)外尚無大宗臨床報道。腫瘤腦轉(zhuǎn)移多出現(xiàn)在食管癌診斷后1 a內(nèi)。食管癌腦轉(zhuǎn)移的診斷主要依據(jù)病史、癥狀、體征以及影像學(xué)檢查?；颊叨嘤诎l(fā)病前出現(xiàn)顱內(nèi)壓增高的表現(xiàn)和運動障礙，如頭暈、頭痛、惡心、嘔吐及步態(tài)不穩(wěn)等。CT或MRI檢查顯示單發(fā)或者多發(fā)的顱內(nèi)占位性病變，且多伴明顯的瘤周水腫，增強顯示病灶被強化。最終診斷可經(jīng)活檢證實。在我國食管癌腦轉(zhuǎn)移者多見于食管鱗癌患者，與我國食管鱗癌高發(fā)一致。食管癌腦轉(zhuǎn)移患者男性居多，且發(fā)病年齡較大，中位年齡60歲。Wadhwa等[2]報道食管癌腦轉(zhuǎn)移患者，臨床分期較差。本組患者均為IV 期，與報道相符。

1983年人們發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)換生長因子β1(TGF-β1)，現(xiàn)在經(jīng)過大量研究人們發(fā)現(xiàn)TGF-β信號通路影響細胞增殖、分化、遷移、黏附、細胞凋亡，胚胎發(fā)育，甚至參與人類疾病，包括心血管、纖維化、生殖、受傷等疾病和癌[3]。幾乎在所有細胞中都有TGF-β1異構(gòu)體的表達，并與多種蛋白結(jié)合成復(fù)合體被分泌到細胞外基質(zhì)。目前人們并不十分清楚TGF-β是如何激活下游信號通路，但我們知道TGF-β配體通過與細胞表面受體結(jié)合調(diào)節(jié)細胞生命過程[4]。TGF-β受體Ⅱ型(TGF-βRII)招募TGF-β受體I(TGF-βRI)，然后組裝異二聚體受體復(fù)合體。TGF-βRII磷酸化TGF-βRI，然后依次磷酸化R-Smads(受體調(diào)控的Smads，包括Smad2 和 Smad3 蛋白)。磷酸化的Smad2和Smad3與Smad4形成一個復(fù)合體，然后轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)，在細胞核內(nèi)它們結(jié)合轉(zhuǎn)錄活化因子或轉(zhuǎn)錄抑制因子來調(diào)節(jié)目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在食管癌腦轉(zhuǎn)移組織中TGF-β1表達量明顯比癌旁和正常腦組織中增高，說明TGF-β1表達量與食管癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生有一定的相關(guān)性。且TGF-β1表達量的多少與組織中食管鱗癌細胞的含量有一定關(guān)系。進一步的研究一方面可以圍繞食管鱗癌原發(fā)灶中TGF-β1表達量與腦轉(zhuǎn)移的的關(guān)系展開，另一方面可以在食管癌細胞系中進行功能學(xué)研究，證實TGF-β1與食管癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

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(收稿2015-11-25)

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