趙勝杰+周靈焱+尚建立+高磊+路緒強(qiáng)+何楠+劉文革

摘要：利用16對(duì)多態(tài)性SSR引物分析了52份中國(guó)西瓜地方品種的遺傳多樣性。共擴(kuò)增出42種基因型，基因型數(shù)2～5種不等，平均2.63個(gè)，平均多態(tài)性信息量（PIC）為0.31，變化范圍為0.16～0.47。52個(gè)品種遺傳相似系數(shù)為0.288～1.000，平均0.652，在相似系數(shù)0.69處，供試品種可分為6大群。品種的聚群與地理來源和地理環(huán)境關(guān)系不大。

關(guān)鍵詞：西瓜；地方品種；SSR；遺傳多樣性

中圖分類號(hào)： S651.03 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2016）09-0061-03

地方品種是指未經(jīng)現(xiàn)代育種技術(shù)改良修飾，僅在長(zhǎng)期栽培過程中由自然和人工選擇形成的農(nóng)家品種。中國(guó)西瓜地方品種在20世紀(jì)50、60年代被廣泛種植，通常表現(xiàn)田間生長(zhǎng)旺盛，稍難坐瓜，果型大，成熟晚，皮厚，種子大，含糖量低，可溶性固形物含量?jī)H6%～9%，品質(zhì)較差。但地方品種對(duì)屬地自然條件、栽培傳統(tǒng)具有高度適應(yīng)性，擁有豐富的遺傳變異，也具有一些有益于品種改良的優(yōu)良性狀，如特殊的抗性、生態(tài)適應(yīng)性、優(yōu)良品質(zhì)性狀等，是現(xiàn)代生物學(xué)和育種研究的重要基因資源，也是西瓜品種選育的基本材料，生產(chǎn)上應(yīng)用的許多優(yōu)良西瓜品種都是從本地種質(zhì)材料中選育出來的。有關(guān)我國(guó)西瓜地方品種的研究較少，主要集中在田間農(nóng)藝性狀和生物學(xué)特性考察方面。尚建立等以我國(guó)西瓜、甜瓜種質(zhì)資源中期庫(kù)內(nèi)1 200份西瓜種質(zhì)為材料（包含了我國(guó)絕大部分地方西瓜資源），通過2～3年的數(shù)據(jù)對(duì)果實(shí)重量、果肉顏色、中心糖、種子千粒質(zhì)量等12項(xiàng)主要植物學(xué)性狀進(jìn)行了遺傳多樣性和相關(guān)性分析[1]。朱金英等對(duì)山東德州西瓜地方品種喇嘛、三白果實(shí)可溶性糖、維生素C、可滴定酸的積累規(guī)律進(jìn)行了研究[2]，陶士會(huì)等則對(duì)這2個(gè)品種苗期耐低溫特性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)三白、喇嘛SOD、POD、CAT和APX酶活性始終高于對(duì)照品種京欣1號(hào)，表明三白、喇嘛西瓜品種幼苗在低溫脅迫下具有更強(qiáng)的細(xì)胞膜保護(hù)能力[3]。本研究擬利用核心SSR標(biāo)記對(duì)我國(guó)部分西瓜地方品種資源進(jìn)行遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析，以期為我國(guó)地方西瓜資源的科學(xué)評(píng)價(jià)和高效利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料均來自國(guó)家西瓜甜瓜種質(zhì)資源中期庫(kù)，共計(jì)52份（表1）。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 每份材料取20粒種子， 破殼催芽后置于裝有細(xì)沙的培養(yǎng)盒中，在25 ℃人工發(fā)芽箱中培養(yǎng)10 d，CTAB法提取新鮮嫩葉的基因組DNA。

1.2.2 SSR引物篩選 以23對(duì)西瓜核心SSR引物和7對(duì)核心擴(kuò)展引物，以及筆者所在課題組開發(fā)的2對(duì)EST-SSR作為候選引物，由上海博彩生物科技有限公司合成。

1.2.3 PCR擴(kuò)增及電泳 擴(kuò)增反應(yīng)體系的總體積為10 μL，含有1 μL 10×PCR buffer、0.8 μL 2.5 mmol/L dNTP、0.1 μL 的Taq DNA 聚合酶（5 U/μL）、10 μmol/L的正反引物各0.5 μL 和20 ng模板DNA。擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性20 s，55 ℃復(fù)性20 s，72 ℃延伸90 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染染色，拍照并記錄結(jié)果。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 統(tǒng)計(jì)分子量在100～320 bp的條帶，相同遷移位置有帶記為1，無(wú)帶記為0。多態(tài)性信息量（polymorphism information content）PIC值的計(jì)算公式：PIC=1-∑fi2，其中fi為i位點(diǎn)的基因頻率。先根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果計(jì)算引物的等位位點(diǎn)數(shù)及頻率，然后利用軟件計(jì)算PIC值。采用NTSYS-pc V 2.10軟件進(jìn)行聚類分析SimQual程序求Jaccard 相似系數(shù)，SHAN程序中的UPGMA（未加權(quán)平均法）進(jìn)行聚類分析，并通過Treeplot模塊生成聚類圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 SSR標(biāo)記多態(tài)性分析

從參試的32對(duì)候選引物中選擇穩(wěn)定性強(qiáng)、具多態(tài)性的16對(duì)引物用于品種DNA指紋分析（表2）。

16對(duì)多態(tài)性引物共擴(kuò)增出42種基因型，基因型數(shù)2～5種不等，平均2.63個(gè)，平均多態(tài)性信息量（PIC）為0.31，變化范圍為0.16～0.47。以引物 BVWS00433 最高，引物BVWS02433最低（表3）。

2.2 聚類分析結(jié)果

根據(jù)16對(duì)引物擴(kuò)增數(shù)據(jù)，采用UPGMA法進(jìn)行聚類分析，建立樹狀聚類圖（圖1）。

供試品種間遺傳相似系數(shù)為0.288～1.000，平均0.652，阿拉克孜外（6）和小籽葫蘆（7）相似系數(shù)最小，黑皮（27）和溫嶺西瓜（41）、 梨皮（13）和鋼皮（16）、阜陽(yáng)1號(hào)（26）和偃師一號(hào)（43）、雞爪灰（39）和凍瓜（42）無(wú)法區(qū)分。在相似系數(shù)0.69 處，供試材料可分為6大群，皮牙孜奎克（1）、塔車紅（38）、小鋼皮（28）、卡拉夏伯克（46）為第1群；大紅籽（4）、阿克塔吾孜（19）為第2群；吐白皮西瓜（2）、小紅籽（20）、吐黑皮（37）、吐花皮西瓜（3）、卡拉塔吾孜（22）、宿縣小籽（32）、早密矮（36）、恰兒塔吾孜（8）、雞爪瓜（31）、沂南蜜（30）為第3群；阿克柯孜外（5）、花皮瓜（44）、阿拉克孜外（6）、奎克塔吾孜（21）為第4群；小籽葫蘆（7）為第5群；蘭州花皮（9）、馬泗河（23）、胎里紅（29）、小青皮（45）、陜西紅籽（10）、黑皮（27）、溫嶺西瓜（41）、梨皮（13）、鋼皮（16）、桃尖（17）、雞頭黑西瓜（35）、阜陽(yáng)1號(hào)（26）、偃師一號(hào)（43）、馬欏（40）、雞爪灰（39）、凍瓜（42）、小麻籽（47）、喇嘛瓜（11）、平湖馬鈴（49）、寧縣西瓜（15）、尉氏西瓜（33）、黑油皮（12）、黑皮西瓜（25）、青抱筋（34）、阜陽(yáng)3號(hào)（18）、核桃紋（24）、透心紅（14）、頂心紅（51）、廣州花皮（50）、金瓜（48）、黑崩筋（52）為第6群（圖1）。

3 討論

本研究利用16對(duì)多態(tài)性SSR引物分析了52份中國(guó)地方西瓜品種資源，數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明供試品種間相似系數(shù)為0.288～1.000，平均0.652，多態(tài)性高于選育品種和骨干親本材料[4-6]。現(xiàn)代品種選育研究由于單一多次重復(fù)使用少數(shù)幾個(gè)骨干親本材料，造成品種間同質(zhì)化嚴(yán)重，同時(shí)由于過度追求產(chǎn)量和品質(zhì)，忽視了抗性、適應(yīng)性選擇，很多抗逆性優(yōu)良基因逐步丟失，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)埋下了巨大風(fēng)險(xiǎn)。西瓜地方品種在我國(guó)20世紀(jì)50、60年代被廣泛種植，長(zhǎng)期的自然和人工選擇造就其獨(dú)特的環(huán)境適應(yīng)性，很多材料具有特殊的抗性和生態(tài)適應(yīng)性，品種間遺傳多樣性豐富，是擴(kuò)大我國(guó)西瓜品種遺傳來源、有益于品種抗性和適應(yīng)性改良的重要基因資源，今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)地方品種資源的收集和系統(tǒng)研究，使其更好地服務(wù)于現(xiàn)代育種工作。

從聚類分析結(jié)果可以看出，來源地相同的品種遺傳相似性不一定高，如同樣來源于南疆的阿拉克孜外和小籽葫蘆相似系數(shù)最小，既遺傳差異最大。來源于新疆的品種分別被聚類到了6個(gè)群中，顯示了新疆西瓜資源具有較高的多樣性。河南、山東、浙江、遼寧、陜西、甘肅、廣東的品種都聚到了第6群，安徽6個(gè)品種有4個(gè)聚到第6群。單從聚類結(jié)果來看，品種的聚群與地理來源和地理環(huán)境并未呈現(xiàn)較大的相關(guān)性。

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