莊光 陳祥珍

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小鵝瘟病毒抗原免疫雞對蛋黃抗體產(chǎn)生規(guī)律的實踐

莊光1陳祥珍2

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小鵝瘟疫是一種發(fā)生在3周齡以內雛鵝身上的亞急性或急性的敗血傳染性疾病，這種病毒具有傳染速度快、致死亡率高、發(fā)病率高的特征。基于此，通過向產(chǎn)蛋雞注射不同劑量的小鵝瘟病毒抗原的試驗，來尋找抗體產(chǎn)生的規(guī)律，創(chuàng)造一種高質量、高效率的抗體方法，降低養(yǎng)鵝的風險。

小鵝瘟病毒；免疫；抗體

小鵝瘟病毒是一種發(fā)生在雛鵝身上的急性或亞急性敗血傳染病，這種病毒主要產(chǎn)生于3周左右的雛鵝身上，具有高死亡率、高傳播率、高發(fā)病率的特征［1］。該文闡述的試驗是對蛋雞注射不同劑型的小鵝瘟病毒免疫抗原，從蛋黃中檢測抗體產(chǎn)生的規(guī)律，為研究小鵝瘟病蛋黃抗體提供資料。

1 蛋黃抗體的簡介

蛋黃抗體是指蛋黃中存在的抗體，也稱蛋黃免疫球蛋白?？茖W家在鳥類的血液循環(huán)中發(fā)現(xiàn)了3種免疫球蛋白。母雞在細胞分裂產(chǎn)蛋的過程中，會將其免疫球蛋白轉移至雞蛋；母雞血漿中的IgA與IgM，會在輸卵管中與其他的蛋白質結合而構成雞蛋蛋白部分。比較特別的是，在成熟期中，血清IgG會經(jīng)蛋黃薄膜轉移到蛋黃中，蛋黃的IgG與哺乳類的IgG在分子量、等電點、細胞膜上Fc受質的鍵結構上存在著相異點而被特定稱為IgY。雞卵黃免疫球蛋白G抗體是一種7S免疫球蛋白，與哺乳動物IgG略有不同。該蛋白質分子量約為180 KDA，含2個亞單位，即67-70KDA的重鏈和22-30KDA的輕鏈，存在于免疫后母雞的卵黃中。

2 材料和試劑

水劑抗原體，滅活的小鵝瘟病毒絨尿液與生理鹽水按照1∶1的比例稀釋。油劑抗原體，滅活的小鵝瘟病毒絨尿液與礦物油按照1∶1的比例混合在一起。標準劑量的小鵝溫瓊擴診斷抗原體。挑選健康的可以產(chǎn)蛋的雞35只。

瓊擴平板：將1.0 g的優(yōu)質瓊脂粉添加到含8%氯化鈉的溶液中，將混合液進行加熱待完全溶化后再加入濃度約為0.01%的硫柳貢防腐，澆制凝膠板，冷卻后放置在溫度約為4℃的空間內保存。

表1 第一次免疫后蛋黃中的抗體水平

表2 第二次免疫后蛋黃中的抗體水平

3 試驗方法

3.1 免疫的方式方法

將35只雞分在7個雞籠中，每籠5只雞，給挑選出的35只健康雞注射抗原體，用肌肉注射的方式給每只雞注射水劑抗原體1 mL。每天都要注射，從第6天開始，每隔3、5 d就取雞蛋進行測驗，當雞的免疫力降到log2時開始注射二次疫苗。在進行第2次疫苗接種時，將7籠進行分類注射，前3籠的雞只給注射1 mL的水劑抗原體，后4籠的雞只注射1 mL的油劑抗原體。

3.2 抗體的檢測方式

在免疫前后要檢測蛋黃中的抗小鵝瘟病毒瓊擴抗體，將每組產(chǎn)出的雞蛋具體細化分組，在每只雞蛋中取相同等量的蛋黃，按照1∶1的比例將蛋黃混合在一起并稀釋，等到離心棄脂肪后取出蛋液留作檢測。再將瓊擴抗體凝膠板按照中央1孔，外圍6孔的方式進行打孔，孔徑要控制在3 mm左右，間距約為4 mm，加入的樣本量為25 μL，并將樣本做陰陽性的血清對照。加入樣本后放置在恒溫為37℃的濕度空間內進行雞蛋孵卵24 h，再在室內放置24～48 h。根據(jù)初步的觀察現(xiàn)象可以判斷出的結果為：蛋黃抗體的效價就是在標準抗原體形成的白色沉淀線的最大抗體稀釋倍數(shù)值。

4 試驗過程與結果

4.1 試驗過程

取出小鵝瘟病毒水劑抗原體，給35只普通雞翅下肌肉注射陰性的1 mL小鵝瘟病毒抗原瓊擴抗體，據(jù)觀察發(fā)現(xiàn)35只雞并未出現(xiàn)應激的現(xiàn)象，雞群仍在正常的生活、產(chǎn)蛋。注射后按時收集雞蛋并對蛋黃進行檢測，推斷抗小鵝瘟病毒的蛋黃抗體水平。

第27天檢測發(fā)現(xiàn)雞蛋中蛋黃抗小鵝瘟病毒體的抗體滴已經(jīng)下降到了log2，則需要給雞群進行分組注射，第2次注射要按照分組的形式注射不同的抗原體，前3組注射水劑抗原體，后4組注射油劑抗原體。將收集到的雞蛋進行分組并按照1∶1的比例稀釋，等到蛋黃離心棄脂肪后取出蛋液進行檢測，檢測的結果具體如表1和表2所示。

4.2 試驗結果

①水劑抗原體在第1次使用后，在第6天達到了有效的治療效果，其當時的小鵝瘟病毒抗體效價約為2.8log2，平均抗體水平為5.7log2。

②第1次使用的水劑型抗原體對小鵝瘟病毒的抵抗時間為20 d左右，20 d后蛋黃的抗體水平在逐漸下降，已不能抵抗小鵝瘟病毒。等到27 d后就檢測不到蛋黃中的抗體水平。

③第2次免疫的劑型分為水劑和油劑，水劑型抗原體在再次免疫后，蛋黃的抗體水平有所上升，然后不再變化。油劑型抗原體注射后，蛋黃的抗原體水平上升的比較快且可以持續(xù)很久。

5 結語

本次試驗采用水劑型和油劑型2種抗原體，在第1次注射后雞群可以在短時間內產(chǎn)生蛋黃抗原體，當抗體水平下降到一定值的時候用油劑型與水劑型開始第2次注射，第2次注射后就產(chǎn)生了區(qū)別，油劑型抗原體對蛋黃抗體的產(chǎn)生效果較好。

［1］蘭信海，馮永勝，衣服德，等.雞抗小鵝瘟精致高免蛋黃抗體的研制［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2011（4）：15-16.

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