宋云飛，魏夢夢，陳 甜，焦 蕊，孫平平，趙孔銀

（天津工業(yè)大學(xué) 省部共建分離膜與膜過程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300387）

PP纖維支撐蛋白質(zhì)印跡海藻酸鈣凝膠膜的制備和表征

宋云飛，魏夢夢，陳 甜，焦 蕊，孫平平，趙孔銀

（天津工業(yè)大學(xué) 省部共建分離膜與膜過程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300387）

以海藻酸鈉（NaAlg）為印跡材料，以牛血清白蛋白（BSA）為模板分子，以聚丙烯（PP）無紡布為支撐體，制備了PP無紡布支撐的BSA分子印跡海藻酸鈣水凝膠膜（PP-s-CaAlg MIP）.同時(shí)不加蛋白質(zhì)制備了非印跡膜，記為PP-s-CaAlg NIP.通過掃描電鏡（SEM）、紅外光譜（FT-IR）對PP-s-CaAlg凝膠膜進(jìn)行表征，測定了其在生理鹽水中的溶脹性能.討論了不同NaAlg濃度制備的PP-s-CaAlg水凝膠膜在不同緩沖液中對BSA的釋放.研究了不同緩沖液下不同NaAlg濃度制備的PP-s-CaAlg MIP膜和NIP膜對BSA的吸附性能.結(jié)果表明：PP-s-CaAlg MIP膜對BSA的吸附量明顯優(yōu)于PP-s-CaAlg NIP膜；與對比蛋白質(zhì)相比，PP-s-CaAlg MIP對模板蛋白質(zhì)的吸附量更多，表明其具有一定的吸附選擇性；PP-s-CaAlg MIP膜制備簡單，成本低，生物相容性好，可用于細(xì)胞培養(yǎng)和組織工程領(lǐng)域.

蛋白質(zhì)分子印跡；海藻酸鈣凝膠膜；聚丙烯無紡布；釋放；吸附

分子印跡技術(shù)［1-4］是指通過將模板分子（印跡分子）與單體共聚，制備對某一特定分子具有識別選擇性的聚合物的技術(shù)［5］.海藻酸鈣（CaAlg）水凝膠作為一種保水性能佳、生物相容性好、制備成本低廉的軟濕性材料受到廣泛關(guān)注［6］，目前已被用于蛋白質(zhì)印跡［7］.但純海藻酸鈣水凝膠的強(qiáng)度和穩(wěn)定性差，容易受到印跡溶液環(huán)境的影響，其機(jī)械強(qiáng)度較低.Zhao等［8］用氯化鈣作為交聯(lián)劑，制備了印跡BSA的磷酸/海藻酸雜化微球，這種磷酸/海藻酸雜化微球與非印跡微球相比顯示出了更高的吸附量.Zhang等［9］用氯化鈣作為交聯(lián)劑，將海藻酸鈉與羥乙基纖維素復(fù)合，制備的BSA印跡海藻酸鹽基復(fù)合微球具有很好的力學(xué)性能，和單純的海藻酸鈣微球相比具有更好的識別性能.

PP無紡布纖維具有良好的物理機(jī)械性能和柔韌性，比表面積較大，耐溶液腐蝕能力強(qiáng)，性能和外觀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定［10］.Zhao等［11］以PP無紡布纖維為載體，通過紫外輻照接枝的方法制備了BSA印跡PP接枝聚丙烯酰胺水凝膠膜，該印跡膜對BSA具有較高的吸附量和吸附選擇性.Kan等［12］以PP無紡布纖維為載體，通過紫外輻照制備了PP無紡布支撐的BSA印跡聚丙烯酰胺/海藻酸鈣水凝膠膜.但是紫外照射引發(fā)單體聚合過程不可避免地產(chǎn)生熱量，會引起蛋白質(zhì)的變性或構(gòu)象變化，造成吸附量偏低.宋歡語等［13］制備了不同厚度的BSA印跡CaAlg凝膠膜，但是得到的CaAlg水凝膠膜機(jī)械性能較差.

本文以海藻酸鈉（NaAlg）為印跡材料，以BSA為模板分子，以PP無紡布為支撐體，采用溫和的洗脫方式，制備了PP無紡布支撐的BSA分子印跡CaAlg水凝膠膜（PP-s-CaAlg MIP）.采用掃描電子顯微鏡和紅外光譜儀觀測其形貌及結(jié)構(gòu)，研究了不同海藻酸納濃度對PP-s-CaAlg膜溶脹性的影響，以及在不同緩沖液的PP-s-CaAlg中對于蛋白質(zhì)的釋放和重吸附.初步研究了其選擇性吸附性能.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

聚丙烯（PP）無紡布（22 g/m2），香河華鑫非織造布有限公司產(chǎn)品；海藻酸鈉（NaAlg），化學(xué)純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；氯化鈉和氯化鈣，分析純，上海申翔化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；混合磷酸鹽（PBS）緩沖液和Tris-HCl緩沖劑，天津市化學(xué)試劑二廠產(chǎn)品；卵清蛋白（Ova）、過氧化氫酶（Cat）和丙種球蛋白（Glo），色譜純，天津市血液研究所提供；牛血清蛋白（BSA），色譜純，聯(lián)星生物科技有限公司提供.所有試劑使用前均未純化.

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

TU-1901型紫外分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；LLY-06F型拉伸試驗(yàn)機(jī)，萊州市電子儀器有限公司產(chǎn)品；掃描電子顯微鏡（S-4800， HITACHI），日本日立公司產(chǎn)品；傅里葉變換紅外光譜儀（TENSOR37），德國BRUKER公司產(chǎn)品.

1.3 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜的制備

取一個(gè)干燥的小燒杯，向其中加入20 mL質(zhì)量濃度為1.34 mg/mL的BSA溶液，在磁力攪拌器上邊攪拌邊緩慢加入一定質(zhì)量的NaAlg粉末，攪拌1 h，形成NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.5%、2.0%、2.5%和3.0%的均一的水溶液，靜置12 h以脫除氣泡.取1片PP無紡布浸入到上述混合物水溶液中，將完全潤濕的PP無紡布放置到干凈的玻璃板上，將上述混合物水溶液倒在完全潤濕的PP無紡布表面，用厚度為0.5 mm的刮膜棒刮膜，并刮掉表面多余的NaAlg溶液，放入CaCl2溶液（2.5%）中交聯(lián)，5 min后取出，即可得到含BSA的PP無紡布支撐海藻酸鈣水凝膠膜.

用pH=6.8的磷酸鹽（PBS）緩沖液，0.9%的NaCl溶液和pH=8.32的Tris-HCl緩沖劑分別洗脫BSA的PP支撐海藻酸鈣水凝膠膜，用紫外分光光度計(jì)和蛋白質(zhì)顯色劑測試在上述3種洗脫液中BSA的釋放率.每隔8 h換一次洗脫液，待測試不出BSA釋放率后認(rèn)為模板蛋白質(zhì)被充分洗脫［12］，得到PP支撐的海藻酸鈣BSA印跡凝膠膜，記為PP-s-CaAlg MIP.非印跡膜除了不加BSA，其制備與洗脫過程與上述步驟相同，得到的非印跡膜記為PP-s-CaAlg NIP.

1.4 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜的表征

1.4.1 SEM

將樣品放入冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，用導(dǎo)電膠將樣品貼在樣品臺上，真空噴金之后采用QUANTA 200掃描電子顯微鏡觀察PP-s-CaAlg膜的表面形態(tài)和膜表面的微觀結(jié)構(gòu).

1.4.2 FT-IR

取PP-s-CaAlg與CaAlg凝膠膜的樣品放入冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24 h，制樣后用TENSOR37型紅外光譜儀分別對樣品成分含量和官能團(tuán)進(jìn)行檢測，掃描波長范圍為400～4 000 cm-1，分辨率為±2 cm-1.

1.5 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜的溶脹性能

采用稱量的方法研究PP-s-CaAlg膜在生理鹽水中的溶脹性能.用蒸餾水把PP-s-CaAlg小圓片表面沖洗干凈并用濾紙吸去表面的水并稱量該膜片的初始質(zhì)量W0，之后每隔一段時(shí)間取出，用濾紙將表面水分擦干后稱重，直到小圓片的質(zhì)量不再發(fā)生明顯變化為止，即可判定海藻酸鈣凝膠膜達(dá)到溶脹平衡.溶脹率（ESD）通過公式（1）計(jì)算：

式中：Wt為溶脹t時(shí)刻小圓片的質(zhì)量（g）；W0為溶脹前小圓片起始質(zhì)量（g）.

1.6 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜對BSA的釋放

取12個(gè)干燥透明的小玻璃瓶分為4組，每組3個(gè).將制備好的NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%、2%、2.5%和3%的含蛋白質(zhì)的PP纖維支撐海藻酸鈣膜裁剪成直徑為20 mm的小圓片，用蒸餾水將表面殘留CaCl2溶液沖洗干凈，分別加入3組小玻璃瓶中.然后向每組的3個(gè)小玻璃瓶中分別加入PBS緩沖液（pH=6.86）、NaCl溶液（0.9%）和Tris-HCl緩沖液（pH=7.4）溶液各5 mL，振蕩洗脫，在固定相隔時(shí)間用紫外分光光度計(jì)測定玻璃瓶中上清液在波長278 nm和330 nm處的吸光度，直到所得數(shù)值穩(wěn)定，蛋白質(zhì)濃度不再發(fā)生大的變化為止.根據(jù)吸光度數(shù)據(jù)和所使用蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線處理數(shù)據(jù)，求得洗脫液中的蛋白質(zhì)含量，即為洗脫量.

1.7 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜對BSA的重吸附

取表面用蒸餾水沖洗干凈的PP-s-CaAlg MIP膜和PP-s-CaAlg NIP膜的小圓片放入到含5 mL濃度為20 μmol/L的BSA溶液的小玻璃瓶中，在室溫下靜置吸附.在固定相隔時(shí)間用紫外分光光度計(jì)測定玻璃瓶中上清液在波長278 nm和300 nm處的吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白質(zhì)對應(yīng)的濃度.蛋白質(zhì)重結(jié)合吸附量Q（mg/g）采用以下公式進(jìn)行計(jì)算：

式中：C0和Ct分別為重結(jié)合前后的蛋白質(zhì)溶液的濃度（μmol/L）；V為蛋白質(zhì)溶液的體積，該實(shí)驗(yàn)中為5 mL；W為重結(jié)合實(shí)驗(yàn)所用膜片干態(tài)的質(zhì)量（g）.

1.8 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜的吸附選擇性

為測試PP-s-CaAlg MIP膜對BSA的選擇性吸附性能，分別配制BSA、Ova、Cat和Glo的水溶液，質(zhì)量濃度均為1.34 mg/mL.分別將PP-s-CaAlg MIP和NIP膜放入10 mL上述蛋白質(zhì)溶液中，12 h后測試蛋白質(zhì)溶液的紫外吸光度，計(jì)算其平衡吸附容量（mg/g）.

2 結(jié)果與討論

2.1 SEM分析

圖1所示為PP和PP-s-CaAlg的數(shù)碼照片和SEM照片.由圖1可見，PP無紡布表面粗糙且有規(guī)則孔隙，在PP無紡布表面涂覆CaAlg膜之后，表面呈現(xiàn)出一層光滑透明的凝膠層，無紡布纖維有明顯的凹凸孔穴和大孔結(jié)構(gòu)，這種表面形態(tài)有利于蛋白質(zhì)的釋放吸附和在膜內(nèi)的擴(kuò)散過程.圖1（c）、（d）中顯示了PP纖維和PP支撐CaAlg膜的微觀形貌，PP纖維表面光滑裸露，PP-s-CaAlg表面附著了一層光滑的CaAlg膜，可清楚看到PP纖維對CaAlg膜起到了有效的支撐作用.

圖1 PP和PP-s-CaAlg的數(shù)碼和SEM照片F(xiàn)ig.1 Digital and SEM photos of PP and PP-s-CaAlg

2.2 FT-IR分析

圖2所示為CaAlg、PP、PP-s-CaAlg的紅外光譜.海藻酸鈣凝膠在3 430 cm-1附近顯示出1個(gè)寬峰，這是O-H的伸縮峰.在1 630 cm-1處的1個(gè)尖銳的峰為COO-非對稱伸縮，在1 403 cm-1處的峰為仲醇中的C-H變形，在1 089 cm-1和1 031 cm-1處2個(gè)峰分別為CH-OH結(jié)構(gòu)中C-O的伸縮以及C-O-C結(jié)構(gòu)中C-O的對稱伸縮.與純PP纖維的紅外譜圖相比，PP-s-CaAlg紅外曲線在原有的峰的基礎(chǔ)上疊加了CaAlg的吸附峰，沒有新的峰出現(xiàn).這說明通過表面涂覆制備PP支撐CaAlg膜，制備過程沒有新官能團(tuán)的產(chǎn)生.

圖2 CaAlg、PP、PP-s-CaAlg的紅外光譜Fig.2 FTIR spectrogram of CaAlg，PP，PP-s-CaAlg

2.3 PP-s-CaAlg膜溶脹性能

不同濃度NaAlg制備的PP-s-CaAlg膜在0.9%的NaCl溶液中的溶脹性能如圖3所示.

由圖3可見，4種不同NaAlg含量的膜在2 h內(nèi)均發(fā)生了明顯的溶脹，溶脹率隨時(shí)間的延長逐漸升高，最后溶脹率變化趨于平緩，對比4種NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜，NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的膜片溶脹度最高，這說明NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的PP-s-CaAlg膜最適合用于對BSA的釋放.NaAlg含量過低，海藻酸鈉溶液會過多滲入PP纖維內(nèi)部，因此溶脹能力受到剛性纖維的抑制［14］.PP纖維確實(shí)起到了抑制CaAlg膜溶脹度過高的作用，防止出現(xiàn)CaAlg膜在溶液中溶脹過度而破裂的情況發(fā)生.而NaAlg含量過高會導(dǎo)致海藻酸鈉溶液粘度大，NaAlg溶液不容易滲透到纖維中，造成水凝膠與PP無紡布脫落.

圖3 不同濃度NaAlg制備的PP-s-CaAlg膜的溶脹性能Fig.3 Swelling properties of PP-s-CaAlg prepared with different NaAlg concentrations

2.4 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜對BSA的釋放

圖4所示為不同NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜對BSA的釋放曲線.從圖4中釋放曲線可以看出，4種NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜對BSA的釋放率都隨著時(shí)間不斷的增加逐漸達(dá)到釋放平衡.而在每個(gè)厚度所對應(yīng)的不同洗脫液中，釋放率最高的是PBS緩沖液，這主要是由于PBS緩沖液中富含磷酸根離子，會搶奪PP-s-CaAlg膜中的鈣離子，使得海藻酸鈣凝膠交聯(lián)度下降，溶脹率上升，體積變化較大，方便了蛋白質(zhì)的傳質(zhì)過程，更利于膜中BSA的釋放.PP-s-CaAlg膜對BSA的總釋放率有所下降，這主要是由于PP纖維一定程度上限制了CaAlg膜的溶脹.在所有的緩沖液中，NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.5%、2%、2.5%、3%的PP-s-CaAlg膜對釋放趨勢類似，起初隨著時(shí)間增加釋放率緩慢增長，大約在200 min時(shí)達(dá)到釋放平衡，過后隨著時(shí)間增長，釋放率不再發(fā)生明顯變化.對比不同NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜對BSA的釋放率，可以發(fā)現(xiàn)釋放率隨著NaAlg含量的升高明顯上升，主要原因是，隨著NaAlg含量的升高，膜內(nèi)形成的海藻酸鈣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的交聯(lián)度也會升高，交聯(lián)度分布較寬，大分子鏈的運(yùn)動伸縮性較強(qiáng)，有利于負(fù)載更多的BSA，因此表現(xiàn)出的BSA的釋放率也較大［5］.

圖4 不同NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜對BSA的釋放曲線Fig.4 BSA release curves of PP-s-CaAlg film with different NaAlg contents

2.5 PP纖維支撐海藻酸鈣凝膠膜對BSA的重吸附

圖5所示為不同NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜對BSA的重吸附曲線.

由圖5可見，隨著時(shí)間的延長，PP-s-CaAlg膜對BSA的吸附量逐漸增加，大約在800 min達(dá)到吸附平衡，時(shí)間過長會造成膜表面BSA分子解吸附的現(xiàn)象.吸附速率在短時(shí)間內(nèi)升高較快，這主要是由于膜表面印跡孔穴和位點(diǎn)起初大量與BSA分子結(jié)合引起的，隨著印跡孔穴逐漸被BSA占據(jù)，吸附速率開始下降.對比PP-s-CaAlg膜在3種不同緩沖液中的吸附數(shù)據(jù)可以看出，PBS溶液中的吸附量最大，這與PP-s-CaAlg膜在PBS溶液中溶脹度較高有關(guān)系.PP纖維的支撐作用有效的改善了CaAlg膜在PBS溶液中吸附不穩(wěn)定，表面印跡孔穴被破壞的情況，纖維支撐的CaAlg膜在3種溶液中對BSA的吸附量與純CaAlg膜相比顯著上升.由圖5還可以發(fā)現(xiàn)，重結(jié)合量并沒有隨著NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)的升高而增加，NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的PP-s-CaAlg膜對BSA的重結(jié)合量最.NaAlg含量過低時(shí)，CaAlg凝膠膜內(nèi)交聯(lián)度過低且滲入PP纖維，因此溶脹度過低，不利于印跡孔穴和位點(diǎn)的形成和維持；NaAlg含量過高時(shí)又不利于BSA分子在CaAlg凝膠膜內(nèi)部的傳質(zhì)過程，只有NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%時(shí)為最佳的含量比，對BSA的重結(jié)合量最高.

圖5 不同NaAlg含量的印跡和非印跡PP-s-CaAlg膜對BSA的重結(jié)合曲線Fig.5 BSA adorption curves of PP-s-CaAlg MIP and NIP film with different SA contents

圖6所示為PP-s-CaAlg膜的印跡效率隨時(shí)間的變化曲線.

圖6 PP-s-CaAlg MIP膜對BSA的印跡效率曲線Fig.6 Imprinting efficiency curves of PP-s-CaAlg MIP film BSA

由圖6可見，PP-s-CaAlg膜在3種緩沖液中的印跡效率都是開始時(shí)較大，隨著時(shí)間的延長逐漸減小.一方面原因是吸附開始時(shí)印跡位點(diǎn)較多，印跡速率上升快，隨著印跡位點(diǎn)逐漸被BSA占據(jù)，印跡效率出現(xiàn)明顯下降.另一方面原因是，蛋白質(zhì)在洗脫液中由于外界因素干擾發(fā)生構(gòu)象的變化，不能與印跡位點(diǎn)特異性的結(jié)合，導(dǎo)致印跡效率的降低.

2.6 PP-s-CaAlgMIP和NIP膜對BSA的吸附選擇性

圖7所示為PP-s-CaAlg MIP和NIP膜對單一的模板蛋白BSA及對比蛋白卵清蛋白（Ova），過氧化氫酶（Cat）和伽馬球蛋白（Glo）的平衡吸附量.

圖7 PP-s-CaAlg MIP和NIP膜對BSA及對比蛋白的吸附量（用Tris-HCl做洗脫液）Fig.7 Adsorption capacities of PP-s-CaAlg MIP and NIP films for BSA and other proteins（films was washed by Tris-HCl buffer）

PP-s-CaAlg MIP膜對模板BSA的吸附容量比NIP，且對BSA的吸附量均大于其余蛋白質(zhì)的吸附量.

而NIP對各種蛋白質(zhì)的吸附量相差不大.這表明PP-s-CaAlg MIP具有一定的吸附選擇性和識別能力.

3 結(jié)論

通過涂覆的方法可方便地制備PP無紡布支撐的BSA分子印跡海藻酸鈣水凝膠膜（PP-s-CaAlg MIP），PP纖維對濕軟性質(zhì)的CaAlg凝膠起到了支撐作用. NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的PP-s-CaAlg膜的溶脹性能最好，NaAlg含量過低或過高引起的交聯(lián)度過低或過高都不利于溶脹.PP-s-CaAlg膜在PBS緩沖液中的釋放率明顯高于在Tris-HCl和NaCl溶液中的釋放率. PBS洗脫液得到的樣品吸附量最大.PP纖維的支撐作用有效的改善了CaAlg膜在PBS溶液中吸附不穩(wěn)定的情況，并且整個(gè)過程中沒有用到有機(jī)溶劑，得到的材料生物相容性好.NaAlg質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的PP-s-CaAlg膜對BSA的重結(jié)合量高于其他NaAlg含量的PP-s-CaAlg膜.

與對比蛋白質(zhì)相比，PP-s-CaAlg MIP對模板蛋白質(zhì)的吸附量更多，表明其具有一定的吸附選擇性.

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Preparation and characterization of PP non-woven fiber supported protein molecular imprinted calcium alginate hydrogel film

SONG Yun-fei，WEI Meng-meng，CHEN Tian，JIAO Rui，SUN Ping-ping，ZHAO Kong-yin
（State Key Laboratory of Separation Membranes and Membrane Processes，Tianjin Polytechnic University，Tianjin 300387，China）

Bovine serum albumin （BSA）imprinted calcium alginate hydrogel film supported by polypropylene（PP）nonwoven fabrics（PP-s-CaAlg MIP）was prepared using sodium alginate as the molecularly imprinted materials，BSA as the template molecule，and PP non-woven fabrics as the matrix.At the same time the non-molecularly imprinted film was also prepared without BSA and named as PP-s-CaAlg NIP.The PP-s-CaAlg MIP was characterized by SEM and FT-IR，and its swelling performance was measured in physiological saline.The release properties of BSA on the PP-s-CaAlg hydrogel films prepared with different NaAlg concentrations were investigated in different buffers.The adsorption properties of the PP-s-CaAlg MIP and NIP films prepared with different NaAlg concentrations under different buffers were analyzed.The experimental results showed that the PP-s-CaAlg MIP film adsorbed more BSA than PP-s-CaAlg NIP film.Compared with contrast protein，PP-s-CaAlg MIP adsorbed more template protein，indicating that the PP-s-CaAlg MIP exhibited the performance of adsorption selectivity.PP-s-CaAlg MIP exhibited good biocompatibility and could be prepared by a fast，low-cost method，which would find its potential applications in the fields of cell culture and tissue engineering.

proteins molecularly imprinting；calcium alginate hydrogel film；polypropylene non-woven fabric；release；adsorption

TS102.54

A

1671-024X（2016）05-0005-06

10.3969/j.issn.1671-024x.2016.05.002

2016-06-16

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（51103102）；天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目（16JCZDJC37500）；天津市科技特派員項(xiàng)目（16JCTPJC44800）

宋云飛（1989—），男，碩士.E-mail：sunshine5437@126.com

趙孔銀（1979—），男，博士，副教授，主要研究方向?yàn)楣δ芨叻肿硬牧?E-mail：zhaokongyin@tjpu.edu.cn