金三俊，楊月月，王玉姣，董佳琦，任紅立，汪晶晶，刁新平*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，哈爾濱 150030；

2.河南科技大學動物科學技術(shù)學院，河南 洛陽 475300；

3.東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，哈爾濱 150030）

蒲公英等五種中草藥不同組合體外大腸桿菌抑菌效果比較

金三俊1，楊月月2，王玉姣3，董佳琦1，任紅立1，汪晶晶1，刁新平1*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，哈爾濱 150030；

2.河南科技大學動物科學技術(shù)學院，河南 洛陽 475300；

3.東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，哈爾濱 150030）

試驗選取了蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩5種常見中草藥的不同組合進行了體外抑菌實驗并測定各組對大腸桿菌的抑菌效果。結(jié)果表明，黃芩和黃連、黃芩和蒲公英、黃芩和金銀花、蒲公英和金銀花、金銀花和白頭翁、白頭翁和蒲公英等組合對大腸桿菌均有一定的抑制作用。黃芩和黃連、黃芩和蒲公英、黃芩和金銀花、蒲公英和金銀花及金銀花和白頭翁對大腸桿菌的抑菌直徑分別為9、8、75、2、2 mm。試驗結(jié)果表明，5種中草藥的不同組合對大腸桿菌均有一定的抑制效果，黃芩和蒲公英組合對大腸桿菌有較強的抑菌效果。

中草藥；提取物；抑菌作用；蒲公英；黃芩

中草藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)學的瑰寶，容易獲得且價格低廉，藥物活性成分多，具有廣譜抗菌作用。隨著科技的發(fā)展，中草藥飼料添加劑使用不斷的擴增[1]。中草藥可以用來治病、強健體魄，作為食材可以調(diào)養(yǎng)身體，很多中草藥療效已被現(xiàn)代的科學研究所證實。每味中草藥都有其各自的性味和功能，可通過炮制和煎煮等方法發(fā)揮藥效，由于西藥存在藥物殘留以及耐藥性的問題，因此中草藥的研究顯得越發(fā)重要。雖然西藥的使用方便且廣泛，但西藥可使細菌和病毒產(chǎn)生一定的耐藥性及變異，此外西藥治療也會對機體產(chǎn)生一定的毒副作用，西醫(yī)治療與中醫(yī)不同，中醫(yī)以調(diào)節(jié)人體的內(nèi)在生理動能為主，而西醫(yī)則是對疾病采取對抗性的療法，這種對抗性的療法對人的危害極大。近幾年，國內(nèi)外也有不少研究報道中草藥的療效，但是關(guān)于中草藥的不同組合體外的抑菌效果的研究比較少。多數(shù)清熱解毒中草藥都具有一定的的抗菌消炎、抗病毒和促進機體免疫功能的作用，如：蒲公英，性味苦、甘、寒，其歸肝，胃經(jīng)，具有清熱解毒，消痛散結(jié)和利尿通淋的作用；金銀花是比較常見的一味中草藥，俗稱“二花”，具有清熱解毒和疏散風熱的功效。蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩均屬于清熱解毒藥。本試驗選取了蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩5種中草藥及其不同組合進行體外抑菌試驗，通過試驗來了解中草藥的配伍禁忌及其對病原菌的抑制和殺滅作用，為中草藥在臨床上準確合理的使用，提高生產(chǎn)環(huán)節(jié)動物的生長性能，消除細菌耐藥性的研究提供一定基礎(chǔ)。

1 中草藥體外抑菌的研究現(xiàn)狀

1.1 單味中草藥體外抑菌的研究現(xiàn)狀

不少學者做過單味中藥體外抑菌實驗，試驗結(jié)果表明，單味中草藥對耐藥菌具有一定的抑制作用。欒耀芳等研究表明，黃芩、黃連、黃柏、大青葉和貫眾這些中藥對金黃色葡萄球菌具有抑制作用，為臨床治療特殊耐藥菌株提供了較為有利的科學依據(jù)[2]。李仲興等研究結(jié)果表明，黃連對金黃色葡萄球菌的抗菌活性有較好的效果[3]。張振卿研究了耐藥細菌性痢疾的中藥治療，在治療過程中采用了單味苦參膠囊口服或者100%苦參液保留灌腸的方法，結(jié)果表明，治療耐藥細菌性痢疾58例，并且近期治愈率為100%[4]。目前，清熱解毒類的中草藥在感染性疾病中發(fā)揮著重要的作用，研究比較多的有黃連、蒲公英、金銀花。單味中草藥對某些常見病菌有一定抑制作用，但大多數(shù)還停留在藥理試驗研究階段。王嵩研究表明，單味中草藥的抗菌作用較抗生素弱，而復方中藥或中藥提取物則可以提高抗菌效果[5]。

1.2 復方中草藥體外抑菌的研究現(xiàn)狀

中藥制劑“肺炎1號”對臨床耐藥菌株（MRSA菌株、產(chǎn)ESBLs肺炎克雷白桿菌）進行體外抑菌實驗表明，中藥制劑對目前棘手的耐藥菌株有很好的抑制作用[6]?，F(xiàn)代藥理學試驗研究表明，雙黃連中的3味中藥都具有廣譜抗菌作用，并且能夠降低毛細血管的通透性，減少滲出，具有抗炎、抗過敏作用。痰熱清注射液藥理研究表明，黃芩有較廣譜的抗菌、抗炎、抗病毒、解熱、抗變態(tài)的反應作用，熊膽有解痙、抑菌、抗炎作用，山羊角有較強的解熱作用，金銀花、連翹對多種病原微生物有抑制或殺滅作用[7]。

1.3 目的與意義

在很多藥用植物中發(fā)現(xiàn)了能夠產(chǎn)生具有藥理活性的物質(zhì)，但提取物活性物質(zhì)的含量卻很低，導致其藥效無法達到理想的效果[8]。就目前的水平而言，還不能夠應用于工業(yè)生產(chǎn)或制藥行業(yè)，面對這一嚴峻現(xiàn)狀，發(fā)揮中草藥的治療優(yōu)勢將成為今后研究的重點。清熱解毒中草藥在臨床上應用廣泛，中藥復方制劑作用優(yōu)于單味中藥，為中藥抗菌感染應用提供了廣闊的發(fā)展空間。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

2.1.1 試驗菌種及中草藥

大腸桿菌由河南科技大學動物科學院微生物試驗室提供。蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩均購買于河南省洛陽市澗西區(qū)張仲景大藥房。

2.1.2 試驗儀器

試管、pH試紙、濾紙、簡易水汽蒸餾裝置（購自上海博訊醫(yī)療設(shè)備有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、燒杯、鑷子、搪瓷鍋、電爐、超凈工作臺（購自上海博訊醫(yī)療設(shè)備有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、電子天平（購自德國Sartorius公司）、培養(yǎng)皿、霉菌培養(yǎng)箱（購自上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、膠頭滴管、玻璃棒等。

2.1.3 體外藥物敏感性實驗

采用平板紙片擴散法（抗菌藥物紙片瓊脂擴散法敏感試驗），每個平板上均勻地放置5個藥敏片，保持相鄰兩孔的距離＞2 cm，分別做好標記。用無菌注射器吸取大腸桿菌培養(yǎng)液0.1 mL，滴于平皿底層培養(yǎng)基上，用無菌棉簽蘸取細菌培養(yǎng)液，均勻涂布于平板上，將蘸有中藥液的藥敏片對應地貼于已經(jīng)劃分且標記好的培養(yǎng)基表面。每個相同平皿做A、B、C、D、E 5個對照，然后置于34℃恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)14～24 h。用直尺測定出抑菌圈的實際直徑，并計算出每種中草藥對大腸桿菌抑菌圈的平均值，對其進行分析和討論。

2.2 試驗方法

2.2.1 中草藥的選取

中草藥的選取對試驗的結(jié)果以及藥效有一定的影響，每一味中草藥都有其本身的特性，如果沒有選擇合適的藥量及使用方法，就不可能使藥物發(fā)揮其最大的功效[9]。蒲公英是常見的多年生草本植物，種子上有白色冠毛結(jié)節(jié)的絨球[10]。將干燥無雜質(zhì)的蒲公英作為藥材，經(jīng)加工形成皺縮卷曲的團塊[11]。白頭翁俗稱“老公花”，作為藥材多選用干燥的根部，干燥的根部呈圓柱形至圓錐形，味苦澀，歸胃、大腸經(jīng)。金銀花氣味香，味甘微苦。黃連以根莖入藥，有瀉火解毒，清熱燥濕功效，能夠抑菌抗病毒、抗原蟲，氣微，味極苦。黃芩藥理上以黃芩的根入藥，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效，其性寒，味苦，入心、肺、大腸經(jīng)。

2.2.2 中草藥提取液的制備

每味中草藥有其特定的生物活性，不同的中草藥提取方法不同，保留最大的有效成分。試驗采用煎煮法來提取中草藥的有效成分。稱取蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩5種中草藥各30 g，分別置于不同的搪瓷鍋中進行煎煮，使藥濃度控制為1 g·mL-1，倒入燒杯中使其溫度降低，分裝好，然后進行高壓滅菌，放于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3 試驗結(jié)果

3.1 單味中草藥提取液抑菌的測定

單味中草藥提取液對大腸桿菌的抑制效果見表1。

將藥敏片放入蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩5味中草藥的提取液中浸泡10～15 min，中草藥提取液中的藥敏片不得少于5片。于無菌操作臺中，將大腸桿菌接種于高壓滅菌后的培養(yǎng)基中，然后將浸泡好的藥敏片貼在培養(yǎng)基上，放置34℃恒溫箱培養(yǎng)14～24 h。

由表1可知，抑菌效果較好的為黃連，黃連的抑菌圈直徑為11.62 mm，其次為金銀花，金銀花的抑菌圈直徑為10.26 mm，蒲公英抑菌圈直徑為8.1 mm，白頭翁抑菌圈直徑為8.0 mm，黃芩抑菌圈直徑為8.7 mm。根據(jù)體外抑菌性結(jié)果的判定標準可知，5味中草藥提取液的抑菌效果均為低敏，即抑菌效果就沒有達到中、高敏狀態(tài)，而目前細菌的耐藥性越來越嚴重，單味中草藥的提取液對細菌的抑制效果已不能滿足動物生產(chǎn)的需要，因此本試驗需要在單味中草藥的抑菌基礎(chǔ)上進一步研究復方中草藥的抑菌效果[13]。由以上試驗數(shù)據(jù)可知，5種中草藥的提取液對大腸桿菌都能產(chǎn)生不同程度的抑制作用，抑制的強弱排序為：黃連＞金銀花＞黃芩＞蒲公英＞白頭翁。

3.2 復方中草藥提取液抑菌的測定

復方中草藥提取液對大腸桿菌的抑制效果見表2。

表1 單味中草藥提取液對大腸桿菌的抑制效果

表2 復方中草藥提取液對大腸桿菌的抑制效果

先將蒲公英、白頭翁、金銀花、黃連、黃芩5味中草藥以相等的量（每味中草藥5 mL進行混合）進行不同的組合，即：組合1，蒲公英和白頭翁（白蒲）；組合2，蒲公英和金銀花（金蒲）；組合3，蒲公英和黃連（連蒲）；組合4，蒲公英和黃芩（芩蒲）；組合5，白頭翁和金銀花（白金）；組合6，白頭翁和黃連（白連）；組合7，白頭翁和黃芩（白芩）；組合8，金銀花和黃連（金連）；組合9，金銀花和黃芩（金芩）；組合10，黃連和黃芩（連芩）。將藥敏片放入組合液中浸泡10～15 min，每種復合中草藥提取液中的藥敏片不得少于5片。于無菌操作臺中，先將大腸桿菌接種于高壓滅菌后的培養(yǎng)基中，然后將浸泡好的藥敏片貼在培養(yǎng)基上，放置34℃恒溫箱培養(yǎng)12～24 h。

由表2可得，混合后的中草藥提取液的抑菌效果有了一定的增強，其中第2、3、6、8和9組的抑菌效果比較明顯，但4和1組的抑菌效果增強的幅度不是很大。第1組合是蒲公英和白頭翁，第4組合是蒲公英和黃芩，蒲公英、白頭翁和黃芩這3味中草藥都屬于清熱藥，但之間也有所不同，蒲公英的清熱解毒作用較強，對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和傷寒沙門菌等有殺菌作用；白頭翁屬于清熱涼血藥，既能清熱解毒又能入血和涼血，對銅綠假單胞菌和枯草桿菌有抑制作用；黃芩有清熱燥濕，傾瀉上焦實火，用于治肺熱咳嗽，對流感病毒和皮膚真菌等也有抑制作用[14]。

4 討論

就目前我國的畜牧業(yè)以及醫(yī)學界的發(fā)展來看，中草藥的發(fā)展有一種勢在必行的趨勢。畜牧業(yè)的發(fā)展不僅關(guān)乎著人類的健康，也是一個國家經(jīng)濟的重要組成部分，然而畜牧行業(yè)對抗生素的使用過于頻繁，藥物在動物體內(nèi)的殘留越來越嚴重，屠宰沒有經(jīng)過休藥期（又稱消除期，是指動物從停止給藥到許可屠宰或乳、蛋等產(chǎn)品許可上市的間隔時間）的動物，殘留在動物體內(nèi)的藥物對人體的健康也有一定危害，中草藥的副作用少，毒害小，雖然藥程時間長，但是能夠減少藥物殘留，無論是對動物還是對人體健康中草藥都是一個不錯的選擇[15]。

中草藥的醫(yī)藥效果已成為當前及今后醫(yī)學發(fā)展的方向，中草藥毒副作用小，價格實惠，對疾病的根除有一定的效果[16]。中草藥在日常生活中對維持身體健康有很大幫助，但很多中草藥提取物活性不高，抑菌效果也就無法達到想要的結(jié)果。本試驗主要根據(jù)中草藥自身特性，對細菌的抗菌活性進行研究，在單味藥對大腸桿菌的抑制效果的基礎(chǔ)上來研究復合中草藥提取液組合對大腸桿菌的抑制作用，為進一步對復方中草藥的研究提供一定的基礎(chǔ)[17-18]。通過混合提取液進一步研制中草藥，結(jié)果表明中草藥提取液混合后的抑菌效果有一定的增強，這一結(jié)論，可為今后對復方中草藥的研究提供一定的理論支持[19-20]。

5 結(jié)論

5種中草藥的不同組合對大腸桿菌均有一定的抑制效果，其中黃芩和蒲公英組合對大腸桿菌有較強的抑菌效果。

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The Effect of Traditional ChineseE.coliMedicine in VitroBacteriostasis

JIN Sanjun1,YANG Yueyue2,WANG Yujiao3,DONG Jiaqi1,REN Hongli1, WANG Jingjing1,DIAO Xinping1*

（1.College of Animal Science and Technology,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;

2.College of Animal Science and Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471000,Henan China;

3.College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China）

This trial selected different combinations of five common herbs,dandelion,Pulsatilla,honeysuckle, berberine and skullcap,conducted in vitro antibacterial test operation of each group and measured inhibitory effect on E.coli.The results showed that skullcap and berberine,skullcap and dandelion,skullcap and honeysuckle,dandelion and honeysuckle,honeysuckle and Pulsatilla,Pulsatilla and dandelion,and other combinations had a certain inhibito?ry effect on E.coil.Skullcap and berberine,skullcap and dandelion,skullcap and honeysuckle,dandelion and honey?suckle,honeysuckle and Pulsatilla,their antibacterial diameters were 9,8,75,2,2 mm.Different combinations of five traditional Chinese herbs had a certain inhibitory effect on E.coli,skullcap and dandelions combination had strong an?tibacterial effect onE.coil.The results showedthat Chinese herbal medicine was a viable antibacterial drugs.

Chinese herbal medicine;extracts;antibacterial activity;dandelion;skullcap

S859.3；S852.61

A

1001-0084（2016）10-0001-04

2016-09-05

黑龍江省科技廳對外合作攻關(guān)項目（WB13B101）

金三俊（1991-），女，河南蘭考人，碩士研究生，研究方向為動物營養(yǎng)與飼料科學。

*通訊作者：副教授，碩士生導師，E-mail:diaoxp63@163.com。