鄭愛(ài)麗

禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)的血清學(xué)調(diào)查

鄭愛(ài)麗

（云南省水富縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站，云南水富 657800）

免疫是有效預(yù)防和控制禽流感的根本措施，免疫效果好壞是預(yù)防禽流感重要保證。為督促和指導(dǎo)免疫注射工作，2014年～2015年水富縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站對(duì)本轄區(qū)內(nèi)禽的禽流感（H5亞型）疫苗注射情況進(jìn)行了免疫抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果：2014、2015年免疫抗體合格率依次為79%和79.5%，達(dá)到了相關(guān)部門要求。本文詳細(xì)介紹了禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)操作方法、結(jié)果判定，提出了如何提高水富縣禽流感防治相應(yīng)措施。

水富縣；禽流感；免疫合格率調(diào)查

禽流感是一種由禽（鳥）流行性感冒病毒引起的感染，此病毒自然存在于禽（鳥）的消化道中。禽流感病毒分為高致病性和低致病性兩種，家禽感染高致病性禽流感病毒的致死率達(dá)80%以上。受高致病性禽流感的禽類臨床珍現(xiàn)為羽毛凌亂、停止產(chǎn)蛋、雞冠呈暗紅色或紫黑色、頭和顏面水腫、腳鱗出現(xiàn)紫色出血斑，部分病雞出血頭頸和腳步麻痹、抽搐等神經(jīng)癥狀。

1 材料和方法

1.1被檢血清

分別采自水富縣向家壩鎮(zhèn)、太平鎮(zhèn)、兩碗鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)（站）及散養(yǎng)戶120戶的雞血清200份進(jìn)行檢測(cè)。

1.2禽流感（H5亞型）抗原

哈爾濱維科生物制品開發(fā)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供。

1.3實(shí)驗(yàn)器材

禽流感（H5亞型）抗原、1%雞紅細(xì)胞、滅菌生理鹽水、被檢血清、96孔V型板、微量移液器、震蕩器等。

1.4檢測(cè)方法

禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)操作步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)，按照診斷試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行被檢血清的檢測(cè)，并記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.5操作步驟

該實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)步驟：血凝實(shí)驗(yàn)（HA）即測(cè)抗原血凝價(jià)，和血凝抑制實(shí)驗(yàn)（HI）。

（1）取取潔凈96孔V型板，用移液器從第1孔至12孔各加生理鹽水25μl。

（2）用移液器吸取禽流感（H5亞型）抗原液25μl加入并吹打3～5次，使其與生理鹽水充分混勻后，依次倍比稀釋至第11孔棄去，第12孔不加抗原作對(duì)照。每孔再加入25μl生理鹽水。

（3）用移液器向1～12孔加1%的紅細(xì)胞懸液25微升，震蕩混勻后在室溫下靜置40分鐘后觀察。紅細(xì)胞完全凝集抗原血凝價(jià)為1：512。

（4）按血凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果以1：128的稀釋倍數(shù)配置病毒抗原。

（5）用移液器吸取生理鹽水25微升加入96孔V型板的第1至11孔，第12孔加50μl生理鹽水。

（6）吸取被檢血清25微升加入第1孔混勻后，依次倍比稀釋至10孔棄去，（第11孔為抗原對(duì)照，第12孔為生理鹽水對(duì)照）。

（7）第1孔至第11孔均加入含4單位混勻的病毒抗原液25μl，室溫靜置30min。

（8）將第1孔至第12孔全部加入25μl1%雞紅細(xì)胞懸液（紅細(xì)胞懸液必須在用前搖勻），震蕩混勻，室溫靜置約40min后觀察結(jié)果。

2 結(jié)果判定

在對(duì)照孔成立的條件下，能完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的凝集抑制效價(jià)。檢測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)附表1。

通過(guò)禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)血清學(xué)調(diào)查結(jié)果來(lái)看，近兩年來(lái)我縣的禽流感（H5亞型）免疫抗體合格率達(dá)79.25%，說(shuō)明該病2014年、2015年在我縣的免疫抗體合格率已經(jīng)達(dá)到農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)。

3 防治措施

（1）為有效控制禽流感病的發(fā)生，對(duì)各養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行定期按比例抽樣監(jiān)測(cè)。對(duì)交易市場(chǎng)、禽類屠宰點(diǎn)、異地調(diào)入的活禽和禽產(chǎn)品不定期的進(jìn)行病原學(xué)和血清學(xué)抽樣監(jiān)測(cè)。尤其要管理好活禽交易市場(chǎng)，嚴(yán)厲打擊販賣病淘汰雞。

（2）引種檢疫，異地引進(jìn)種禽、種蛋，嚴(yán)格按照國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行，辦理相關(guān)檢疫審批手續(xù)方可引入。

（3）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，建立嚴(yán)格防疫、衛(wèi)生消毒制度，及時(shí)清理糞便，消滅蚊蠅，并定期進(jìn)行徹底消毒。

（4）定期臨檢，禽流感一旦發(fā)現(xiàn)，要及時(shí)上報(bào)按照有關(guān)法規(guī)對(duì)病雞進(jìn)行嚴(yán)格封鎖、隔離、撲殺、銷毀，對(duì)雞場(chǎng)進(jìn)行全面全面消毒，空舍，以清除禽流感。

（5）切實(shí)保證疫苗的質(zhì)量，進(jìn)一步改善疫苗的運(yùn)輸和保存條件，保證疫苗效價(jià)，確保免疫效果。

（6）調(diào)整農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，加強(qiáng)指導(dǎo)，幫助農(nóng)民科學(xué)飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)環(huán)境，提高飼養(yǎng)管理水平，減少疫病發(fā)生，增加農(nóng)民收入，改善農(nóng)民生活水平，從根本上提高免疫工作的積極性和主動(dòng)性。

［1］ 廖斌，李芳霞. H5亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)報(bào)告［J］.中國(guó)禽業(yè)導(dǎo)刊，2006，（9）：25.

［2］ 汪淑芳，周春宇. H5型高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)及免疫效果分析［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（30）：9537.

附表1 水富縣3鎮(zhèn)（辦）禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果 單位：%、份