孫 雯，李美華，羅 勇，盛立彥，潘 潔

(上?；ぱ芯吭杭夹g(shù)開發(fā)中心，上海 200062)

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液相色譜法測定車用尿素中縮二脲含量*

孫 雯，李美華，羅 勇，盛立彥，潘 潔

(上?；ぱ芯吭杭夹g(shù)開發(fā)中心，上海 200062)

建立一種車用尿素中縮二脲含量的反相高效液相色譜方法。采用Venusil HILIC色譜柱，檢測波長為195 nm，乙腈-10 mmol/L醋酸銨水溶液為流動相。方法的線性相關(guān)系數(shù)R=0.9998，檢出限為0.05 μg/mL，定量限為0.17 μg/mL，加標回收率為98.53%～100.88%，相對標準偏差RSD值為0.42%～0.58%。結(jié)果表明，該方法具有較高的靈敏度與準確度，且操作簡單、快速、重現(xiàn)性好，準確度高，是尿素中縮二脲檢測的一種理想分析方法。

尿素；縮二脲；高效液相色譜

目前，縮二脲常用的檢測方法是分光光度法[7-8]及液相色譜法[9-11]，如：GB/T 22924-2008中分別介紹了分光光度法及液相色譜法測定復(fù)混肥料中縮二脲含量的方法，其中液相色譜法采用甲醇-10 g/L磷酸二氫鉀水溶液(pH=6.0)做流動相[12]，該方法的回收率98.8%～106.8%，相對標準偏差0.5%～0.8%[13]；文獻報道，以水-氨水-高氯酸為流動相，采用L-column ODS柱，在190 nm下測定尿素中縮二脲含量，該方法回收率99.0%～102.5%，相對標準偏差0.18%～1.08%[14]；近期有文獻采用Venusil HILIC柱，以乙腈-水為流動相，在200 nm下測定乳制品中縮二脲含量，該方法回收率95.0%～101.0%，相對標準偏差2.2%～6.4%，方法的檢出限為0.2 mg/kg[15]。由此可見，目前國內(nèi)對縮二脲的檢測，大多使用高濃度緩沖鹽體系的流動相或在流動相中使用強酸性試劑，這對儀器及色譜柱的影響較大；而采用乙腈-水做流動相方法的精密度則不及前者。

本文采用HILIC色譜柱，以乙腈-10 mmol/L醋酸銨水溶液為流動相，對縮二脲、尿素分離方法進行了探索研究。該法不但避免了離子對試劑的使用，而且可獲得更低的檢測限，具有簡便、快速、準確性好的特點，可滿足車用尿素中微量縮二脲雜質(zhì)的控制分析。

1 實 驗

1.1 儀器與試劑

島津LC-20AT液相色譜儀，N2000工作站；Sartorius CP225D十萬分之一電子天平；KQ-300VDE超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司。

醋酸銨，HPLC，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；醋酸，HPLC，美國Tedia公司；乙腈，HPLC，上海強順化學(xué)試劑有限公司；縮二脲標樣，純度>99.0%，日本TCI公司；尿素標樣，純度>99.0%，北京百靈威科技有限公司；實驗用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Venusil HILIC(4.6 × 150 mm，5 μm)，艾杰爾科技有限公司；檢測波長：195 nm；流動相：乙腈：10 mmol/L醋酸銨水溶液(pH=5)=95：5(V/V)，流速1.0 mL/min，進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃。

“用曲的話來說，這難道不是老公的義務(wù)嗎？但這打死也不能說。Y反復(fù)強調(diào)，S跟她說過的，跟曲的婚姻沒有愛情，也幾乎沒有性生活，曲對S沒有熱情，而S也不渴念她的身體——就是因為這句話，Y才決定跟他好的，否則，她還搞什么呢，絕不會讓S碰她?！?/p>

1.3 溶液的配制

1.3.1 標準溶液的配制

稱取縮二脲標樣0.05 g(準確至0.0002 g)于100 mL容量瓶中，加入適量流動相，超聲振蕩10 min，使標樣完全溶解后冷卻至室溫，定容，搖勻備用。分別移取上述溶液0.5 mL、0.8 mL、1.3 mL、1.8 mL、2.5 mL于10 mL容量瓶中，以流動相稀釋定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

移取100 μL樣品溶液，于10 mL容量瓶中，加入適量流動相定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后備用。

1.4 測定

1.4.1 標準曲線的繪制

在1.2所述色譜條件下，每個濃度的標樣重復(fù)進樣3次，以縮二脲含量為橫坐標，三次平行測定的峰面積平均值為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性回歸方程。

1.4.2 試樣的測定

將1.3.2中配制的樣品溶液，在與標準曲線相同的條件下進行試樣測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的篩選

分別選用Venusil HILIC(E)(2.1 m × 150 mm，5 μm)及Venusil HILIC (4.6 m ×150 mm，5 μm)進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：前者不能實現(xiàn)基線分離；后者分離效果較好，實現(xiàn)了縮二脲及尿素的有效分離，且色譜峰尖銳。其色譜圖如圖1所示。

圖1 使用不同色譜柱縮二脲、尿素液相色譜圖

2.2 檢測波長的確定

對同一樣品，在190～210 nm波長范圍內(nèi)選取5個點分別進行實驗，結(jié)果如圖2所示。從圖2中可看出，檢測波長為195 nm時，縮二脲及尿素峰面積最大，因此，選擇195 nm為檢測波長。

圖2 檢測波長和峰面積的關(guān)系

2.3 流動相的選擇

為達到較好的分離度，從而滿足定量分析的要求，本文分別考察了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-10 mmol/L醋酸銨水溶液(醋酸調(diào)pH=6.5～4.0)等不同流動相體系對分離效果的影響。結(jié)果表明，采用乙腈:10 mmol/L醋酸銨水溶液(pH=5)=95：5(V/V)的流動相體系時，尿素、縮二脲的分離效果較好。

2.4 線性關(guān)系與檢出限

配制5個不同濃度的縮二脲標準溶液，按1.2所述色譜操作條件，測定相應(yīng)的峰面積，以縮二脲含量為橫坐標，峰面積為縱坐標做圖，其線性方程為y=25909x+56065，相關(guān)系數(shù)R=0.9998。取適量縮二脲標準溶液，采用逐級稀釋法，按進樣后所得譜圖中縮二脲色譜峰信噪比S/N=3計算方法的檢出限，S/N=10計算方法的定量限，得出檢出限為0.05 μg/mL，定量限為0.17 μg/mL。

2.5 回收率及精密度的測定

在已知縮二脲含量的車用尿素樣品溶液中，分別加入8.18 μg/mL、24.53 μg/mL和39.88 μg/mL的縮二脲標準溶液，每個濃度樣品重復(fù)測定5次，結(jié)果如表1所示。由實驗結(jié)果可見，樣品的回收率為98.53%～100.88%，相對標準偏差為0.42%～0.58%。

表1 回收率與精密度(n=5)

3 結(jié) 論

隨著相關(guān)機動車排放法規(guī)的進一步實施，車用尿素作為柴油車SCR系統(tǒng)的尾氣凈化液的應(yīng)用日益廣泛。本文采用對強極性、強親水性化合物具有良好保留效果的HILIC柱，建立了車用尿素產(chǎn)品中微量縮二脲的液相色譜定量方法。通過對流動相條件進行優(yōu)化，使尿素與縮二脲達到良好的分離效果。該方法避免了高濃度緩沖鹽的使用對儀器所造成的影響，且操作簡單、快速、重現(xiàn)性好，準確度高，是車用尿素產(chǎn)品質(zhì)量檢測的一種理想分析方法。

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Determination of Biuret in Automobile Urea by High Performance Liquid Chromatography*

SUNWen,LIMei-hua,LUOYong,SHENGLi-yan,PANJie

(Shanghai Research Institute of Chemical Industry, Shanghai 200062, China)

A reversed-phase HPLC method was established to determine the biuret content in automobile urea. The Venusil HILIC column was used and the wavelength was 195 nm, using methyl cyanide-10 mmol/L ammonium acetate solution as mobile phase. This method had high sensitivity and precision with a linear correlation of 0.9998, the minimum determination concentration of 0.05 μg/mL, the minimum quantitation concentration of 0.17 μg/mL, the recovery of standard addition of 98.53%～100.88%, and the RSD values of 0.42%～0.58%. The results showed that it was characterized by good precision and accuracy, simple operation, fast, good reproducibility and higher accuracy. So it was a better method in determination of biuret in urea.

urea; biuret; high performance liquid chromatography

上海市科委優(yōu)秀技術(shù)帶頭人計劃(12XD1421700)。

孫雯(1983-)，女，工程師，主要從事儀器分析與研發(fā)工作。

李美華(1968-)，女，高級工程師，主要從事儀器分析與研發(fā)工作。

O657.7+2

A

1001-9677(2016)020-082-03