朱 江，何津祥，何津春

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院：1.中心實驗室；2.放射治療中心；3.醫(yī)學(xué)檢驗中心，蘭州 730000)

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·論 著·

CD4+T細胞與放療前后腫瘤標志物變化

朱 江1，何津祥2，何津春3△

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院：1.中心實驗室；2.放射治療中心；3.醫(yī)學(xué)檢驗中心，蘭州 730000)

目的 探討晚期無法手術(shù)的乳腺癌患者放射治療前后癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖鏈抗原125(CA125)、糖鏈抗原15-3(CA15-3)的變化，探討CD4+T細胞對患者放療效果。 方法 采用化學(xué)發(fā)光免疫分析方法檢測38例晚期乳腺癌患者和30例健康者血清CEA、AFP、CA125、CA15-3水平；使用流式細胞儀檢測外周血CD3+、CD4+、CD8+T百分含量及CD4+/CD8+比值。結(jié)果 CD4+T百分含量正常組放療后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平低于放療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD4+T百分含量異常組放療后CEA、CA15-3低于放療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 晚期乳腺癌患者，正常組CD4+T百分含量放療前后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平有顯著差異，該類患者具有放療臨床效果。

乳腺癌； CD4+T細胞； 癌胚抗原; 甲胎蛋白; 糖鏈抗原125; 糖鏈抗原15-3

乳腺癌目前已成為威脅女性健康的常見腫瘤[1-2]。乳腺癌發(fā)生時，機體的免疫功能和腫瘤標志物都發(fā)生改變，其變化水平與乳腺癌的發(fā)展密切相關(guān)[3-5]。臨床放射治療是乳腺癌常用的方法之一，放療提高患者的總生存率，但會導(dǎo)致機體免疫功能進一步惡化[6-7]?，F(xiàn)對CD4+T百分含量正?；虍惓r與腫瘤標志物[癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖鏈抗原125(CA125)、糖鏈抗原15-3(CA15-3)]的相關(guān)性，探討晚期無法手術(shù)的乳腺癌患者放療前后各指標水平的變化，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009年1月至2013年5月該院放射治療中心收治的38例住院乳腺癌患者，年齡28～68歲，中位年齡48歲；均為晚期患者，已無手術(shù)指證，故放療前未接受過手術(shù)治療；臨床診斷均經(jīng)病理證實(浸潤性導(dǎo)管癌36例，浸潤性小葉癌2例)；均無其他系統(tǒng)惡性腫瘤，無嚴重心、肝、腎、肺等疾?。粺o免疫系統(tǒng)疾病，放療前未使用免疫抑制劑；放療均有效果(放療有效時，CT提示乳腺癌塊的影像有改變，即在原腫塊部位形成瘢痕結(jié)節(jié))。健康對照為該院體檢健康女性30例，年齡33～68歲，中位年齡45歲；無免疫系統(tǒng)疾病；無其他系統(tǒng)惡性腫瘤；無嚴重心、肝、腎、肺等重要臟器疾病。

1.2 儀器與試劑 美國Beckman Coulter公司EPICS-XL流式細胞儀和Q-PREP全血自動制備儀；北京科美生物技術(shù)有限公司CHEMLIN 100型半自動化學(xué)發(fā)光儀。單克隆抗體CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE、IgG1 FITC/IgG1 PE/IgG1 PC5購自聯(lián)科生物公司；CEA、AFP、CA125、CA15-3化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒，購自北京科美生物技術(shù)有限公司。

1.3 實驗方法 (1)標本采集：同一患者放療前2～3 d及放療后2～3周分別抽取EDTA抗凝血2 mL用于T細胞亞群檢測，同時抽取全血2 mL分離血清后用于CEA、AFP、CA125、CA15-3的檢測。(2)T細胞亞群檢測：按文獻[8]方法進行操作。(3)腫瘤標志物檢測：CEA、AFP、CA125、CA15-3按試劑盒說明書嚴格操作。(4)參考范圍：CEA為 0～10.0 ng/mL；AFP為 0～10.0 ng/mL；CA125為0～35.0 U/mL；CA15-3為 0～30.0 U/mL。CD3+T百分含量為61.1%～77%；CD4+T百分含量為25.8%～41.6%；CD8+T百分含量為18.1%～29.6%；CD4+/CD8+T細胞比值為0.98～1.94。

1.5 病例分組 (1)按照放療前CD4+T百分含量是否超出正常參考范圍(25.8%～41.6%)，將38例乳癌患者分為CD4+T正常組和CD4+T異常組。CD4+T正常組患者23例，CD4+T百分含量為25.8%～41.6%；CD4+T異常組患者15例，CD4+T百分含量小于25.8%或大于41.6%。(2)按照放療前CD4+/CD8+比值是否超出正常參考范圍(0.98～1.94)，將38例乳癌患者分為CD4+/CD8+比值正常組和CD4+/CD8+比值異常組。CD4+/CD8+比值正常組患者18例，CD4+/CD8+比值為0.98～1.94；CD4+/CD8+比值異常組患者20例，CD4+/CD8+比值小于 0.98或大于1.94。

2 結(jié) 果

2.1 乳腺癌患者放療前后T細胞亞群結(jié)果比較 放療后CD3+、CD4+T百分含量下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD8+T百分含量放療前后比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 CD4+T正常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較 CD4+T正常組患者放療后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3 CD4+T異常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較 CD4+T異常組患者放療后CEA、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；AFP和CA125水平與放療前比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

2.4 CD4+/CD8+比值正常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較 CD4+/CD8+比值正常組患者放療后CEA、AFP、CA15-3含量下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；CA125含量放療后較放療前降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

2.5 CD4+/CD8+比值異常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較 CD4+/CD8+比值異常組患者放療后CEA、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；AFP 和CA125水平與放療前比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表1 乳腺癌患者放療前后T細胞亞群結(jié)果比較±s)

注：與健康對照組比較，aP<0.01，bP<0.05；與放療前比較，cP<0.05。

表2 CD4+T正常組患者放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較±s)

表3 CD4+T異常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較±s)

表4 CD4+/CD8+比值正常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較±s)

表5 CD4+/CD8+比值異常組放療前后腫瘤標志物結(jié)果比較±s)

3 討 論

乳腺癌發(fā)生時機體有免疫反應(yīng)活性的CD4+T細胞減少，而有免疫抑制功能的 CD8+T細胞升高，引起免疫功能失調(diào)， CD4+/CD8+比值降低[9-10]。放療過程中，放射線在殺傷腫瘤細胞的同時，也殺傷免疫細胞，導(dǎo)致免疫功能進一步紊亂[11-12]。乳腺癌致使蛋白的糖基化和糖鏈結(jié)構(gòu)發(fā)生異常改變，使腫瘤標志物水平升高，而放射治療殺傷癌細胞時，會抑制乳腺癌腫瘤細胞生長，造成腫瘤標志物分泌異常減少[13]。

CD4+T細胞是免疫應(yīng)答的主要反應(yīng)細胞，其協(xié)調(diào)B淋巴細胞分化產(chǎn)生抗體，CD4+T細胞含量變化可反映機體抗腫瘤免疫功能的變化；CD8+T則抑制抗體的合成、分泌及T細胞增殖。CD4+T和CD8+T動態(tài)穩(wěn)定地維持機體的正常免疫應(yīng)答。本研究CD4+T細胞百分含量超出正常參考范圍的患者，放療后CEA和CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；而CD4+T細胞百分含量在正常參考范圍的患者，放療后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。提示晚期乳腺癌患者，CD4+T百分含量正常組放療前后CEA、AFP、CA125、CA15-3結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，該組患者放療效果更好。

CD4+T百分含量在正常參考范圍時，CEA、AFP、CA125、CA15-3水平下降明顯，推測可能由于機體免疫功能較好時，放療時放射線抑制腫瘤細胞異常糖基化過程和抑制糖鏈結(jié)構(gòu)異常改變的作用更明顯，由于糖鏈結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，放射線抑制作用的這種分子機制還有待于進一步研究。CD4+/CD8+比值在正常生理狀態(tài)下維持一種動態(tài)平衡，患乳腺癌時細胞免疫功能異常，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值超出正常范圍，該失衡狀態(tài)下進行放療會引起細胞免疫的抗腫瘤作用進一步被減弱，不利于放療。

綜上所述，乳腺癌患者放射治療時同時觀察T細胞亞群和血清腫瘤標志物(CEA、AFP、CA125、CA15-3)變化，尤其需密切監(jiān)測CD4+T百分含量在放療前后的變化，給予患者提高免疫力的藥物治療。為達到更好的放射治療效果，應(yīng)該在乳腺癌患者CD4+T百分含量穩(wěn)定在正常參考范圍時再進行放射治療。

[1]中國女醫(yī)師協(xié)會臨床腫瘤學(xué)專業(yè)委員會.中國進展期乳腺癌共識指南(CABC 2015)[J].癌癥進展,2015,13(3):223-245.

[2]郭宏艷,呂苗,楊國嶸,等.乳腺增生及乳腺癌中Claudin-1、平滑肌肌動蛋白、雌激素受體和nm-23的表達[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2010,36(1):5-8.

[3]Lee JS,Park S,Park JM,et al.Elevated levels of serum tumor markers CA 15-3 and CEA are prognostic factors for diagnosis of metastatic breast cancers[J].Breast Cancer Res Trea,2013,141(3):477-484.

[4]Li CH,Kuo WH,Chang WC,et al.Activation of regulatory T cells instigates functional down-regulation of cytotoxic T lymphocytes in human breast cancer[J].Immunol Res,2011,51(1):71-79.

[5]Wang ZK,Yang B,Liu H,et al.Regulatory T cells increase in breast cancer and in stage Ⅳ breast cancer[J].Cancer Immunol Immunother,2012,61(6):911-916.

[6]Tsuchiya K,Kinoshita R,Shimizu S,et al.Dosimetric comparison between intensity-modulated radiotherapy and standard wedged tangential technique for whole-breast radiotherapy in Asian women with relatively small breast volumes[J].Radiol Phys Technol,2014,7(1):67-72.

[7]Sekiguchi K,Ogawa Y,Sanuki N,et al.The Japanese Breast Cancer Society clinical practice guideline for radiotherapy of breast cancer[J].Breast Cancer,2015,22(1):49-58.

[8]朱江,張曉微,顏麗,等.乳腺癌患者放療前后外周血T細胞亞群變化的研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(11):1482-1483.

[9]曹林林,劉穎男,鄭德明,等.乳腺癌患者手術(shù)前后T淋巴細胞亞群變化的實驗研究[J].中國實驗診斷學(xué),2013,17(1):113-114.

[10]梁新強,劉海洲,利基林,等.乳腺癌患者外周血T淋巴細胞和NK細胞水平分析[J].廣西醫(yī)學(xué),2013,35(2):132-134.

[11]吳大鵬,賈宗嶺,蔣會娟,等.放射損傷對小鼠外周血T淋巴細胞亞群的影響[J].河南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2011,30(2):108-109.

[12]杜麗,馬瓊,崔玉芳,等.γ射線對小鼠調(diào)節(jié)性T細胞功能及相關(guān)細胞因子的影響及其意義[J].中國科學(xué)(生命科學(xué)),2011,41(10):951-957.

[13]李煒,吳士良.基于糖鏈結(jié)構(gòu)的乳腺癌研究[J].生命化學(xué),2010,30(5):695-698.

The relationship of tumor marker and CD4+T cells before and after radiotherapy on patients

ZHUJiang1，HEJinxiang2，HEJinchun3△

(1.CentralLaboratory；2.RadiotherapyCenter；3.MedicalTestingCenter，theFirstHospitalofLanzhouUniversity，Lanzhou，Gansu730000,China)

Objective The study is aimed to research into the effect of CD4+T cells on patients with severe advanced breast cancer under radiotherapy that cannot be treated with surgery,by observing the variation of CEA,AFP,CA125 and CA15-3 before and after the radiotherapy applied.Methods We identified the CEA，AFP，CA125 and CA15-3 densities in blood serum for a group of 38 patients with advanced breast cancer and a group of 30 normal people with chemiluminescence immune assay,and we determined the CD3+，CD4+，CD8+T percentage in peripheral blood and the ratio of CD4+/CD8+with flow cytometry.Results The group with normal CD4+T percentage went through a decreased in CEA，AFP，CA125，CA15-3 densities after the radiotherapy,and the variation was significant(P<0.05).The group of people with abnormal CD4+T percentage go through CEA，CA15-3 densities decrease after the radiotherapy,and the variation was statistically significant(P<0.05).Conclusion For those with advanced breast cancer and cannot be treated with surgery,the influence of radiotherapy on CEA，AFP，CA125，CA15-3 densities is significant in the group of patients with CD4+T percentage,adn has better therapeutic effect.

breast cancer; CD4+T cell； CEA; AFP; CA125; CA15-3

朱江，男，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤分子生物學(xué)研究?！?/p>

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.010

A

1673-4130(2016)20-2828-03

2016-04-16

2016-06-21)