王路平，王文成，田 榮，姜啟曉，王春波，隋忠國（1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，山東青島 6600；.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部，山東青島 66071；.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海 004）

紫肉甘薯藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王路平1＊，王文成2，田 榮3，姜啟曉2，王春波2，隋忠國1#（1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，山東青島 266003；2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部，山東青島 266071；3.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433）

目的：建立紫肉甘薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：檢測藥材的顯微特征；采用薄層色譜法（TLC）對藥材進行定性鑒別；測定藥材水分、灰分、重金屬和浸出物量；采用高效液相色譜法測定藥材中氯化矢車菊素的含量：色譜柱為Alltima C18，流動相為乙腈-0.1%三氟乙酸溶液（80∶20，V/V），流速為1.0 ml/min，檢測波長為538 nm，柱溫為30℃。結(jié)果：藥材粉末顯微鑒別圖譜清晰。紫肉甘薯的TLC圖斑點清晰，分離良好。藥材水分為8.5%～11.0%，總灰分為2.0%～2.9%，鉛含量＜5 ppm，浸出物為15.6%～22.3%。氯化矢車菊素檢測進樣量線性范圍為0.043～0.215μg（r=0.999 8）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率為95.50%～99.65%（RSD=1.35%，n=9）。結(jié)論：該研究所建標(biāo)準(zhǔn)可用于紫肉甘薯的質(zhì)量控制。

紫肉甘薯；氯化矢車菊素；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

紫肉甘薯Solanum tuberdsm為栽培甘薯中一個特殊的品種類型，其塊根中富含具有顯著生理活性的花青素，因而呈現(xiàn)深紫色［1］，又名紫甘薯、紫心甘薯。甘薯Ipomoea batatas（L.）Lam為旋花科甘薯屬蔓生性草本植物，性甘、平，無毒；歸脾、腎經(jīng)；能補中和血、益氣生津。由于近年來對紫肉甘薯的藥用價值不斷深入研究，其在臨床應(yīng)用和新藥研發(fā)領(lǐng)域獲得了廣闊的發(fā)展空間。為了保證藥材和制劑的質(zhì)量穩(wěn)定和安全有效，筆者首次根據(jù)2015年版《中國藥典》（四部）對紫肉甘薯藥材進行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。

1 材料

1.1 儀器

2695型高效液相色譜（HPLC）儀，包括2487紫外檢測器、717自動進樣器（美國Waters公司）；色譜工作站（美國Allchrom公司）；AE240型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；SB3200型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）；YOKO-ZS型薄層數(shù)碼成像儀（武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司）。

1.2 試劑

氯化矢車菊素對照品（北京譜析科技有限公司，批號：SS0610，純度≥98%）；紫肉甘薯對照藥材（青島農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

筆者收集青島各種植基地的紫肉甘薯藥材樣品共10批（見表1），經(jīng)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院中藥研究室孫敬勇研究員鑒定為真品。

表1 紫肉甘薯藥材來源Tab 1 Origin of S.tuberdsm

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微特征鑒別

取樣品適量，將其粉碎后過40目篩，得紫褐色粉末，再以水合氯醛制成粉末顯微片在100倍光學(xué)顯微鏡下進行觀察。結(jié)果可見，網(wǎng)紋導(dǎo)管呈粉紅色，直徑可達30 μm；草酸鈣簇晶呈粉紅色，直徑為5～10 μm；淀粉粒呈透明狀，單粒呈圓形、盔帽形或類三角形，直徑為2～12 μm，臍點呈點狀、人字狀、短縫狀及星狀，而大?？梢妼蛹y；淀粉粒復(fù)粒由2～3分粒組成，詳見圖1。

圖1 顯微特征鑒別結(jié)果A.導(dǎo)管；B.簇晶；C.淀粉粒Fig 1 Identification results of microscopic characteristicsA.catheter；B.crystal clusters；C.starch grains

2.2 薄層色譜（TLC）鑒別

取樣品粉末1 g，加甲醇10 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取紫肉甘薯對照藥材1 g，按供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。按TLC法［2015年版《中國藥典》（四部）］［2］試驗，吸取上述2種溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰乙酸-水（4∶1∶1，V/V/V）為展開劑，在溫度為25℃、相對濕度為70%的條件下展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱到100℃后，斑點清晰顯色，分別置于日光和紫外光燈（365 nm）下檢視［3］。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，詳見圖2。

圖2 薄層色譜圖1～5、7～11.供試品；6.對照藥材Fig 2 TLC chromagrams1-5，7-11.test samples；6.control medicinal herb

2.3 水分和總灰分檢測［2］

參照2015年版《中國藥典》（四部）水分測定法第一法烘干法和灰分測定法測定樣品的水分和總灰分。根據(jù)測定結(jié)果，擬定紫肉甘薯藥材中水分不得過15.0%，總灰分不得過4.0%，詳見表2。

表2 樣品中水分、總灰分、鉛和浸出物檢測結(jié)果Tab 2 Determination results of moisture，total ash，Pb and extract

2.4 重金屬檢測［2］

參照2015年版《中國藥典》（四部）重金屬檢查法第二法檢查樣品中重金屬。根據(jù)檢測結(jié)果，擬定紫肉甘薯藥材中鉛的含量應(yīng)低于5 ppm，詳見表2。

2.5 浸出物檢測［2］

參照2015年版《中國藥典》（四部）浸出物測定法熱浸法進行檢測。根據(jù)檢測結(jié)果，擬定紫肉甘薯藥材中浸出物的含量不得少于11.0%，詳見表2。

2.6 氯化矢車菊素含量測定［4］

2.6.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%三氟乙酸溶液（80∶20，V/V）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：538 nm；柱溫：30℃。在上述色譜條件下，理論板數(shù)以氯化矢車菊素峰計≥5 000［5-7］；各成分基線分離良好，分離度＞1.5，詳見圖3。

圖3 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.氯化矢車菊素Fig 3 HPLC chromagramsA.reference substance；B.test sample；1.oxidized cyanidin

2.6.2 對照品溶液的制備 精密稱取氯化矢車菊素對照品1.72 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，作為對照品貯備液（質(zhì)量濃度為0.172 mg/ml）。精密量取上述對照品貯備液5 ml，置于100 ml量瓶中，加鹽酸甲醇定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.008 6 mg/ml的對照品溶液。

2.6.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末約1 g，精密稱定，置于燒瓶中，精密加入鹽酸甲醇20 ml，精確稱量后90℃下水浴加熱水解1 h，取出，冷卻后再次精密稱量，用鹽酸甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻后濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.6.4 線性關(guān)系考察［8-11］分別精密量取“2.6.2”項下對照品溶液5、10、15、20、25μl，按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以氯化矢車菊素進樣量（x，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得氯化矢車菊素回歸方程為y=2 879 486x+3 733（r=0.999 8）。結(jié)果表明，氯化矢車菊素檢測進樣量線性范圍為0.043～0.215μg。

2.6.5 精密度試驗 取“2.6.2”項下對照品溶液適量，按“2.6.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，氯化矢車菊素峰面積的RSD=0.77%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6.6 穩(wěn)定性試驗 取“2.6.3”項下供試品溶液（編號：7）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8 h時按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，氯化矢車菊素峰面積的RSD= 0.81%（n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.7 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品（編號：7）適量，按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算平均含量。結(jié)果，氯化矢車菊素的含量平均值為0.208 mg/g，RSD=1.15%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.6.8 加樣回收率試驗 取已知含量樣品（編號：7）適量，共9份，分別加入一定質(zhì)量的氯化矢車菊素對照品，按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率試驗結(jié)果（n=9）Tab 3 Results of recovery tests（n=9）

2.6.9 樣品含量測定 取10個編號的樣品各適量，分別按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，計算樣品含量，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果（n=2，mg/g）Tab 4 Results of contents determination of samples（n=2，mg/g）

3 討論

紫肉甘薯自20世紀(jì)90年代經(jīng)日本引入我國后，在山東全省都有廣泛種植，本試驗中的紫肉甘薯藥材均來自于山東青島的各種植基地。

進行粉末顯微鑒定時筆者發(fā)現(xiàn)草酸鈣簇晶和網(wǎng)紋導(dǎo)管均呈粉紅色，這是由于紫肉甘薯中富含花青素的原因，而淀粉粒為透明狀則是因為經(jīng)過稀釋后制備，因此不顯色。為了判斷紫肉甘薯藥材的真?zhèn)?，筆者又通過TLC法對其進行了定性鑒別。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣品1～5、7～11的顯色位置與對照藥材6的顯色位置有相同顏色的斑點，進一步證明了供試品的真實性。

紫肉甘薯中含有大量的花青素類物質(zhì)，其主要成分為矢車菊素和芍藥素及極少量的天竺葵色素，以糖苷化后的酰基化衍生物形式存在，而經(jīng)過酸水解后會生成花青素苷元的鹽酸鹽。花青素類化合物既為有效成分，又為指標(biāo)成分。因此，氯化矢車菊素含量的高低就成為衡量紫肉甘薯質(zhì)量的一個非常重要的指標(biāo)［12-16］。測定氯化矢車菊素含量時，在供試品溶液的制備中，對提取的酸濃度：（1→10）、（2→10）、（3→10）、（4→10）鹽酸甲醇；提取時間：0.5、1、2 h；提取溫度：70、80、90、100℃進行了考察，確定最終的供試品制備方法為取1 g紫肉甘薯藥材粉末，加入20 ml鹽酸甲醇（3→10），在90℃的水浴中加熱1 h。為了驗證此質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性和可行性，筆者又進行了方法學(xué)的考察，證明此方法操作方便、專屬性強、穩(wěn)定性好、重復(fù)性佳、結(jié)果準(zhǔn)確。本研究首次制定了紫肉甘薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為其質(zhì)量控制的更深入研究提供參考。

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（編輯：張 靜）

Study on the Quality Standard of Solanum tuberdsm

WANG Luping1，WANG Wencheng2，TIAN Rong3，JIANG Qixiao2，WANG Chunbo2，SUI Zhongguo1（1.Dept.of Pharmacy，Affiliated Hospital of Qingdao University，Shandong Qingdao 266003，China；2.Medical College of Qingdao University，Shandong Qingdao 266071，China；3.School of pharmacy，F(xiàn)udan University，Shanghai 200433，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Solanum tuberdsm.METHODS：The microscopic characteristics were detected；TLC was used for qualitative identification；moisture，ash，heavy metals and the amount of extract were determined；HPLC was conducted for content determination of oxidized cyanidin：the column was Alltima C18with mobile phase of acetonitrile-0.1%trifluoroacetic acid（80∶20，V/V）at a flow rate of 1.0 ml/min，detection wavelength was 538 nm，column temperature was 30℃.RESULTS：It showed clear microscopic identification map.S.tuberdsm TLC had clear spots and well separated.The water content was 8.5%-11.0%；total ash was 2.0%-2.9%；Pb was lower than 5 ppm and alcohol-soluble extracts was 15.6%-22.3%.The linear range of oxidized cyanidin was 0.043-0.215μg（r=0.999 8）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2.0%；recovery was 95.50%-99.65%（RSD=1.35%，n=9）.CONCLUSIONS：The established method can be used for the quality control of S.tuberdsm.

Solanum tuberdsm；Oxidized cyaniding；TLC；HPLC；Quality standard

R927

A

1001-0408（2016）30-4288-03

2016-01-17

2016-02-15）

＊主管藥師，碩士研究生。研究方向：制藥工程。E-mail：2585323086@qq.com

#通信作者：主任藥師，碩士生導(dǎo)師。研究方向：臨床藥學(xué)、藥事管理。電話：0532-82911277。E-mail：sz_guo@tom.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.30.36