杜海燕韓俊偉

（1.新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心，河南新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南新鄉(xiāng) 453000）

一例豬偽狂犬病和葡萄球菌混合感染的診斷

杜海燕1韓俊偉2

（1.新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心，河南新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南新鄉(xiāng) 453000）

豬偽狂犬病是偽狂犬病毒引起的急性傳染病，其主要特征為病豬體溫升高，仔豬多出現(xiàn)神經(jīng)障礙，妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎等癥狀，病豬于局部皮膚呈現(xiàn)持續(xù)性的劇烈瘙癢。而豬葡萄球菌病是由豬葡萄球菌引起豬的細(xì)菌性疾病，以斷奶仔豬多發(fā)，有明顯的接觸性傳染性，無明顯季節(jié)性，與環(huán)境因素關(guān)系密切。上述兩種病地域分布廣泛，對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重。2016年2月，我實驗室收到某豬場送檢病豬，并進(jìn)行實驗室診斷，確診為豬偽狂犬與葡萄球菌混合感染，具體情況如下。

豬偽狂犬病；混合感染；實驗診斷

1 流行病學(xué)調(diào)查

某養(yǎng)豬戶存欄生豬200頭，飼養(yǎng)母豬16頭，2016年1月，相繼有5頭母豬生產(chǎn)，共產(chǎn)仔豬72頭，其中弱豬5頭，死胎9頭，仔豬出生后7日齡左右開始發(fā)病，體溫升至41℃，病豬消瘦、脫水、體質(zhì)較弱，精神沉郁，吃奶少或不吃，拉黃白色、黃色或灰色糞便；部分病豬耳部、眼睛周圍、腹部出現(xiàn)紅斑，然后形成微黃水泡破潰，覆蓋在皮膚上一層棕灰色結(jié)痂。有些病豬出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈、運(yùn)動失調(diào)等癥狀，病程較短，共發(fā)病36頭，死亡14頭。該豬場多方面進(jìn)行治療，但無明顯效果。

2 剖檢變化

送檢病死豬剖檢觀察，頜下淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)等外周淋巴結(jié)腫大、出血，肝臟表面點狀出有黃白色壞死點，腎臟點狀出血，脾、胃、肺、腸道大量出血并有氣體，心臟充血并且積液增多，腦膜充血水腫。

3 實驗室診斷

3.1 細(xì)菌分離鑒定

采集送檢病死豬的肝臟、脾臟、腎臟及淋巴結(jié)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。病料接種于鮮血瓊脂平板后，放置培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24h，在鮮血培養(yǎng)基上長出透明、圓形、微小、溶血的菌落，經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢，為革蘭氏陽性球菌，挑取單個優(yōu)勢菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，并用純培養(yǎng)物作生化試驗，初步確定為葡萄球菌。

3.2 藥物敏感試驗

取上述細(xì)菌純培養(yǎng)物，均勻涂于鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，對上述細(xì)菌純培養(yǎng)物進(jìn)行抗生素敏感試驗，結(jié)果見表。

3.3 豬偽狂犬病毒核酸檢測

3.3.1 DNA提取 分別取病豬的腦組織（樣品1）、淋巴結(jié)組織（樣品2）和脾臟組織（樣品3）研磨，反復(fù)凍融3次，8000rpm離心10min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.3.2 PCR擴(kuò)增 采用PCR-熒光探針法對待檢樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增。每個樣本反應(yīng)體系PRV qPCR MIX 20μl，Taq酶系1μl，待測樣品4μl，同時設(shè)陽性和陰性質(zhì)控品。標(biāo)記熒光基團(tuán)種類：報告基團(tuán)FAM，淬滅基團(tuán)為TAMRA。擴(kuò)增條件：94℃-2min；94℃30s，55℃45s（采集熒光），40個循環(huán)。

3.3.3 結(jié)果分析 反應(yīng)結(jié)束后，使用手動調(diào)整閾值使陰性質(zhì)控品Ct值在40以上，Ct值小于35個循環(huán)的為陽性；Ct值在35～40個循環(huán)之間的需要重復(fù)試驗，重復(fù)試驗之后，如果Ct值仍然在35～40個循環(huán)之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：陰性質(zhì)控品：Ct值顯示UNDET或者Ct40，即結(jié)果為陰性；陽性質(zhì)控品：CT值小于30，且呈標(biāo)準(zhǔn)S型擴(kuò)增曲線。結(jié)果見下圖。

豬偽狂犬病毒核酸熒光PCR檢測結(jié)果

分離細(xì)菌藥物敏感性試驗結(jié)果

對送檢病料的豬偽狂犬病毒核酸檢測結(jié)果由圖可見：陽性對照Ct值為16.21，陰性對照Ct值為UNDET，待檢樣品腦組織（樣1）Ct值為28.03，淋巴組織（樣2）Ct值為31.12，脾臟組織（樣3）Ct值為32.00，結(jié)果表明所檢測樣品中豬偽狂犬病毒核酸為陽性，說明該病死豬群存在豬偽狂犬病毒的感染。

4 結(jié)果與分析

通過流行病學(xué)、臨床癥狀、病理剖檢變化、實驗室檢查等試驗結(jié)果，初步確診為病死豬可能感染了豬偽狂犬病病毒，繼發(fā)葡萄球菌感染所致。建議該豬場對發(fā)病豬或疑似病豬及時進(jìn)行隔離或淘汰；使用豬偽狂犬病弱毒疫苗對豬群進(jìn)行強(qiáng)化免疫，用豬基因干擾素按要求對病豬進(jìn)行肌肉注射；建立健全豬群免疫監(jiān)測制度，定期進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測，并依據(jù)抗體監(jiān)測結(jié)果，適時免疫和采取其他相應(yīng)措施，防止疫病發(fā)生。嚴(yán)格控制葡萄球菌繼發(fā)感染，選用該菌敏感性高的藥物（如腸道康、舒坦西林和東方瀉立停）進(jìn)行治療，輪換使用敏感藥物，使用1%高錳酸鉀溶液清洗病豬患部，再涂上龍膽紫，2次/d，連用3d。同時，做好豬群進(jìn)行補(bǔ)液、補(bǔ)糖等對癥治療。要加強(qiáng)豬群飼養(yǎng)管理，建立獸醫(yī)衛(wèi)生防疫制度，在預(yù)防接種的同時，要結(jié)合搞好豬場環(huán)境衛(wèi)生、嚴(yán)格消毒等綜合防治措施，避免疫病的發(fā)生。

［1］ 馮俊亮，劉玉民，付永增.豬偽狂犬病與葡萄球菌病混合感染的診治［J］.湖北畜牧獸醫(yī)，2010，（4）：36-36.

杜海燕（1983-），女，助理獸醫(yī)師，主要從事動物疫病診斷與防治工作，現(xiàn)工作于新疆市動物疫病預(yù)防控制中心。