謝佳蓉，涂家生，孫春萌（中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，南京　210009）

鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物鼻用溫敏凝膠的制備及黏附效果評(píng)價(jià)Δ

謝佳蓉＊，涂家生#，孫春萌（中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，南京210009）

目的：制備鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物及其鼻用溫敏凝膠，并評(píng)價(jià)其黏附效果。方法：采用飽和水溶液法制備鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物，冷配法制備包合物的鼻用溫敏凝膠，以膠凝溫度篩選凝膠基質(zhì)和生物黏附劑；采用靛藍(lán)胭脂紅染色法評(píng)價(jià)所制制劑與鹽酸非索非那定混懸液在大鼠鼻腔內(nèi)的滯留時(shí)間。結(jié)果：所制包合物易溶于水，包合率為（86.0±2.7）%（n＝3）；凝膠基質(zhì)為16%的泊洛沙姆407，生物黏附劑為0.5%的透明質(zhì)酸鈉；所制包合物鼻用溫敏凝膠在大鼠鼻腔內(nèi)的滯留時(shí)間約為混懸液的2.8倍。結(jié)論：成功制得鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物鼻用溫敏凝膠，且其鼻腔內(nèi)黏附效果較好。

鹽酸非索非那定；磺丁基醚-β-環(huán)糊精；溫敏凝膠；鼻腔；黏附

變應(yīng)性鼻炎（Allergic rhinitis）是接觸過(guò)敏原后在鼻腔內(nèi)由免疫球蛋白E（IgE）介導(dǎo)的上呼吸道炎性病癥，主要有流鼻涕、打噴嚏、鼻塞、鼻癢四大臨床癥狀[1-3]。鹽酸非索非那定是第二代組胺H1受體拮抗藥特非那定的活性代謝產(chǎn)物，治療季節(jié)過(guò)敏性鼻炎比特非那定安全性高[4]。目前鹽酸非索非那定上市藥品中大部分為片劑與膠囊劑。鼻腔給藥系統(tǒng)是一種有效的給藥途徑，鼻用溫敏凝膠制劑可以避免首關(guān)效應(yīng)，還可以增加藥物在鼻腔內(nèi)的滯留時(shí)間，具有生物利用度高、依從性好等優(yōu)點(diǎn)，近些年已引起了廣泛的關(guān)注[5-6]。低吸收的藥物可以通過(guò)添加促滲劑或增加藥物鼻腔滯留時(shí)間來(lái)改善吸收[3]?；嵌』?β-環(huán)糊精的溶解度是β-環(huán)糊精的37倍，腎毒性和溶血性小，其包合物更有利于提高藥物生物利用度[7]。筆者將鹽酸非索非那定制備為磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物，再將其制備成鼻用溫敏凝膠，并評(píng)價(jià)其黏附效果。

1　材料

1.1儀器

752紫外分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）；ML-104電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；BT25S電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；85-1磁力攪拌器（上海司樂(lè)儀器有限公司）；KQ-250超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；FD-2A冷凍干燥器（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；DSC 204差示掃描量熱分析儀（德國(guó)Netzsch公司）；UPH-11-10T優(yōu)普系列超純水器（成都超純科技有限公司）

1.2藥品與試劑

鹽酸非索非那定原料藥（強(qiáng)生公司贈(zèng)予，批號(hào)：20130921；純度：99%）；磺丁基醚-β-環(huán)糊精（中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室自制，批號(hào)：20130523，取代度：7）；泊洛沙姆407（P407）、P188（德國(guó)BSAF公司，批號(hào)：WPMI605C、WPYG580B）；靛藍(lán)胭脂紅（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20141104）；低分子透明質(zhì)酸鈉（山東福瑞達(dá)生物化工有限公司，批號(hào)：0904162，分子質(zhì)量：11 000 Da）；聚賴氨酸（鄭州拜納佛生物工程股份有限公司）；無(wú)水乙醇（無(wú)錫市亞盛化工有限公司，批號(hào)：20150316）；水為純化水。

1.3動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠，♂，體質(zhì)量250～300 g，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)為SCXK（寧）2014-0001。

2　方法與結(jié)果

2.1包合物的制備

主客分子以摩爾比1∶1進(jìn)行包合。根據(jù)主分子磺丁基醚-β-環(huán)糊精和客分子鹽酸非索非那定的相對(duì)分子質(zhì)量分別為2 179和538.12[7]，得出原料藥與磺丁基醚-β-環(huán)糊精質(zhì)量比至少為1∶4（m/m），本試驗(yàn)設(shè)為1∶5（m/m）。采用飽和水溶液法[8]，用注射器吸取鹽酸非索非那定的無(wú)水乙醇溶液，緩慢滴入攪拌的磺丁基醚-β-環(huán)糊精飽和溶液中，滴加完成后繼續(xù)攪拌2 h，靜置12 h。將樣品在38旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，用一定量的水溶解黏稠物，經(jīng)0.45 μm濾器過(guò)濾，將過(guò)濾后的樣品冷凍干燥，得到白色固體產(chǎn)物。全過(guò)程避光操作。

2.2包合物結(jié)構(gòu)確證[5，9]

分別取適量的鹽酸非索非那定、磺丁基醚-β-環(huán)糊精及二者按1∶5混勻后的物理混合物和已制備的包合物，用差式掃描量熱分析法（DSC）檢測(cè)，檢測(cè)溫度為50～300，升溫速度為10/min。差式掃描熱分析曲線見圖1。

圖1　差式掃描熱分析曲線Fig 1　DSC analysis curves

由圖1所示，磺丁基醚-β-環(huán)糊精在260左右有吸熱峰；鹽酸非索非那定在199左右有吸熱峰；物理混合物中仍存在鹽酸非索非那定吸熱峰；而包合物中該峰消失，說(shuō)明已形成包合物。將凍干后的包合物樣品用水復(fù)溶后溶液澄清透明，證明包合物具有良好的溶解度。

2.3鹽酸非索非那定的含量測(cè)定

2.3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇將鹽酸非索非那定原料藥和磺丁基醚-β-環(huán)糊精分別溶于50%乙醇溶液中，用紫外分光光度計(jì)于200～900 nm進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。結(jié)果顯示，鹽酸非索非那定原料藥在220 nm有最大吸收波長(zhǎng)，磺丁基醚-β-環(huán)糊精幾乎沒有吸光度。同時(shí)參考美國(guó)藥典USP36-NF31[10]，確定鹽酸非索非那定的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。紫外吸收光譜圖見圖2。

圖2　紫外吸收光譜圖Fig 2　UV absorption spectrum

2.3.2專屬性試驗(yàn)用50%乙醇制備磺丁基醚-β-環(huán)糊精空白輔料溶液，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定紫外吸收。結(jié)果，磺丁基醚-β-環(huán)糊精空白輔料溶液在波長(zhǎng)220 nm下無(wú)紫外吸收，對(duì)藥物含量測(cè)定無(wú)干擾，方法專屬性良好。

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立取干燥后的鹽酸非索非那定原料藥，用50%乙醇制備成9.6、12.8、16.0、19.2、24.0 μg/ml系列質(zhì)量濃度的供試品溶液，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行最小二乘法線性回歸，得回歸方程為y＝25.868x+0.072 2（r2＝0.999 2），表明鹽酸非索非那定在質(zhì)量濃度9.6～24.0μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.4回收率試驗(yàn)在空白輔料中加入適量已干燥的鹽酸非索非那定，用50%乙醇制備成供試品溶液，取相當(dāng)于供試品溶液80%、100%、120%的濃度，平行3份，測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1　回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1　Results of recovery test

2.3.5精密度試驗(yàn)按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備19.2、16.0、12.8 μg/ml 3個(gè)質(zhì)量濃度的供試品溶液，每個(gè)濃度制備3份，連續(xù)測(cè)定5 d，考察日內(nèi)與日間精密度。結(jié)果，日內(nèi)（n＝3）和日間（n＝5）RSD均小于2%，表明精密度良好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備質(zhì)量濃度為16.0 μg/ml的供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12、24 h測(cè)定吸光度。結(jié)果，吸光度的RSD＝0.74%（n＝6），表明鹽酸非索非那定溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4包合率的測(cè)定[11]

精密稱量4 mg的包合物，溶于10 ml水中，過(guò)0.22 μm濾膜，轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，加10 ml乙醇，超聲破包后，用50%乙醇稀釋至刻度。精密移取4 ml于25 ml量瓶，用50%乙醇稀釋定容。在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算含量，按公式計(jì)算包合率＝X1/X0×100%，式中，X1為包合物中原料藥的量，X0為原料藥的總投藥量。結(jié)果，包合率為（86.0±2.7）%（n＝3）。

2.5鼻用溫敏凝膠的制備及處方篩選

采用冷配法[12]制備鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物鼻用溫敏凝膠。稱取總量0.5%（m/m）的生物黏附劑，加入純化水中，攪拌下溶解；精密稱取5%的包合物，加入上述溶液中使其溶解。稱取處方量的P407及P188，于冰水浴中攪拌加入上述已冷卻的溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙夂?，置?冷藏12～24 h，使其充分溶脹。最終得到澄明無(wú)氣泡的溫敏凝膠水溶液。采用小瓶翻轉(zhuǎn)法測(cè)定膠凝溫度[13]，即取4 ml溫敏凝膠于西林瓶中，置于20恒溫水浴，以1/min速度升溫，翻轉(zhuǎn)西林瓶90°觀察樣品流動(dòng)狀態(tài)，達(dá)到凝膠表面無(wú)滑動(dòng)時(shí)的溫度即為膠凝溫度。平行測(cè)定3次，根據(jù)膠凝溫度篩選處方。

分別選用聚賴氨酸和透明質(zhì)酸鈉作為生物黏附劑，以相變溫度為指標(biāo)，篩選P407和P188的用量。由于人體鼻腔溫度為32～35[13]，因此選擇膠凝溫度約為32～35的處方為最優(yōu)處方，處方組成和結(jié)果見表2。

表2　不同凝膠基質(zhì)和生物黏附劑對(duì)膠凝溫度的影響Tab 2　Effects of different gel matrix and biological adhesive on gelatinization temperature

由表2可知，處方3和處方5的膠凝溫度均符合鼻用溫敏凝膠的要求。綜合考慮，本研究以處方5為最優(yōu)處方。

2.6溫敏凝膠黏附效果的評(píng)價(jià)[14]

按“2.5”項(xiàng)下處方5制備含2.5 mg/ml靛藍(lán)胭脂紅的鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物鼻用溫敏凝膠，另制備含2.5 mg/ml靛藍(lán)胭脂紅的鹽酸非索非那定混懸液作為對(duì)照。取大鼠6只分為混懸液組和凝膠組，每組3只。根據(jù)體質(zhì)量ip 13%烏拉坦麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺(tái)，分別用移液槍吸取5 μl相應(yīng)制劑，伸入大鼠右側(cè)鼻孔0.5 cm處給藥。給藥后用生理鹽水潤(rùn)濕的棉簽擦拭大鼠咽喉，觀察每次棉簽上是否有藍(lán)色。給藥后前30 min內(nèi)每1 min擦拭1次，超過(guò)30 min后每5 min擦拭1次，記錄鼻腔內(nèi)藥物的滯留時(shí)間。結(jié)果，凝膠組（50 min）大鼠鼻腔內(nèi)的藥物的滯留時(shí)間明顯高于混懸液組（18 min）（P＜0.01），是混懸液的2.8倍左右。

3　討論

鹽酸非索非那定是第二代抗組胺藥物，具有低滲透性，且不能透過(guò)血腦屏障，不良反應(yīng)少。有研究表明，鹽酸非索非那定的鼻用制劑可以提高藥物的生物利用度[15]。環(huán)糊精具有獨(dú)特的圓筒狀立體結(jié)構(gòu)，其獨(dú)特的疏水性空腔可以和某些物質(zhì)形成非共價(jià)化合物，從而顯著改善藥物的理化性質(zhì)，是制備包合物常用的材料。本文選用水溶性好的磺丁基醚-β-環(huán)糊精，使用飽和溶液法制備包合物。泊洛沙姆作為非離子表面活性劑，無(wú)刺激性、毒性小，具有良好的生物相容性；其水溶液受熱反向膠凝的性質(zhì)[16]，冷藏溫度下則為流動(dòng)性較好的液體。泊洛沙姆是聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物，P407和P188的區(qū)別在于，P188含有更多的聚氧乙烯親水片段。預(yù)試驗(yàn)證明膠凝溫度會(huì)隨P407濃度的增加而降低，且該材料濃度達(dá)到15%以上時(shí)可以形成溫敏凝膠，P188作用與之相反。因此利用泊洛沙姆的特點(diǎn)，采用冷配法制備鼻用溫敏凝膠，使其在體表溫度下產(chǎn)生相變，可以彌補(bǔ)鼻用制劑藥物停留時(shí)間短的缺點(diǎn)。目前鹽酸非索非那定市售制劑大部分為口服制劑，而包合物鼻用溫敏凝膠可以避免首關(guān)效應(yīng)，并能夠延長(zhǎng)藥物在鼻腔內(nèi)的滯留時(shí)間，有效減少使用頻次，具有良好的開發(fā)前景。

本試驗(yàn)制備了鹽酸非索非那定磺丁基醚-β-環(huán)糊精包合物，有效地增加了鹽酸非索非那定在水中的溶解度。添加泊洛沙姆后制備為鼻用溫敏凝膠，在鼻腔溫度下可形成凝膠，黏附于鼻腔內(nèi)，能夠延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間。

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（編輯：鄒麗娟）

Preparation and Mucoadhesion Evaluation of Fexofenadine Hydrochloride Sulfobutylether-β-Cyclodextrin Clathrate Compound Nasal Thermosensitive Hydrogels

XIE Jiarong，TU Jiasheng，SUN Chunmeng（Pharmacy Teaching and Research Section，College of Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China）

OBJECTIVE：To prepare fexofenadine hydrochloride sulfobutylether-β-cyclodextrin clathrate compound and its nasal thermosensitive hydrogels，and to evaluate its mucoadhesion.METHODS：Fexofenadine hydrochloride sulfobutylether-β-cyclodextrin clathrate compound was prepared by saturated aqueous system，and nasal thermosensitive hydrogels were prepared by cold method.Gel matrix and biological adhesive were screened by gelatinization temperature.Indigo carmine staining method was used to evaluate the retention time of prepared preparation and fexofenadine hydrochloride suspension in nasal cavity of rats.RESULTS：The clathrate was freely soluble in water.Inclusion rate of the clathrate was（86.0±2.7）%（n＝3）.Gel matrix was 16%poloxamer 407，biological adhesive was 0.5%sodium hyaluronate.the retention time of prepared nasal thermosensitive hydrogels was 2.8 time as that of fexofenadine hydrochloride suspension.CONCLUSIONS：Fexofenadine hydrochloride sulfobutylether-β-cyclodextrin clathrate compound nasal thermosensitive hydrogels are prepared successfully and show good mucoadhesion.

Fexofenadine hydrochloride；Sulfobutylether-β-cyclodextrin；Thermosensitive hydrogels；Nasal cavity；Mucoadhesion

R943

A

1001-0408（2016）28-3961-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.28.22

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81501579）；江蘇省自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目（No.BK20150702）

＊碩士研究生。研究方向：藥劑學(xué)。E-mail：xjr_0318@hotmail. com

教授，博士。研究方向：藥物劑型與新技術(shù)。電話：025-83271305。E-mail：jiashengtu@aliyun.com

（2016-01-14

2016-04-03）