劉建群，張國(guó)華，余昭芬，王雪梅（江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌　330004）

甘草對(duì)大鼠體內(nèi)雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯酮代謝物水平的影響Δ

劉建群＊，張國(guó)華，余昭芬，王雪梅（江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌330004）

目的：研究甘草對(duì)大鼠體內(nèi)雷公藤甲素（TPL）和雷公藤內(nèi)酯酮（TPN）內(nèi)源代謝物水平的影響。方法：取160只大鼠ig甘草[30 g（生藥）/kg]2 h后ip TPN（2.8 mg/kg），連續(xù)30 d，收集24 h尿液，合并30 d尿液，采用柱色譜技術(shù)和波譜技術(shù)分離鑒定其內(nèi)源代謝物；并采用超高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-Q-TOF/MS）確定TPL給藥后是否具有共同代謝物。將60只大鼠隨機(jī)分為T(mén)PL空白組、TPL組、甘草+TPL組、TPN空白組、TPN組、甘草+TPN組，各給藥組大鼠給藥方式及劑量同上，TPL空白組和TPN空白組大鼠分別ip相應(yīng)溶劑，每天1次，連續(xù)7 d；采用UPLC-Q-TOF/MS法研究甘草對(duì)大鼠體內(nèi)TPL、TPN內(nèi)源代謝物水平的影響。結(jié)果：從TPN給藥大鼠尿液中共分離出5個(gè)內(nèi)源代謝物，分別鑒定為1-甲基海因、4-氨基煙酸甲酯、3，4-二氫-6-羥基-2-喹啉酮、2，6-二羥基喹啉、2-喹啉酮；TPL給藥后大鼠尿液中同樣存在這5種代謝物。TPL組大鼠尿液中1-甲基海因水平較TPL空白組顯著升高（P＜0.05），TPN組大鼠尿液中2，6-二羥基喹啉水平較TPN空白組顯著升高（P＜0.05）；TPL或TPN聯(lián)合甘草用藥后血清中1-甲基海因、2，6-二羥基喹啉水平均降低，較其空白組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)首次從TPL和TPN給藥大鼠尿液中分離鑒定出了5個(gè)內(nèi)源代謝物；甘草能回調(diào)TPL給藥大鼠尿液中1-甲基海因水平以及TPN給藥后大鼠尿液中2，6-二羥基喹啉水平。

甘草；雷公藤甲素；雷公藤內(nèi)酯酮；內(nèi)源代謝物；大鼠

雷公藤（Tripteryginum Wilfordii Hook.F）屬衛(wèi)茅科植物，臨床上常用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎、紅斑狼瘡等難治性免疫功能亢進(jìn)疾病，其良好的臨床療效已得到國(guó)內(nèi)外的一致肯定，但是雷公藤也是不良反應(yīng)報(bào)道最多的中草藥之一[1]。雷公藤甲素（Triptolide，TPL）和雷公藤內(nèi)酯酮（Triptonide，TPN）是雷公藤的主要活性成分，是一類(lèi)環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物，具有顯著的免疫抑制、抗炎、抗腫瘤和抗生育等活性；但同時(shí)也是其主要毒性成分，具有很強(qiáng)的肝臟、腎、心臟和生殖系統(tǒng)等毒性[1]。雖然其毒副作用制約了雷公藤類(lèi)藥物的臨床應(yīng)用，但是從治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療效來(lái)看，目前還沒(méi)有其他藥物能夠取代雷公藤類(lèi)藥物。據(jù)研究報(bào)道，甘草對(duì)雷公藤類(lèi)藥物具有確切的減毒作用，但是其減毒作用機(jī)制尚不清楚[2]。筆者在前期研究中發(fā)現(xiàn)，甘草能顯著降低TPL和TPN的最大血藥濃度和藥時(shí)曲線下面積，增加清除率，加速其體內(nèi)代謝和排泄，降低組織分布濃度[3-4]。甘草具有肝藥酶誘導(dǎo)作用[5]，而體內(nèi)酶系是藥物代謝變化的本質(zhì)因素，故甘草還可能通過(guò)干預(yù)內(nèi)源性代謝物通路，即干預(yù)藥物代謝組學(xué)，從而影響TPL和TPN的毒性。因此，在本文中筆者擬從干預(yù)內(nèi)源性代謝物通路的角度來(lái)探討甘草對(duì)TPL和TPN的減毒機(jī)制。

1　材料

1.1儀器

AE-240十萬(wàn)分之一分析天平（瑞士梅特勒公司）；TL-5.0W臺(tái)式離心機(jī)（上海市離心機(jī)械研究所）；Agilent 1260自動(dòng)超高效液相色譜（UPLC）儀（美國(guó)Agilent公司）；Triple TOF 5600+高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜（Q-TOF/MS）儀（美國(guó)AB Sciex公司）；2-16K臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司）；Microfuge 16臺(tái)式微量離心機(jī)（美國(guó)Beckman公司）；Bruker AV-500核磁共振波譜（NMR）儀（瑞士Bruker公司）。

1.2藥材、對(duì)照品與試劑

甘草（購(gòu)自亳州市長(zhǎng)生中藥飲片有限公司，批號(hào)：130902，經(jīng)劉建群教授本人鑒定為甘草的干燥根和根莖）；TPL、TPN對(duì)照品（鄭州豐耀農(nóng)業(yè)科技有限公司，批號(hào)：FY140320、FY140325，純度：≥99%）；聚氧乙烯氫化蓖麻油（RH40，德國(guó)BASF公司）；乙腈（美國(guó)ACS公司，色譜純）；2-氯-L-苯丙氨酸（美國(guó)阿拉丁公司，批號(hào)：C105993，純度：≥98.5%）；甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3動(dòng)物

SD大鼠220只，SPF級(jí)，♀♂各半，體質(zhì)量200～220 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004]。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1甘草溶液精密稱取甘草藥材800 g，切片，加4倍量水煎煮2次，每次1 h，過(guò)濾，合并濾液，減壓蒸干，得甘草浸膏約80 g，用適量蒸餾水將浸膏制備成以生藥量計(jì)質(zhì)量濃度為10 g/ml的甘草溶液，備用。

2.1.2TPL溶液精密稱取TPL對(duì)照品2.0 mg，置于10 ml量瓶中，用20%丙二醇生理鹽水溶液溶解并稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為0.2mg/ml的TPL溶液，備用。

2.1.3TPN溶液精密稱取TPN對(duì)照品3.0 mg，置于10 ml量瓶中，加入無(wú)水乙醇1 ml，超聲溶解后，加入1 ml RH40，混勻后，加入生理鹽水溶液至刻度，即得質(zhì)量濃度為0.3 mg/ml的 TPN溶液，備用。

2.1.4內(nèi)標(biāo)溶液稱取2-氯-L-苯丙氨酸50 mg，用甲醇定容于50ml量瓶中，備用。

2.2內(nèi)源代謝物的提取、分離與鑒定

2.2.1內(nèi)源代謝物提取與分離取大鼠160只，以30 g（生藥）/kg的劑量ig甘草溶液2 h后ip TPN溶液，放入代謝籠中，自由飲水，連續(xù)給藥30 d。收集24 h尿液，將30 d內(nèi)收集的尿液合并。尿液減壓濃縮后用甲醇沉淀蛋白，過(guò)濾，將濾液減壓濃縮得浸膏；浸膏用水溶解后，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓濃縮回收溶劑，得乙酸乙酯部位71 g。將乙酸乙酯部位經(jīng)MCI色譜柱層析，甲醇-水梯度洗脫（0∶1、1∶9、1∶3、2∶3、11∶9、7∶3、17∶3、1∶0，V/V），得8個(gè)流份。將MCI色譜柱甲醇-水（1∶9）流份經(jīng)ODS色譜柱層析，甲醇-水梯度洗脫（0∶1、3∶7、1∶1、7∶3、1∶0），得甲醇-水（3∶7）流份再經(jīng)硅膠色譜柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫（50∶1、40∶1、30∶1），氯仿-甲醇（30∶1）流份析出化合物1。將MCI色譜柱甲醇-水（1∶3）流份經(jīng)ODS色譜柱層析，甲醇-水梯度洗脫（0∶1、3∶7、1∶1、7∶3、1∶0），得甲醇-水（1∶1）流份再經(jīng)硅膠色譜柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫（1∶0、20∶1、5∶1、1∶1、0∶1），氯仿-甲醇（20∶1）流份析出化合物2。將MCI色譜柱甲醇-水（2∶3）流份經(jīng)中性氧化鋁色譜柱層析，依次用二氯甲烷、二氯甲烷-乙酸乙酯（1∶1）洗脫，得二氯甲烷-乙酸乙酯（1∶1）流份再經(jīng)高效液相色譜法制備[Diamonsieuil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速：1 ml/min，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：218 nm，流動(dòng)相：乙腈-水，梯度條件：0 min→30 min（12%乙腈）→31 min（100%乙腈）→35 min（100%乙腈）]，收集保留時(shí)間為7.2～7.9 min的流份，析出化合物3和化合物4。將MCI色譜柱甲醇-水（11∶9）流份經(jīng)ODS色譜柱層析，甲醇-水梯度洗脫（0∶1、10∶1、5∶1、1∶1、1∶0），甲醇-水（1∶1）流份析出化合物5?；衔锞捎眉状贾亟Y(jié)晶純化。

2.2.2內(nèi)源代謝物結(jié)構(gòu)的鑒定化合物1，無(wú)色方晶（甲醇）。ESI-MS m/z：[M+H]+115、[M+Na]+137、[M-H]－113，HR-TOF/ MS m/z：[M+H]+115.050 9，分子式為C4H6N2O2。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δH：3.96（2H，s，H-5）、2.91（3H，s，CH3）。13C-NMR（75 MHz，CD3OD）δ：157.0（C-2）、173.8（C-4）、53.9（C-5）、29.2（CH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，并進(jìn)一步通過(guò)單晶X衍射圖譜確定化合物1為1-甲基海因。晶體參數(shù)如下：C4H6N2O2，M＝114.11，T＝293（2）K，l＝0.710 73 ?，單斜晶系，P21/C，a＝5.6170（11），b＝12.173（2），c＝8.096 0（16）?，V＝533.02（18）?3，z＝4，Dc＝1.422 mg/m3，（Mo Ka）＝0.074 mm－1，F(xiàn)（000）＝240?；衔?單晶X衍射結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)圖1。

圖1　化合物1單晶X衍射結(jié)構(gòu)圖Fig 1　X-ray crystal structure of compound 1

化合物2，白色針狀結(jié)晶（甲醇）。ESI-MS m/z：[M+H]+153、[M+Na]+175、[M+Cl]－187，HR-TOF/MS m/z：[M+H]+153.066 4，分子式為C7H8N2O2。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δH：8.55（1H，d，J＝2.4 Hz，H-2）、6.52（1H，d，J＝7.4 Hz，H-5）、7.72（1H，dd，J＝7.4、2.4 Hz，H-6）、3.81（3H，s，H-CH3）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：147.7（C-2）、119.7（C-3）、168.3（C-4）、121.3（C-5）、143.7（C-6）、178.8（C＝O）、44.8（CH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故確定化合物2為4-氨基煙酸甲酯。

化合物3，白色針狀結(jié)晶（甲醇）。ESI-MS m/z：[M+H]+164、[M+Na]+186、[M+Cl]－198，HR-TOF/MS m/z：[M+H]+164.071 0，分子式為C9H9NO2。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δH：2.51（2H，t，J＝7.7 Hz，H-3）、2.86（2H，t，J＝7.7 Hz，H-4）、6.57（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5）、6.62（1H，dd，J＝8.4，2.4 Hz，H-7）、6.69（1H，d，J＝8.4 Hz，H-8）。13C-NMR（75 MHz，CD3OD）δ：173.6（C-2）、31.5（C-3）、26.4（C-4）、115.7（C-5）、154.5（C-6）、114.8（C-7）、117.5（C-8）、126.6（C-9）、131.2（C-10）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故確定化合物3為3，4-二氫-6-羥基-2-喹啉酮。

化合物4，淡黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z：[M+H]+162、[2M+H]+323、[M+Na]+184、[M+Cl]－196，HR-TOF/MS m/z：[M+H]+162.055 4，分子式C9H7NO2。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δH：6.60（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3）、7.86（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4）、7.03（1H，d，J＝2.0 Hz，H-5）、7.10（1H，dd，J＝9.0、2.0 Hz，H-7）、7.25（1H，d，J＝9.0 Hz，H-8）。13CNMR（75 MHz，CD3OD）δ：164.8（C-2）、121.8（C-3）、142.3（C-4）、112.6（C-5）、154.4（C-6）、121.6（C-7）、117.8（C-8）、122.4（C-9）、133.3（C-10）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故確定化合物4為2，6-二羥基喹啉。

化合物5，白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z：[M+H]+146、[M+Na]+168，HR-TOF/MS m/z：[M+H]+146.060 6，分子式為C9H7NO。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δH：6.61（1H，d，J＝9.5 Hz，H-3）、7.96（1H，d，J＝9.5 Hz，H-4）、7.67（1H，d，J＝7.8 Hz，H-5）、7.26（1H，dd，J＝7.8、7.6 Hz，H-6）、7.55（1H，dd，J＝8.2、7.6 Hz，H-6）、7.36（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8）。13CNMR（75 MHz，CD3OD）δ：161.9（C-2）、121.8（C-3）、142.8（C-4）、129.2（C-5）、124.0（C-6）、132.0（C-7）、116.7（C-8）、138.8（C-9）、119.0（C-10）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故確定化合物5為2-喹啉酮。

因TPL與TPN具有相似的結(jié)構(gòu)和毒性機(jī)制，筆者推測(cè)TPL在大鼠體內(nèi)可能產(chǎn)生與TPN相似的內(nèi)源代謝物，經(jīng)UPLC-QTOF/MS測(cè)定發(fā)現(xiàn)TPL給藥組同樣具有化合物1～5的內(nèi)源代謝物（具體檢測(cè)條件見(jiàn)“2.3.2”項(xiàng)下）。

2.3內(nèi)源代謝物檢測(cè)

2.3.1大鼠分組、給藥及樣品處理 （1）分組與給藥。SD大鼠60只，隨機(jī)分為T(mén)PL空白組、TPL組、TPL+甘草組、TPN空白組、TPN組和TPN+甘草組，每組10只。TPL空白組大鼠ip 20%丙二醇生理鹽水溶液；TPL組大鼠按0.7 mg/kg的劑量ip TPL溶液；TPN空白組大鼠ip 10%乙醇+10%RH40生理鹽水溶液：TPN組大鼠按2.8 mg/kg的劑量ip TPN溶液；聯(lián)合給藥組大鼠在ip TPL或TPN溶液之前2 h以30 g（生藥）/kg的劑量ig甘草溶液。TPL和TPN的給藥劑量均約為其半數(shù)致死量，以造成急性毒性模型。各組大鼠均在每天早上固定時(shí)間給藥，連續(xù)給藥7d。

（2）尿樣采集。采用大鼠代謝籠法收集6組大鼠每天10：30到16：30的尿液。給藥及收集尿液期間大鼠自由飲水，但每天從22：30到第2天16：30禁食。

（3）樣品處理。將“2.3.2”項(xiàng)下收集的各組大鼠尿液以4 300× g離心10 min，取上清液1 ml，加入1 ml甲醇，混勻，靜置，然后再次在4℃、21 920×g條件下離心10 min。取上清液1.5 ml，加入0.1 ml 2-氯-L-苯丙氨酸內(nèi)標(biāo)參比溶液，混勻，置－20℃冰箱保存，用于UPLC-Q-TOF/MS分析。

（4）5個(gè)內(nèi)源代謝物混合對(duì)照品溶液制備。精密稱取各對(duì)照品，用甲醇制備成質(zhì)量濃度為0.1mg/ml的混合對(duì)照品溶液。2.3.2UPLC-Q-TOF/MS測(cè)定 （1）色譜條件。色譜柱：Thermo C18（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液，B：乙腈（梯度洗脫：0～4 min，5%→5%B；4～19 min，5%→21%B；19～25 min，21%→100%B；25～30 min，100%B；30～30.1 min，100%→5%B；30.1～35 min，5%B）；流速：0.3 ml/ min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：2μl。

（2）質(zhì)譜條件。正離子源噴霧電壓：5 500V；離子源溫度：600℃；裂解電壓（DP）：100 V；碰撞能量（CE）：55 eV；碰撞能量擴(kuò)展（CES）：20 eV；霧化氣體：氮?dú)?，輔助氣（GS）1、2均為60 Psi，氣簾氣（CUR）為35 Psi；一級(jí)質(zhì)譜母離子掃描范圍為50～500，信息關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)采集（IDA），設(shè)置響應(yīng)值超過(guò)10 cps的6個(gè)最高峰進(jìn)行二次質(zhì)譜掃描，子離子掃描范圍為50～500。

（3）數(shù)據(jù)處理。計(jì)算各組5個(gè)內(nèi)源代謝物分子離子峰（[M+H]+）面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的相對(duì)比值，以表示各內(nèi)源代謝物的水平。采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較采用單因素方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3.3UPLC-Q-TOF/MS分析結(jié)果隨著給藥天數(shù)的增加，TPL組大鼠尿液中1-甲基海因水平呈上升趨勢(shì)，到給藥第5、6天達(dá)到最高水平，與TPL空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而TPL與甘草聯(lián)合給藥后，大鼠尿液中1-甲基海因的水平回落，與TPL空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。隨著給藥天數(shù)的增加，TPN組大鼠尿液中2，6-二羥基喹啉的水平升高，與TPN空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而TPN與甘草聯(lián)合給藥后，大鼠尿液中2，6-二羥基喹啉的水平回落，與TPN空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以上結(jié)果提示，1-甲基海因和2，6-二羥基喹啉可能分別為T(mén)PL和TPN的毒性生物標(biāo)志物，預(yù)先給予甘草溶液后這2個(gè)內(nèi)源代謝物水平得到回調(diào)。然而各組中其余內(nèi)源代謝物的水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），這提示這些未有變化的內(nèi)源代謝物可能與TPL或TPN的毒性無(wú)關(guān)，故其圖略。TPL 3個(gè)組大鼠尿液中1-甲基海因隨給藥天數(shù)變化的趨勢(shì)見(jiàn)圖2，TPN 3個(gè)組大鼠尿液中2，6-二羥基喹啉隨給藥天數(shù)變化的趨勢(shì)見(jiàn)圖3。

3　討論

采用柱色譜和核磁共振等技術(shù)從大鼠尿液中分離鑒定了5個(gè)內(nèi)源代謝物，這5個(gè)內(nèi)源代謝物均為首次從大鼠尿液中分得。通過(guò)對(duì)空白組與TPL或TPN單獨(dú)給藥組組間大鼠尿液中內(nèi)源代謝物的差異性分析，發(fā)現(xiàn)1-甲基海因和2，6-二羥基喹啉可能分別為T(mén)PL和TPN毒性生物標(biāo)記物。與空白組相比，TPL組或TPN組大鼠尿液中這2個(gè)毒性生物標(biāo)記物的水平均上調(diào)，預(yù)先給予甘草后這2個(gè)內(nèi)源代謝物水平又得到回調(diào)。

其中，1-甲基海因具有良好的平喘鎮(zhèn)咳和抗抑郁等活性[11-12]。1-甲基海因是肌酐的體內(nèi)代謝物，對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒和誘導(dǎo)凋亡作用，其是肌酐降解成甘氨酸的中間產(chǎn)物[13]。1-甲基海因還涉及精氨酸、脯氨酸、脲循環(huán)等代謝途徑[14]。肌酐是腎損傷的重要生化指標(biāo)之一。TPL具有較強(qiáng)腎毒性，能導(dǎo)致肌酐顯著升高[15]，從而可能導(dǎo)致其中間代謝物1-甲基海因水平的上調(diào)，因此1-甲基海因可能為T(mén)PL的腎毒性生物標(biāo)志物。甘草能回調(diào)1-甲基海因，說(shuō)明甘草對(duì)TPL造成的腎損傷具有一定的保護(hù)作用。2，6-二羥基喹啉即6-羥基-2（1H）-喹啉酮及其衍生物具有抗菌和正性肌力活性，是合成強(qiáng)心、降壓、治療糖尿病、促進(jìn)腦循環(huán)、抗哮喘和抗?jié)兯幬锏闹匾虚g體，是細(xì)菌降解喹啉的中間代謝物之一，也是動(dòng)物體內(nèi)喹啉和色氨酸的代謝物[16]，由于體內(nèi)的色氨酸95%以上由肝細(xì)胞代謝，肝功能障礙可明顯影響色氨酸在體內(nèi)的代謝狀態(tài)[17]。研究結(jié)果表明，TPN能誘導(dǎo)2，6-二羥基喹啉上調(diào)，甘草能起回調(diào)作用。TPN的毒性以及甘草的解毒作用可能與色氨酸代謝有關(guān)。

圖2　TPL空白組、TPL組、TPL+甘草組大鼠尿液中1-甲基海因隨給藥天數(shù)變化的趨勢(shì)Fig 2　Trend of 1-methylhydantoin in urine of rats in TPL blank group，TPL group，TPL+G.uralensis group with the days of administration

圖3　TPN空白組、TPN組、TPN素+甘草組大鼠尿液中2，6-二羥基喹啉隨給藥天數(shù)變化的趨勢(shì)Fig 3　Trend of 2，6-quinolinediol in urine of rats in TPN blank group，TPN group，TPN+G.uralensis group with the days of administration

綜上所述，TPL和TPN的毒性以及甘草的解毒作用可能與其干擾了肌酐、精氨酸、脯氨酸、脲循環(huán)以及色氨酸等代謝途徑有關(guān)。

[1]賈歌劉暢，龐晶瑤，馬致潔，等.雷公藤肝毒性化學(xué)成分、毒性機(jī)制及減毒方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2016，27（13）：1857.

[2]曹玲娟，顏苗，李煥德，等.雷公藤致肝損傷及與甘草配伍減毒機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（13）：2537.

[3] 劉建群，李青，張銳，等.LC-MS/MS法研究甘草對(duì)雷公藤甲素藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布與排泄的影響[J].藥物分析雜志，2010，30（9）：1664.

[4] 張銳，李青，劉芳，等.LC-MS/MS法研究甘草對(duì)雷公藤內(nèi)酯酮藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布與排泄的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（7）：151.

[5]景欣悅，彭蘊(yùn)茹，王新敏，等.甘遂與甘草合用對(duì)大鼠肝藥酶CYP1A2、CYP2C19和CYP2E1的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2015，31（11）：1625.

[6]雷羽，熊亮，王霞.海蛇干體的化學(xué)成分研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（5）：1127.

[7]Smr?ková S，Juricová K，Prutianov V.Study of aminoimino tautomerism in derivatives of 2-，4-and 6-aminonicotinic acid[J].Cheminform，1994，59（9）：2057.

[8] 袁加程，劉長(zhǎng)春.離子液體中6-羥基-3，4-二氫-2（1H）-喹啉酮的合成[J].精細(xì)化工，2014，31（5）：603.

[9]Rouge P，Cornu A，Biesse-Martin AS，et al.Identification of quinoline，carboline and glycinamide compounds in cow milk using HRMS and NMR[J].Food Chem，2013，141（3）：1888.

[10]National Institute of Advanced Industrial Science and Technology（AIST）.Spectral database for organic compounds：2-quinolone[DB/OL].[2015-11-16].http：//sdbs.db. aist.go.jp/sdbs/cgibin/direct-frame-top-cgi.

[11]韓冬，董雪蓮，邱智東.1-甲基海因?qū)ο笫竽Ｐ偷钠酱饔眉捌錂C(jī)制[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014，40（3）：543.

[12]游杰舒，張瑞睿，王春國(guó)，等.1-甲基海因?qū)σ钟舸笫笮袨閷W(xué)的影響及機(jī)制初探[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2013，29（8）：1104.

[13] 楊波，鄧薇，蔣云生，等.肌酐代謝產(chǎn)物對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞毒性作用的比較研究[J].中國(guó)醫(yī)師雜志，2011，13（6）：738.

[14]Martin-Lorenzo M，Zubiri I，Maroto AS，et al.KLK1 and ZG16B proteins and arginine-proline metabolism identified as novel targets to monitor atherosclerosis，acute coronary syndrome and recovery[J].Metabolomics，2015，11（5）：1056.

[15] 楊帆，卓犖，李上勛，等.雷公藤甲素誘發(fā)大鼠急性腎損傷的機(jī)制[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（16）：2281.

[16]朱順妮，樊麗，倪晉仁.兩株喹啉降解菌代謝途徑的分析[J].中國(guó)環(huán)境科學(xué)，2008，28（5）：456.

[17]曾民德，江紹基.肝病與卟啉代謝紊亂[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)分冊(cè)，1980（9）：391.

（編輯：林靜）

Effects of Glycyrrhiza uralensis on Metabolites Levels of Triptolide and Triptonide in Rats

LIU Jianqun，ZHANG Guohua，YU Zhaofen，WANG Xuemei（Key Lab of Modern Preparation of TCM，Ministry of Education，Jiangxi University of TCM，Nanchang 330004，China）

OBJECTIVE：To study the effects of Glycyrrhiza uralensis on endogenous metabolites levels of triptolide（TPL）and triptonide（TPN）in rats.METHODS：160 rats were given G.uralensis[30 g（crude drug）/kg]intragastrically，2 h later given TPN（2.8 mg/kg）intraperitoneally for consecutive 30 d.24 h urine were collected for 30 days，and then endogenous metabolites were separated and identified by column chromatograph and spectrum technology.UPLC-Q-TOF/MS was used to determine the common metabolites after giving TPL.60 rats were randomly divided into TPL blank group，TPL group，G.uralensis+TPL group，TPN blank group，TPN group，G.uralensis+TPN group.Route of administration and dosage of treatment groups were same as above groups.TPL blank group and TPN blank group were given corresponding solvent，once a day，for consecutive 7 d.UPLC-QTOF/MS was used to determine the endogenous metabolites of TPL and TPN in rats.RESULTS：Five endogenous metabolites were isolated and identified from urine of rats after given TPN，as 1-methylhydantoin，methyl 4-aminonicotinate，3，4-dihydro-6-hydroxy-2（1H）-quinolinone，2，6-quinolinediol，2-quinolone，respectively.Those five metabolites were also found in urine of rats after giving TPN.1-methylhydantoin in TPL group and 2，6-quinolinediol in TPN group were significantly increased，compared with TPL blank group or TPN blank group（P＜0.05）；while urine levels of 1-methylhydantoin and 2，6-quinolinediol decreased after TPL or TPN combining with G.uralensis，compared with TPL/TPN blank group，with no significant difference（P＞0.05）.CONCLUSIONS：The above five endogenous metabolites were isolated from rat urine after given TPL or TPN for the first time.The levels of 1-methylhydantoin after giving TPL and 2，6-quinolinediol in urine after giving TPN can be recovered by G.uralensis.

Glycyrrhiza uralensis；Triptolide；Triptonide；Endogenous metabolite；Rats

R917

A

1001-0408（2016）28-3914-04

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.28.08

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81160541）；江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（No.2011A143）

＊教授，博士。研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量評(píng)價(jià)。電話：0791-87119027。E-mail：liu5308@sina.com

（2016-02-02

2016-05-31）