褚盼盼+宋奇琦+陳月桃+宋莉+喬元彪

摘 要：以苦蕎麥多糖為試驗(yàn)材料，以Vc和BHT為對(duì)照，評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性。研究表明，苦蕎麥多糖顯示出一定的抗氧化活性，抗氧化活性隨苦蕎麥多糖濃度的增加而加強(qiáng)。苦蕎麥多糖濃度達(dá)到2 mg·mL-1時(shí)，還原能力測(cè)得其700 nm處吸光度值為1.700，DPPH·清除率、ABTS自由基清除率、O2-清除率、·OH清除率最大，分別為57%，45%，80%，85%，IC50分別為1.706，2.263，0.010，0.327 mg·mL-1?？嗍w麥多糖具有一定的抗氧化活性，可為其在食品及保健品領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供一定的理論參考。

關(guān)鍵詞：苦蕎麥；多糖；抗氧化活性

中圖分類號(hào)：Q945 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2016.09.010

Abstract： With bitter buckwheat polysaccharide as test materials， Vc and butylated hydroxytoluene for comparison， their antioxidant activity in vitro were evaluated. The results showed that polysaccharide of bitter buckwheat showed certain antioxidant activity， and antioxidant activity becoming strength with the increase of polysaccharide concentrations of bitter buckwheat. When the concentration of bitter buckwheat polysaccharide was 2 mg·mL-1， its reducing power measured by absorbance value was 1.7 at 700 nm， DPPH· clearance， ABTS radical clearance， clearance of O2-·OH clearance reached the highest， 57%， 45%， 80% and 85% respectively， IC50 were 1.706， 2.263， 0.010， 0.327 mg·mL-1. Bitter buckwheat polysaccharide has certain antioxidant activity， can be widely used in the field of food and health care products.

Key words： bitter buckwheat； polysaccharides； antioxidant activity

目前，天然抗氧化劑因其來(lái)源廣泛、無(wú)毒副作用等特點(diǎn)在生產(chǎn)中應(yīng)用逐漸增多。許多天然植物中存在大量的活性多糖成分，這些成分具有多種生理學(xué)特性，尤其具有很強(qiáng)的抗氧化活性[1-5]。

苦蕎麥作為一種糧食作物，富含多糖，藥理活性強(qiáng)，兼具營(yíng)養(yǎng)和保健的雙重功效，近年來(lái)廣受關(guān)注。當(dāng)前，大多數(shù)學(xué)者的研究主要集中在苦蕎麥次生代謝產(chǎn)物（如黃酮類物質(zhì)）的生理活性，對(duì)苦蕎麥多糖的生物學(xué)功能研究較為少見(jiàn)。然而，苦蕎麥中生物類黃酮的含量較少，初生代謝產(chǎn)物多糖的含量則要大的多，近年來(lái)越來(lái)越受到人們的重視。本研究以苦蕎麥多糖為試驗(yàn)材料，并以生產(chǎn)中常用的抗氧化劑Vc和BHT為對(duì)照，通過(guò)對(duì)其體外還原能力、DPPH·清除率、ABTS自由基清除率、O2-清除率及·OH清除率的測(cè)定，評(píng)價(jià)其抗氧化活性，旨在為其在食品及保健品領(lǐng)域的應(yīng)用提供一定的理論參考。

1 材料和方法

1.1 材 料

苦蕎麥種子，購(gòu)自山西省呂梁市，粉碎后用于提取多糖成分。

1.2 主要儀器與試劑

UV-1601紫外分光光度計(jì)，北京北分瑞利分析儀器有限責(zé)任公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，國(guó)華電器有限公司；TDL-40B臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科技儀器廠；DHG-9145A電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海凱朗儀器設(shè)備廠。

DPPH（東京化成工業(yè)株式會(huì)所）、ABTS（Sigma公司），其它試劑均為分析純。

1.3 方 法

1.3.1 苦蕎麥多糖的提取及多糖含量的測(cè)定 參考柴瑞娟等[6]的方法，經(jīng)提取得到苦蕎麥粗多糖。以葡聚糖為測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚-濃硫酸法[7]得到多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性回歸方程為：y=6.339 3x+0.001 3，R2=0.990 3。由此，計(jì)算得出苦蕎麥多糖的含量是102.53 mg·g-1。

1.3.2 苦蕎麥多糖體外抗氧化活性各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定 取不同質(zhì)量濃度的苦蕎麥多糖溶液（以Vc和BHT作對(duì)照），分別為2，1，0.5，0.25，0.125 mg·mL-1，對(duì)其體外抗氧化活性各項(xiàng)指標(biāo)如還原能力[8]、DPPH·清除率[9]、ABTS自由基清除率[10]、O2-清除率[11]、·OH清除率[11]進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算半數(shù)抑制率IC50，評(píng)價(jià)其體外抗氧化能力。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析 所有體外抗氧化活性各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定均重復(fù)3次，數(shù)據(jù)均在WPS表格中進(jìn)行比較分析并完成繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎麥多糖的還原能力

還原能力可以作為判斷樣品提供電子能力的標(biāo)準(zhǔn)之一。自由基能接受抗氧化物質(zhì)提供的電子形成穩(wěn)定的產(chǎn)物并且可以打破其一系列的后續(xù)反應(yīng)。還原能力越強(qiáng)，可以判斷樣品的抗氧化能力越強(qiáng)。

由圖1可知，多糖濃度為0.125，0.25，0.5，1， 2 mg·mL-1的吸光值分別為0.595，0.770，0.995， 1.170，1.700，還原能力會(huì)隨苦蕎麥多糖濃度的增多而變大。對(duì)照組Vc和BHT的還原能力與樣品表現(xiàn)趨勢(shì)一致，同一濃度苦蕎麥多糖還原能力比對(duì)照Vc和BHT低一些。

2.2 苦蕎麥多糖對(duì)DPPH·的清除率

由圖2（a）可知，多糖濃度為0.125，0.25，0.5， 1，2 mg·mL-1的DPPH·清除率分別為10%，14%，20%，33%，57%。DPPH·清除率會(huì)隨苦蕎麥多糖濃度的增多而顯著變大，最高為57%，略低于對(duì)照Vc和BHT的效果。由圖2（b）可見(jiàn)，在研究范圍內(nèi)，苦蕎麥多糖濃度和DPPH·清除率有極大的相關(guān)性（R2=0.999 4），根據(jù)線性方程式y(tǒng)=24.903x+7.500計(jì)算苦蕎麥多糖IC50為1.706 mg·mL-1。

可能的清除機(jī)理為，苦蕎麥多糖可以與DPPH·的單電子配對(duì)，形成穩(wěn)定的抗磁分子，而使其在517 nm處的吸光度減小。

2.3 苦蕎麥多糖對(duì)ABTS自由基的清除率

由圖3（a）可知，多糖濃度為0.125，0.25，0.5， 1，2 mg·mL-1的ABTS自由基清除率分別為21%，23%，27%，37%，45%，ABTS自由基清除率隨多糖濃度的提高也不斷變大，研究范圍內(nèi)最高為45%。但是，清除效果比對(duì)照Vc和BHT稍低一些。由圖3（b）可見(jiàn)，苦蕎麥多糖濃度和ABTS自由基清除率有良好的線性關(guān)系（R2=0.960 3），根據(jù)線性方程式y(tǒng)=13.032x+20.500計(jì)算苦蕎麥多糖IC50為2.263 mg·mL-1。

2.4 苦蕎麥多糖對(duì)O2-的清除率

由圖4（a）可知，苦蕎麥多糖濃度為0.125， 0.25，0.5，1，2 mg·mL-1的O2-清除率分別為49%，52%，62%，68%，80%。O2-清除率隨苦蕎麥多糖濃度的增多也相應(yīng)增強(qiáng)，最高可達(dá)80%?？嗍w麥多糖濃度在較高范圍內(nèi)對(duì)O2-清除作用明顯，但略低于對(duì)照Vc和BHT。由圖4（b）可見(jiàn)，苦蕎麥多糖濃度和O2-清除率有良好的線性關(guān)系（R2=0.941 5），根據(jù)線性方程式y(tǒng)=15.957x+49.833計(jì)算苦蕎麥多糖IC50為0.01 mg·mL-1。

O2-是一種能激活自由基與生物大分子反應(yīng)從而導(dǎo)致組織損傷的前體物質(zhì)?？嗍w麥多糖對(duì)O2-清除的機(jī)理可能是，苦蕎麥多糖與O2-結(jié)合形成一種穩(wěn)定的化合物從而中止了該自由基反應(yīng)鏈的進(jìn)一步進(jìn)行。

2.5 苦蕎麥多糖對(duì)·OH的清除率

·OH可與人體中重要的生物大分子物質(zhì)反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體受損并引起衰老等病癥。由圖5（a）可知，苦蕎麥多糖濃度為0.125，0.25，0.5，1，2 mg·mL-1的·OH清除率分別為40%，48%，59%，68%，85%?！H清除率會(huì)隨苦蕎麥多糖濃度提高而增強(qiáng)，最高達(dá)到85%，清除效果略低于對(duì)照Vc和BHT。由圖5（b）可見(jiàn)，苦蕎麥多糖濃度和·OH清除率存在良好的線性關(guān)系（R2=0.942 5），根據(jù)線性方程式y(tǒng)=22.366x+42.667計(jì)算苦蕎麥多糖半抑制濃度IC50為0.327 mg·mL-1。苦蕎麥多糖在濃度較高時(shí)清除·OH能達(dá)到良好效果。

3 結(jié) 論

健康是人類永恒的話題，其與機(jī)體的抗氧化作用密切相關(guān)?？嗍w麥?zhǔn)且环N人們喜愛(ài)的藥食同源的小雜糧，其養(yǎng)生保健方面的功效備受關(guān)注。本課題以苦蕎麥多糖為試驗(yàn)材料，研究其體外抗氧化活性。研究表明，苦蕎麥多糖顯示出一定的抗氧化活性，且抗氧化活性會(huì)隨苦蕎麥多糖濃度的增加而加強(qiáng)。多糖濃度達(dá)到2 mg·mL-1時(shí)，還原能力測(cè)得其700 nm處吸光度值為1.700，DPPH·清除率、ABTS自由基清率、O2-清除率、·OH 清除率最大，分別為57%，45%，80%，85%，IC50分別為1.706，2.263，0.01，0.327 mg·mL-1，清除效果略低于對(duì)照Vc和BHT。

研究顯示，苦蕎麥多糖是一種天然的抗氧化物質(zhì)，且安全、易得。該研究為苦蕎麥多糖在食品及保健品領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供了理論參考。

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