周泓燕 鄒國惠 龍艷麗

（四川省涼山州寧南縣農(nóng)牧局，四川寧南 615400）

豬高致病性藍(lán)耳病的抗體效價試驗研究

周泓燕 鄒國惠 龍艷麗

（四川省涼山州寧南縣農(nóng)牧局，四川寧南 615400）

制定方案，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測本地豬高致病性藍(lán)耳病的抗體效價變化，制定出適合寧南縣豬高致病性豬藍(lán)耳病的免疫程序和防治措施。結(jié)果表明：豬高致病性藍(lán)耳病活疫苗產(chǎn)生免疫抗體的時間比滅活苗所需的時間短，活疫苗抗體效價維持的時間比滅活苗抗體效價維持的時間長，免疫接種時間活疫苗應(yīng)每隔半年接種一次，滅活苗應(yīng)每隔4個月接種一次。

豬高致病性豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測 免疫

豬高致病性藍(lán)耳病是一種以病豬高熱為典型癥狀的烈性傳染病，此疫病傳播速度快，流行面積廣、死亡率可達(dá)50%～100%。曾在全國掀起了一場談“高熱”色變的風(fēng)暴，給養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來巨大浩劫。而防止此病的發(fā)生重在平時的免疫預(yù)防及飼養(yǎng)管理和消毒，但由于各地的環(huán)境條件不一，所以，一定要根據(jù)當(dāng)?shù)氐膶嶋H情況，進(jìn)行抗體監(jiān)測，制定出適宜的免疫程序和預(yù)防措施。以提高當(dāng)?shù)仞B(yǎng)豬戶對豬高致病性藍(lán)耳病的防控技術(shù)，降低高致病性藍(lán)耳病的發(fā)生概率，提高養(yǎng)殖戶收益，確保養(yǎng)豬生產(chǎn)健康穩(wěn)定持續(xù)的發(fā)展。

本試驗主要是通過監(jiān)測豬高致病性藍(lán)耳病抗體的保護(hù)力和有效保護(hù)期，制定出適合寧南縣豬高致病性豬藍(lán)耳病的免疫程序和防治措施。

1　材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1主要試驗儀器

純水機(jī)：成都超純科技有限公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀：北京天石醫(yī)療用品制作所生產(chǎn)；恒溫培養(yǎng)箱：上海齊欣科學(xué)儀器有限公司。

1.1.2試劑

豬藍(lán)耳病毒ELISA抗體檢測試劑盒由武漢科前生物股份有限公司提供。

1.1.3樣品

2015年4月～11月在榮盛養(yǎng)豬場采集的28頭豬共185份血清。

1.1.4疫苗

由中牧實業(yè)股份有限公司成都藥械廠生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）（批號：1407057-2，有效期至：20160124）。

由中牧實業(yè)股份有限公司成都藥械廠生產(chǎn)的豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株）（批號：1411021，有效期至：20151127）。

1.2試驗方法

1.2.1采集血樣

2015年4月23日選取榮盛豬場出生日期非常相近的從未免疫過豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的三窩仔豬共計28頭，通過乳靜脈采血后分兩組分別注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗和豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，并于4月30日、5月14日、5月22日、6 月5日、6月18日、11月3日對每頭豬采取1～2ml血液，待血液凝固后，以4000r/min離心10分鐘，收集血清，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2洗滌液配制

使用前，將20倍濃縮洗滌液恢復(fù)至室溫（20℃～25℃），并搖動使沉淀溶解，然后用蒸餾水作20倍稀釋，混勻，備用。

1.2.3待檢血清和對照血清的稀釋

將待檢血清在血清稀釋板中按1：40稀釋。陽性和陰性對照血清在血清稀釋板中按1：4稀釋。

1.2.4操作步驟

（1）取抗原包被板，用稀釋好的洗滌液洗板2次，再將稀釋好的待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清各取100μl加至抗原包被板中，待檢血清設(shè)1孔，陰、陽性對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品，置37℃下溫育30min。

（2）洗滌：棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μl，靜置3分鐘后，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，重復(fù)洗滌5次。

（3）加入二抗：每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl，置37℃下溫育30min。

（4）洗滌：棄去孔中的溶液，洗滌5次，方法同2。

（5）顯色：每孔先加入1滴底物液A（約50μl）、再加入1滴底物液B（約50μl），混勻，置室溫（20～25℃）下避光顯色10min。

（6）終止反應(yīng)：每孔加入終止液一滴（約50μl），10min內(nèi)測定結(jié)果。

表1　注射活疫苗及滅活疫苗后不同時期陽性率變化圖

1.3判定標(biāo)準(zhǔn)

在酶標(biāo)儀上讀各孔OD630nm值。試驗成立的條件是：陽性對照孔OD630nm值均應(yīng)≥1.0，且＜0.3，陰性對照孔OD630nm值均應(yīng)＜0.2。計算樣品的KQ值。

若KQ≥20，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性；若KQ ＜20，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陰性。

2　結(jié)果與分析

（1）豬高致病性藍(lán)耳病活疫苗產(chǎn)生免疫抗體的時間比滅活苗所需的時間短。①免疫后21d，活疫苗陽性率為86.67%，滅活苗陽性率為46.15%；②免疫后30d，活疫苗陽性率為100%，滅活苗陽性率為92.31%。

（2）豬高致病性藍(lán)耳病活疫苗抗體效價維持的時間比滅活苗抗體效價維持的時間長。免疫后190d，活疫苗陽性率為100%，滅活苗陽性率為46.15%。

3　討論

（1）豬高致病性藍(lán)耳病病毒在扁桃體和肺內(nèi)可存在3周到1年的時間，且康復(fù)豬可通過呼吸道、唾液腺、糞便、尿及精液散毒。造成了該病通常呈地方流行性且持續(xù)存在。目前對該病的防治還沒有特效藥，因此應(yīng)提倡“自繁自養(yǎng)和全進(jìn)全出”的養(yǎng)殖模式，并以預(yù)防為主及時做好高致病性豬藍(lán)耳病免疫，另外還應(yīng)加強(qiáng)豬群的血清學(xué)監(jiān)測，特別是引種過程中的檢測，嚴(yán)格隔離、檢疫、消毒工作，保障養(yǎng)豬生產(chǎn)安全健康發(fā)展。

（2）由于活疫苗產(chǎn)生免疫抗體的時間短，在發(fā)生豬高致病性藍(lán)耳病疫情時，應(yīng)采用豬高致病性藍(lán)耳病活疫苗進(jìn)行緊急免疫接種。但在日常豬藍(lán)耳病疫苗免疫接種過程中，由于PRRSV是抗體依賴性感染病毒，具有不穩(wěn)定性，因此，在生產(chǎn)中盲目使用疫苗特別是活疫苗是不可取的。根據(jù)試驗結(jié)果及本地各方面的環(huán)境條件，建議在免疫接種時間活疫苗應(yīng)每隔半年接種一次，滅活苗應(yīng)每隔4個月接種一次，在接種免疫前后期間適當(dāng)添加黃芪多糖類藥物，創(chuàng)造良好的養(yǎng)殖環(huán)境，提供充足的營養(yǎng)，以增加豬群抗病能力和免疫效果。

（3）免疫前后至少4 d不要使用抗病毒藥、干擾素和抗生素，亦不要使用消毒液（粉）消毒圈舍，以免影響免疫效果。在疫苗免疫接種過程中，一旦發(fā)現(xiàn)接種動物出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，應(yīng)立即注射腎上腺素、并對癥治療，也可以往畜體上潑冷水、放鼻中、耳尖、蹄頭血。

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