胡洪柱　秦學娜楊 丹

（1.天津市濱海新區(qū)塘沽動物衛(wèi)生監(jiān)督所，天津　300450；2.天津市津南區(qū)畜牧水產業(yè)發(fā)展服務中心，天津　300350；3.天津市動物疫病預防控制中心，天津　300402）

H5高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測及分析

胡洪柱1秦學娜2楊 丹3

（1.天津市濱海新區(qū)塘沽動物衛(wèi)生監(jiān)督所，天津300450；2.天津市津南區(qū)畜牧水產業(yè)發(fā)展服務中心，天津300350；3.天津市動物疫病預防控制中心，天津300402）

為了全面了解和掌握我縣禽流感的免疫效果，科學評價基層免疫工作質量，匯總了從2013-2015年三年的試驗結果，共采集血樣5888份，合格數(shù)量是5147，合格率是87.41%，合格率高于農業(yè)部要求的70%的標準，免疫抗體檢測結果分析討論如下。

高致病性禽流感抗體水平監(jiān)測與分析

禽流感是由A型流感病毒引起多種家禽及野鳥的高度接觸性傳染病，又名歐洲雞瘟。高致病性禽流感是世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的疫病之一[1］，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的損失。疫苗免疫是一種非常有效的預防疾病發(fā)生的方法。在我國是采取以疫苗免疫為主的綜合性防治措施來防控本病。為監(jiān)測已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗體水平，適時指導防疫，對防控高致病性禽流感的發(fā)生和流行具有十分重要的作用。因此，筆者對本區(qū)2013～2015年高致病性禽流感免疫抗體檢測結果分析討論如下。

1　材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗動物

部分規(guī)模雞場和散養(yǎng)戶。

1.1.2血清樣品

采集部分規(guī)模雞場和散養(yǎng)戶雞的全血，血液凝固后以3000r/ min離心5min，吸出血清，4度保存。

1.1.3主要儀器

V型96孔微量反應板，離心機，微量振蕩器，微量移液器及相配的槍頭，滅菌離心管。

1.1.4禽流感標準抗原和陽性血清

禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原和陽性血清是購自青島易邦生物工程有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1單位抗原的配置

取出凍干的濃縮抗原，加入2ml的生理鹽水稀釋融化后，測定其抗原效價，能使雞紅細胞完全凝集的抗原的最高稀釋倍數(shù)，就為該抗原滴度紅細胞凝集效價，即沉淀的前一孔為該抗原的效價，此稀釋度為1個HA單位抗原，此稀釋度除以4即為4個HA單位抗原。

1.2.24單位抗原校正

（1）首先用微量移液槍向反應板的第二孔至第六孔加生理鹽水25μl。第一孔不加。

（2）用微量移液槍吸取4單位抗原25μl分別加入第一孔、第二孔，從第二孔開始擠壓6次混合，后吸出25μl至第三孔，依次倍比稀釋到第5孔，棄去25μl。

（3）1～6孔加25μl生理鹽水。

（4）用移液槍再吸取1%紅細胞懸液依次加入到1～6孔，每孔25μl。

（5）于微量振蕩器振蕩1min。室溫靜置30min后觀察結果。

（6）結果觀察：第一、二、三孔為完全凝聚，第四孔紅細胞為50%沉淀，第五孔為對照完全沉淀，如果出現(xiàn)以上結果，表明所配4單位抗原準確，校正成立。

1.2.3抗體檢測方法

按照國標GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術》和禽流感微量紅細胞凝聚抑制試驗（SN/T1182.2-2004）[2］規(guī)定，采用血凝抑制試驗，集中對血清樣品機械實驗室檢測，并作系統(tǒng)分析。.

2　試驗結果

⑴不同年份的見表1，由表1可見2013-2015年共檢測5888份血清，2013年的合格率為82.06%，2014年的合格率為87.15%，2015年的合格率為96.21%，近三年整體的合格率為87.41%。

表1 不同年份免疫抗體合格率情況

⑵不同免疫次數(shù)與免疫效果的關系見表2，由表2可見，免疫次數(shù)越多，合格率越高。

表2 免疫次數(shù)與免疫效果的相關分析

⑶不同飼養(yǎng)方式見表3，由表3可見，規(guī)模場的合格率遠遠高于散養(yǎng)戶的合格率。

表3 不同飼養(yǎng)方式免疫抗體合格率情況

4　分析與討論

⑴從以上數(shù)據(jù)可以看出，近三年我區(qū)的高致病性禽流感的抗體水平為87.41%，遠遠高于農業(yè)部規(guī)定的70%的要求，有些報道認為[3］，經禽流感免疫接種后的家禽7d可以產生抗體，21d能產生堅強的免疫力，但有的一定的有效免疫時間，我們通過這幾年的試驗也驗證了這一點，免疫1次的合格率僅為31.52%，而免疫2次以上的合格率高達93.83%，隨著免疫次數(shù)的增加，抗體合格率明顯升高，免疫效果與免疫次數(shù)成正相關。

⑵規(guī)模場比散養(yǎng)戶的抗體合格率高，據(jù)分析其原因是，規(guī)模場防疫意識比較強，管理實行規(guī)范化、科學化、常態(tài)化。另外，規(guī)模場的技術力量強，技術人員操作熟練，保證了禽流感的抗體合格率。而散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖量小，防疫意識差，免疫工作不到位，所以抗體水平低，存在一定的隱患。

⑶禽流感抗體監(jiān)測工作是評價和指導防控工作的重要措施，禽流感，尤其是高致病性禽流感，其危害十分嚴重，疫苗免疫是防止禽流感發(fā)生和流行的主要方法，在家禽養(yǎng)殖中，長期對AI的血清學監(jiān)測是十分必要，這對疫苗的選擇、疫苗免疫效果的考察、免疫計劃的執(zhí)行是分成有用的，通過血清學

監(jiān)測，可以準確掌握疫情動態(tài)，根據(jù)免疫抗體水平科學地進行綜合免疫預防。禽流感防控是一項長期持久的工作，但只要我們認真做好疫情的監(jiān)測，及時采取有關措施，緊急免疫預防，這樣禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消滅的。

[1]劉素梅，楊士清，張連英，等.禽流感區(qū)域控制重點環(huán)節(jié)-抗體監(jiān)測應用技術的探討[J］.當代畜牧，2006，（6）：9.

[2]國家標準化管理委員會.SN/T1182.2-2004禽流感微量紅細胞凝聚抑制試驗[S］.北京：中國標準出版社，2004.