胡洪柱　秦學(xué)娜楊 丹

（1.天津市濱海新區(qū)塘沽動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，天津　300450；2.天津市津南區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津　300350；3.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津　300402）

H5高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)及分析

胡洪柱1秦學(xué)娜2楊 丹3

（1.天津市濱海新區(qū)塘沽動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，天津300450；2.天津市津南區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津300350；3.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津300402）

為了全面了解和掌握我縣禽流感的免疫效果，科學(xué)評(píng)價(jià)基層免疫工作質(zhì)量，匯總了從2013-2015年三年的試驗(yàn)結(jié)果，共采集血樣5888份，合格數(shù)量是5147，合格率是87.41%，合格率高于農(nóng)業(yè)部要求的70%的標(biāo)準(zhǔn)，免疫抗體檢測(cè)結(jié)果分析討論如下。

高致病性禽流感抗體水平監(jiān)測(cè)與分析

禽流感是由A型流感病毒引起多種家禽及野鳥(niǎo)的高度接觸性傳染病，又名歐洲雞瘟。高致病性禽流感是世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的疫病之一[1］，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的損失。疫苗免疫是一種非常有效的預(yù)防疾病發(fā)生的方法。在我國(guó)是采取以疫苗免疫為主的綜合性防治措施來(lái)防控本病。為監(jiān)測(cè)已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗體水平，適時(shí)指導(dǎo)防疫，對(duì)防控高致病性禽流感的發(fā)生和流行具有十分重要的作用。因此，筆者對(duì)本區(qū)2013～2015年高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果分析討論如下。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物

部分規(guī)模雞場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)。

1.1.2血清樣品

采集部分規(guī)模雞場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)雞的全血，血液凝固后以3000r/ min離心5min，吸出血清，4度保存。

1.1.3主要儀器

V型96孔微量反應(yīng)板，離心機(jī)，微量振蕩器，微量移液器及相配的槍頭，滅菌離心管。

1.1.4禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原和陽(yáng)性血清

禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原和陽(yáng)性血清是購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1單位抗原的配置

取出凍干的濃縮抗原，加入2ml的生理鹽水稀釋融化后，測(cè)定其抗原效價(jià)，能使雞紅細(xì)胞完全凝集的抗原的最高稀釋倍數(shù)，就為該抗原滴度紅細(xì)胞凝集效價(jià)，即沉淀的前一孔為該抗原的效價(jià)，此稀釋度為1個(gè)HA單位抗原，此稀釋度除以4即為4個(gè)HA單位抗原。

1.2.24單位抗原校正

（1）首先用微量移液槍向反應(yīng)板的第二孔至第六孔加生理鹽水25μl。第一孔不加。

（2）用微量移液槍吸取4單位抗原25μl分別加入第一孔、第二孔，從第二孔開(kāi)始擠壓6次混合，后吸出25μl至第三孔，依次倍比稀釋到第5孔，棄去25μl。

（3）1～6孔加25μl生理鹽水。

（4）用移液槍再吸取1%紅細(xì)胞懸液依次加入到1～6孔，每孔25μl。

（5）于微量振蕩器振蕩1min。室溫靜置30min后觀察結(jié)果。

（6）結(jié)果觀察：第一、二、三孔為完全凝聚，第四孔紅細(xì)胞為50%沉淀，第五孔為對(duì)照完全沉淀，如果出現(xiàn)以上結(jié)果，表明所配4單位抗原準(zhǔn)確，校正成立。

1.2.3抗體檢測(cè)方法

按照國(guó)標(biāo)GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術(shù)》和禽流感微量紅細(xì)胞凝聚抑制試驗(yàn)（SN/T1182.2-2004）[2］規(guī)定，采用血凝抑制試驗(yàn)，集中對(duì)血清樣品機(jī)械實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，并作系統(tǒng)分析。.

2　試驗(yàn)結(jié)果

⑴不同年份的見(jiàn)表1，由表1可見(jiàn)2013-2015年共檢測(cè)5888份血清，2013年的合格率為82.06%，2014年的合格率為87.15%，2015年的合格率為96.21%，近三年整體的合格率為87.41%。

表1 不同年份免疫抗體合格率情況

⑵不同免疫次數(shù)與免疫效果的關(guān)系見(jiàn)表2，由表2可見(jiàn)，免疫次數(shù)越多，合格率越高。

表2 免疫次數(shù)與免疫效果的相關(guān)分析

⑶不同飼養(yǎng)方式見(jiàn)表3，由表3可見(jiàn)，規(guī)模場(chǎng)的合格率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于散養(yǎng)戶(hù)的合格率。

表3 不同飼養(yǎng)方式免疫抗體合格率情況

4　分析與討論

⑴從以上數(shù)據(jù)可以看出，近三年我區(qū)的高致病性禽流感的抗體水平為87.41%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的要求，有些報(bào)道認(rèn)為[3］，經(jīng)禽流感免疫接種后的家禽7d可以產(chǎn)生抗體，21d能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫力，但有的一定的有效免疫時(shí)間，我們通過(guò)這幾年的試驗(yàn)也驗(yàn)證了這一點(diǎn)，免疫1次的合格率僅為31.52%，而免疫2次以上的合格率高達(dá)93.83%，隨著免疫次數(shù)的增加，抗體合格率明顯升高，免疫效果與免疫次數(shù)成正相關(guān)。

⑵規(guī)模場(chǎng)比散養(yǎng)戶(hù)的抗體合格率高，據(jù)分析其原因是，規(guī)模場(chǎng)防疫意識(shí)比較強(qiáng)，管理實(shí)行規(guī)范化、科學(xué)化、常態(tài)化。另外，規(guī)模場(chǎng)的技術(shù)力量強(qiáng)，技術(shù)人員操作熟練，保證了禽流感的抗體合格率。而散養(yǎng)戶(hù)，養(yǎng)殖量小，防疫意識(shí)差，免疫工作不到位，所以抗體水平低，存在一定的隱患。

⑶禽流感抗體監(jiān)測(cè)工作是評(píng)價(jià)和指導(dǎo)防控工作的重要措施，禽流感，尤其是高致病性禽流感，其危害十分嚴(yán)重，疫苗免疫是防止禽流感發(fā)生和流行的主要方法，在家禽養(yǎng)殖中，長(zhǎng)期對(duì)AI的血清學(xué)監(jiān)測(cè)是十分必要，這對(duì)疫苗的選擇、疫苗免疫效果的考察、免疫計(jì)劃的執(zhí)行是分成有用的，通過(guò)血清學(xué)

監(jiān)測(cè)，可以準(zhǔn)確掌握疫情動(dòng)態(tài)，根據(jù)免疫抗體水平科學(xué)地進(jìn)行綜合免疫預(yù)防。禽流感防控是一項(xiàng)長(zhǎng)期持久的工作，但只要我們認(rèn)真做好疫情的監(jiān)測(cè)，及時(shí)采取有關(guān)措施，緊急免疫預(yù)防，這樣禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消滅的。

[1]劉素梅，楊士清，張連英，等.禽流感區(qū)域控制重點(diǎn)環(huán)節(jié)-抗體監(jiān)測(cè)應(yīng)用技術(shù)的探討[J］.當(dāng)代畜牧，2006，（6）：9.

[2]國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).SN/T1182.2-2004禽流感微量紅細(xì)胞凝聚抑制試驗(yàn)[S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.