貢 嘎　益西措姆　扎西拉姆　德吉卓嘎

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝　860000）

藏雞大腸桿菌分離鑒定及耐藥性研究

貢 嘎益西措姆扎西拉姆德吉卓嘎

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

本文從西藏林芝某農(nóng)戶家采集藏雞新鮮無(wú)污染糞便樣品50份，組織樣品10份，分離鑒定細(xì)菌后，采用WHO推薦的K-B紙片法測(cè)定常用抗菌藥物的敏感性。結(jié)果顯示，60份樣品中分離鑒定出10株藏雞大腸桿菌。這些菌株對(duì)16種抗菌藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥。其中對(duì)氨芐西林和頭孢噻吩耐藥率最高，達(dá)100%，對(duì)頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢呋辛、妥布霉素、鏈霉素和哌拉西啉耐藥率較高，達(dá)80%，對(duì)頭孢曲松、頭孢唑啉耐藥率為70%，對(duì)阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素耐藥率為60%，對(duì)慶大霉素耐藥率為50%，但耐藥菌株對(duì)頭孢西丁和頭孢他啶敏感性較高，達(dá)90%。由此可見，藏雞大腸桿菌分離株對(duì)常用抗菌藥存在著一定的耐藥現(xiàn)象。

藏雞大腸桿菌分離鑒定耐藥性

雞大腸桿菌病是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的重要細(xì)菌性傳染病，規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)細(xì)菌性疫病的發(fā)生以大腸桿菌為主。該病血清型多樣、抗原性復(fù)雜、臨床癥狀和病理變化多變，不同品種、不同日齡的雞群均可發(fā)病，輕者可以引起雞群生產(chǎn)性能下降，重者導(dǎo)致發(fā)病雞大批死亡，尤其對(duì)雛雞危害更大。臨床上經(jīng)常使用大量的抗菌藥物，導(dǎo)致不斷出現(xiàn)耐藥大腸桿菌株，從而也不斷擴(kuò)大了耐藥譜[1- 4］。

2015年9月，西藏林芝某農(nóng)戶藏雞群發(fā)生了嚴(yán)重腹瀉并伴有血便現(xiàn)象，嚴(yán)重者為死亡。其中1日齡經(jīng)用抗生素治療后效果不佳。本文從該農(nóng)戶腹瀉雞群疑似患雞大腸桿菌病的新鮮無(wú)污染腹瀉物中分離大腸桿菌，對(duì)其進(jìn)行鑒定，以期了解藏雞大腸桿菌耐藥現(xiàn)象，進(jìn)而為藏雞大腸桿菌防控策略的制定提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

從西藏林芝采集藏雞新鮮無(wú)污染糞便（血便），裝入自封袋，編號(hào)，待檢。

1.2主要試劑

（1）普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅亞甲藍(lán)平板均由本實(shí)驗(yàn)室制備[5］。

（2）藥敏紙片

藥敏紙片：共16種，購(gòu)自杭州濱和生物試劑有限公司。

1.3細(xì)菌的分離與鑒定

1.3.1分離培養(yǎng)

無(wú)菌取出待檢糞樣，接種在普通平板上，在37℃培養(yǎng)24h，觀察生長(zhǎng)情況，并進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.3.2鑒定

挑取普通平板上典型菌落分別接種在麥康凱瓊脂平板及伊紅亞甲藍(lán)平板上畫線，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。

1.3.3藥敏試驗(yàn)

無(wú)菌操作選取分離細(xì)菌純培養(yǎng)物致密畫線于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，將臨床常用的16種抗生素藥敏紙片貼于瓊脂平板表面中央處，倒置平皿，放于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后觀察結(jié)果。

1.4抑菌結(jié)果的判定

參照 NCCLS（2013）公布的標(biāo)準(zhǔn)以敏感（Susceptible）、中介（Intermediate）、耐藥（Resistant）三種形式對(duì)抑菌圈大小做出判定，個(gè)別抑菌圈大小參考相關(guān)文獻(xiàn)做出判定，具體判定標(biāo)準(zhǔn)見表 1。

2　結(jié)果與分析

2.1大腸桿菌分離鑒定

（1）在普通平板上生長(zhǎng)出圓形、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落。經(jīng)革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性兩端鈍圓的直桿菌。

（2）在麥康凱瓊脂平板及伊紅亞甲藍(lán)平板上分別形成紅色菌落和帶金屬閃光的菌落。

表1 藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

2.2大腸桿菌體外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)選用16種抗菌藥物，結(jié)果顯示，藏雞耐藥大腸桿菌對(duì)同類藥物之間存在交又耐藥性。

2.3藏雞耐藥大腸桿菌的耐藥率

2.3.1藏雞大腸桿菌的耐藥情況

來(lái)自西藏林芝地區(qū)10個(gè)牦牛耐藥大腸桿菌對(duì) 16 種抗菌藥物有不同程度耐藥性。見表2，圖1。

圖1　雞大腸桿菌對(duì)16種抗菌藥的耐藥率（%）

表2 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果

2.3.210株耐藥菌株的耐藥譜

10 株藏雞耐藥大腸桿菌對(duì) 16 種抗菌藥物有不同程度的耐藥性，且多重耐藥現(xiàn)象較重，最少為 6 種，最多為 15種。11耐菌株所占總菌株比例最大為 40%；其次是 6耐為 20%；10耐、12耐、14耐、15耐菌株均占總菌株的 10%。見圖 1-2。

圖2 耐藥性大腸桿菌的各耐藥譜占耐藥菌的比例

表3 耐藥大腸桿菌的多重耐藥率

3　討論

已有研究表明，我國(guó)多重耐藥現(xiàn)象普遍嚴(yán)重[ 5］。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)細(xì)菌分離后在麥康凱、伊紅美蘭培養(yǎng)基上純培養(yǎng)以及細(xì)菌革蘭氏染色鏡檢后確定為10株大腸桿菌。對(duì)所分離的10株藏雞大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，結(jié)果顯示16種抗菌藥物的耐藥率較高，作者認(rèn)為，由于西藏養(yǎng)殖戶對(duì)細(xì)菌耐藥性的認(rèn)識(shí)不夠清楚，因此在食品動(dòng)物養(yǎng)殖中普遍存在濫用抗生素以及嚴(yán)重缺乏聯(lián)合、交叉、輪換等用藥方式來(lái)減少細(xì)菌的耐藥率的意識(shí)。

本實(shí)驗(yàn)采用WHO 推薦的 K-B紙片法檢測(cè)10株大腸桿菌對(duì)16種抗菌藥物的敏感性。其中對(duì)氨芐西林和頭孢噻吩耐藥率最高，達(dá)100%，對(duì)頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢呋辛、妥布霉素、鏈霉素和哌拉西啉耐藥率較高，達(dá)80%，對(duì)頭孢曲松、頭孢唑啉耐藥率為70%，對(duì)阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素耐藥率為60%，對(duì)慶大霉素耐藥率為50%，但耐藥菌株對(duì)頭孢西叮和頭孢他啶敏感性較高，達(dá)90%。

獸醫(yī)臨床用藥應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，有針對(duì)性地使用，而且必須經(jīng)常更換抗菌藥種類，以免產(chǎn)生新的耐藥菌株，同時(shí)較好地控制畜禽大腸桿菌病，只有這樣才能有針對(duì)性的選用敏感藥物。

試驗(yàn)結(jié)果顯示藏雞大腸桿菌對(duì)常用抗菌藥物耐藥率較高，耐藥譜較廣。所以對(duì)病原菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)勢(shì)在必行。因此建議在獸醫(yī)臨床上應(yīng)選停用耐藥性極強(qiáng)的藥物，應(yīng)選擇敏感性較高的藥物來(lái)針對(duì)性治療藏雞大腸桿菌病。

[1]張曉紅.雞大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2013，30（1）：65-66.

[2]張遂平，楊建奮，邵艷華.雞大腸桿菌分離及藥敏試驗(yàn)研究[J］.中國(guó)畜牧業(yè)，2013（2）：62-63.

[3]劉娣琴，楊紅梅，賈志江.雞大腸桿菌病的防治誤區(qū)與對(duì)策[J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2012，31（5）：89-89.

[4]雷崇良.雞沙門菌、大腸桿菌和傳支混合感染的診治[J］.中國(guó)家禽，2004，26（6）：24.

[5]呂殿紅，曾振靈，陳杖榴，等.大腸埃希菌多重耐藥性的形成機(jī)制[J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（7）：76-81.

貢嘎（1983-），男，藏族，講師，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)碩士，研究方向:人畜共患病。

2015年西藏自治區(qū)大學(xué)生創(chuàng)新性項(xiàng)目