段麗君，姚梓平，朱紅英，薛鳳玲

(新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科,烏魯木齊　830054)

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·基礎醫(yī)學研究·

不同電針刺激強度對急性腦缺血再灌注大鼠NSS與腦組織含水量的影響

段麗君，姚梓平，朱紅英，薛鳳玲

(新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科,烏魯木齊830054)

目的研究不同電針刺激強度對急性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺損評分(NSS)與腦組織含水量的影響。方法將50只8周齡健康大鼠隨機分為5組：正常組、假手術組、模型對照組、弱電針刺激組、強電針刺激組，每組10只，后3組建立大腦中動脈缺血(MCAO)再灌注模型，治療組在缺血再灌注(I/R)6 h 后開始針刺。24 h二次針刺后行神經(jīng)功能缺損評分，然后斷頭取腦，采用干濕法測定腦組織含水量；對各指標進行統(tǒng)計學分析。結果(1)各干預組大鼠神經(jīng)功能缺損情況均較前改善(P<0.01)，但各組間無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。(2)弱電針刺激組腦組織含水量較模型對照組無明顯變化(P>0.05)，強電針刺激組腦組織含水量較模型對照組明顯降低(P<0.05)，強電針刺激組與弱電針刺激組腦組織含水量無明顯差異(P>0.05)。結論急性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺損評分在24 h會有所改善，因此不能說明24 h大鼠NSS的改善是電針的作用效果。強電針刺激能通過降低MCAO再灌注模型大鼠腦組織含水量從而對急性腦缺血再灌注大鼠起保護作用。

腦缺血再灌注；電針；NSS；腦組織含水量

急性腦梗塞是神經(jīng)內(nèi)科常見病，其高致殘率、致死率給社會和家庭帶來沉重的經(jīng)濟與心理負擔。目前針灸對急性腦缺血的治療效果日趨肯定，但針刺手法的不可控性及不可復制性成為針刺科研的一大瓶頸，而電針的運用成為解決這一問題的關鍵，其定性、定量、客觀化的描述是針刺科學化研究的基礎，其主要包括波形、頻率、電流強度、持續(xù)時間，其中以電流強度尤為重要，成為影響針刺療效的重要因素[1]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)強電針刺激(以肢體震顫或肌肉出現(xiàn)輕微強直收縮為度，并電流強度區(qū)間為4～7 mA)能通過降低腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應，從而對大鼠急性腦缺血損傷起保護作用[2-3]。

臨床上最直觀評價治療急性腦梗塞療效的方法是神經(jīng)功能的恢復及腦水腫的改善程度,可作為終點效應指標。本研究參照Longa等[4]的改良線栓法復制大鼠大腦中動脈缺血(MCAO)再灌注模型，通過弱、強2種刺激強度刺激大鼠的百會穴及大椎穴，觀察大鼠腦缺血再灌注(I/R) 24 h后神經(jīng)功能缺損情況及腦組織含水量的變化，探索最佳針刺強度以提高臨床療效。

1　材料與方法

1.1實驗材料BL310電子天平，101-As-3電熱恒溫干燥箱(上海潤東榮豐)，KWD-808Ⅰ型電針儀(常州英迪)，手術顯微鏡(德國carl zeiss)。

1.2實驗動物與分組健康SD大鼠，雄性，8周齡，體質量220～280 g，由新疆維吾爾自治區(qū)實驗動物研究中心提供，動物許可證號：SYXK-(新)2003-0003，倫審號：IACUC-20110124002)。大鼠按質量分層，隨機分為5組：正常組、假手術組、模型對照組、弱電針刺激組(模型組+弱電針刺激)、強電針刺激組(模型組+強電針刺激)，每組10只。

1.3模型制備方法參照Longa等[4]的改良線栓法復制MCAO再灌注模型。按0.3 mL/100 g體質量腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，備皮，消毒，在手術顯微鏡下作頸部正中切口，暴露并分離右側頸總動脈，剝離與其伴行的迷走神經(jīng)，向頭端分離頸外動脈、頸內(nèi)動脈，暴露頸內(nèi)動脈的分支―顳額動脈并結扎，結扎頸外動脈。顯微動脈夾夾閉頸總動脈和頸內(nèi)動脈。將頸外動脈從結扎處近心端剪斷，自斷口將前端燒成球型的4-0外科尼龍縫合線插入(預先在尼龍縫合線上做好標記刻度)，進入頸總動脈，轉向大鼠頭端到達頸內(nèi)、外動脈分叉處，進入頸內(nèi)動脈。絲線在頸外動脈斷端扎一松結套住此尼龍線，松開動脈夾，向上將尼龍線推入，直達大腦中動脈的起始部，推入線長(18.0±0.5) mm (從頸總動脈分叉處算起)。結扎頸外動脈殘端，縫合切口。術中觀察大鼠呼吸及心率變化。手術動物清醒后放回籠中常規(guī)飼養(yǎng)，阻斷血流2 h 后，拔掉線栓實現(xiàn)缺血再灌注。假手術組只做頸部正中切口暴露并分離頸動脈，不予栓塞。

1.4神經(jīng)功能缺損評分模型組造模成功后，即缺血2 h后再灌注后按5分制標準[4]評分(此為治療前)：0分：無神經(jīng)缺損癥狀；1分：不能伸展對側前爪；2分：行走時向偏癱側轉圈；3分：向偏癱側傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識喪失。將造模成功(1～4分)的大鼠用于實驗。針刺后，即24 h時間點再次行神經(jīng)功能缺損評分(NSS)(此為治療后)。

1.5治療方法大鼠針灸穴位定位參考《實驗針灸學》[5]，“百會”位于大鼠頭頂部兩耳間連線的中點，“大椎”位于大鼠后背頸部第7頸椎凹陷中。大鼠取俯臥位固定，選用“華佗牌”不銹鋼針，0.25 mm×25 mm毫針?！鞍贂逼酱蹋按笞怠毙贝?約30°角)，深度均為0.5寸。捻轉刺激30 s后，針柄接電針儀，調整至各強度參數(shù)。弱電針參數(shù)：以胡須微動或肌肉輕微蠕動為度，并將電流強度控制在1～3 mA；強電針參數(shù)：以肢體震顫或肌肉出現(xiàn)輕微強直收縮為度，并將電流強度控制在4～7 mA；波形：疏密波，頻率：2～15 Hz ，留針時間：30 min；電針組于再灌注6 h后開始針刺，24 h后取材，在取材前2 h再針刺1次。正常組不予任何處理；假手術組作頸部切口，暴露并分離右側頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈、顳額動脈；模型對照組大鼠只捆綁固定，不針刺。

1.6腦組織含水量測定腦缺血再灌注24 h后行NSS評分，然后處死大鼠，立即用止血鉗鉗除顱骨取腦，用0.9%生理鹽水沖洗后用濾紙吸干腦組織表面水分，放入電子天平中稱其濕重，后將腦組織置于102℃恒溫干燥箱內(nèi)24 h至恒重后，稱其干重(丟棄在制作過程中損壞的大腦)，計算腦組織含水量，含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%。

2　結果

2.1不同刺激強度電針對大鼠NSS的影響正常組及假手術組未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀。模型大鼠造模成功后出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀，治療前NSS無明顯差異(P>0.05)。腦缺血再灌注24 h后，模型大鼠神經(jīng)功能缺損較治療前均明顯改善(P<0.01)；但弱電針刺激組、強電針刺激組與模型對照組間NSS無明顯差別(P>0.05)，見表1。說明模型大鼠在缺血再灌注24 h內(nèi)具有很強的自我恢復能力。

表1　各干預組大鼠NSS比較(±s)

2.2不同刺激強度電針對大鼠腦組織含水量的影響模型對照組大鼠腦組織含水量較正常組有所升高(P<0.05)，表示模型建立成功，I/R后24 h腦水腫出現(xiàn)。弱電針刺激組與模型對照組腦組織含水量相比較無明顯差別(P>0.05)；強電針刺激組腦組織含水量低于模型對照組(P<0.05)；弱、強電針刺激組組間比較，腦組織含水量無明顯差別(P>0.05)，結果見表2。

表2　各組腦組織含水量(%,±s)

注：與正常組比較，*P<0.05 ，與模型組比較，▲P<0.05。

3　討論

急性腦缺血后大鼠即出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀，而腦梗死后6 h則見細胞周圍水腫發(fā)生，24 h水腫才較明顯[6]。孫世曉等[7]研究發(fā)現(xiàn)：在大鼠急性腦缺血24 h以內(nèi)，電針干預能改善神經(jīng)功能缺損癥狀。劉喆等[8]發(fā)現(xiàn)大鼠神經(jīng)功能缺損可隨缺血時間的延長而有不同程度的自愈趨勢，而電針的效果為使不同缺血時相的損害減輕。

急性腦缺血屬于中醫(yī)“中風”的范疇，在中風急性期予以針刺治療是安全而有效的。根據(jù)中醫(yī)“急則治標、緩則治本”、“虛者補之、實則瀉之”的理論，在中風急性期，應予以強刺激瀉實，且 “百會”與“大椎” 在中醫(yī)古籍中記載為急癥常用穴，兩穴配合，一開一補，標本兼顧。陳楚淘等[9]發(fā)現(xiàn)針刺大椎、百會、人中穴可改善大鼠神經(jīng)功能的缺損。

本研究結果顯示，在急性腦缺血再灌注早期大鼠就已出現(xiàn)腦水腫。而強電針刺激“百會”和“大椎”可通過降低腦水腫，影響顱內(nèi)壓，可改善腦I/R損傷而起到腦保護作用。臨床實踐證實刺激強度對針刺療效尤為重要，成為決定療效的重要可控制因素。本實驗對于刺激強度的質量控制，采用電流強度及受者感受反應相結合的方法，較前更為客觀。

模型組大鼠神經(jīng)功能缺損情況在24 h內(nèi)隨時間延長可在一定范圍內(nèi)較前有所恢復，電針刺激對其影響不大，可能與大鼠強大的自我恢復能力有關，或者體內(nèi)保護性因子反饋性調節(jié)。因此不能說明在腦缺血再灌注24 h大鼠NSS的改善是電針的作用效果。分析原因：大鼠與人類的發(fā)病機制是有區(qū)別的，本實驗選用的是健康大鼠，大鼠本身對環(huán)境適應力、抗病力較強，而人類腦梗塞常有吸煙、飲酒、環(huán)境污染等危險因素，以及動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、冠心病等基礎疾病，屬于非健康人群。

在臨床實踐過程中，我們發(fā)現(xiàn)，針刺治療后短時間內(nèi)對偏癱病人的神經(jīng)功能恢復效果明顯，但隨著時間延長，這種效果會減弱，但經(jīng)反復刺激，總體神經(jīng)功能的恢復較治療前明顯。因此，即使出現(xiàn)陰性結果，也不能否認針刺的治療效果。在大鼠發(fā)病中，本研究還發(fā)現(xiàn)隨著時間的延長，神經(jīng)功能缺損程度可能會進一步加重，電針對NSS改善可能有所顯現(xiàn)，本課題組將在后續(xù)實驗中進一步探討。

[1]胡銀娥,楊華元,王頻.不同電針參數(shù)效應研究進展及思考[J].上海中醫(yī)藥大學學報,2007,21(4):73.

[2]段麗君,朱紅英,李和平.不同針刺強度對急性腦缺血再灌注大鼠TNF-α、IL-1β含量的影響[J].新疆醫(yī)科大學學報,2012,35(5):604-607.

[3]段麗君,姚梓平,薛鳳玲.不同電針刺激強度對急性腦缺血再灌注大鼠IL-1β、IL-10的影響[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2016,35(5):125-126.

[4]Longa EZ,Weinstein PR,Carlson S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rat[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[5]李忠仁.實驗針灸學[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:327-329.

[6]龍潔,譯.腦血管疾病[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社,2004:3.

[7]孫世曉,劉泓雨,夏學麗,等.不同時間窗電針對局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損及腦梗死體積的影響[J].中醫(yī)藥報,2010,38(5):47-48.

[8]劉喆,賴新生.電針對SD大鼠MCAO模型神經(jīng)功能缺損及腦梗塞體積的影響[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,2006,12(6):454-456.

[9]陳楚淘,田浩梅,張泓,等.針刺對大鼠局灶性腦缺血后神經(jīng)功能缺損及梗死面積的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學學報,2011,31(7):63-66.

(本文編輯張巧蓮)

The influence of different intensity of electroacupuncture on NSS and the content of tissue water in cerebral ischemia reperfusion rats

DUAN Lijun,YAO Ziping,ZHU Hongying,XUE Fengling

(Department of Traditional Chinese Medicine，The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumq 830054,China)

ObjectiveTo study the changes of neurological deficit score (NSS) and the content of tissue water through the different intensity of electroacupuncture(EA) in rats with acute cerebral ischemia reperfusion.Methods50 (fifty) eight-week-old and health rats were equally divided into 5 groups randomly:the normal group,the sham-operation group,control group,weak EA stimulation group and strong EA stimulation group.The middle cerebral artery occlusion (MCAO) and reperfusion model were established in the latter three groups.After 6 hours,the weak electroacupuncture stimulation and strong electroacupuncture stimulation were implemented in two model groups,respectively,which were weak EA stimulation group and strong EA stimulation group,while no treatmentment was on the other model group as control group.After 24 hours,the same acupunctures were implemented in those two treament groups,then the neurological deficit were scored and the brains were collected.The brain water content were detected by wet and dry method and each indicator were analysised.Results(1) The NSS were significantly improved in each interventional group (P<0.01) compare with the treatment,however,there were no differences in each group (P>0.05).(2) Compared with the control group,there were no change in the content of tissue water in brain of the weak EA group (P>0.05).However,it decreased significantly (P<0.05) in the strong EA group.Compared with the weak EA Group,there were no obvious differences in the content of tissue water in brain of the strong EA group (P>0.05).ConclusionThe neurological deficit score of acute cerebral ischemia-reperfusion rats was improved in 24 hours,so it can not be explained that the improvement of NSS in 24 h is the effect of electroacupuncture.Strong electro-acupuncture stimulation can protect rats from cerebral ischemia-reperfusion injury by decreasing the water content of brain tissue in MCAO-reperfusion model rats.

cerebral ischemia reperfusion; electroacupuncture; NSS; brain tissue water content

新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)藥管理局中醫(yī)民族醫(yī)藥青年科技人才專項課題(2010ZMY21)

段麗君(1986-)，女，住院醫(yī)師，碩士，研究方向：中醫(yī)治療腦血管病。

薛鳳玲，女，主治醫(yī)師，碩士，研究方向：中醫(yī)治療腦血管病，E-mail：ludonren01@126.com。

R2

A

1009-5551(2016)11-1420-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.11.018

2016-05-20]