王志博，劉明廷，劉海峰，任清明，張建濤，王洪斌

（東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

雙孔腹腔鏡貓卵巢子宮切除術(shù)對炎性反應(yīng)的影響

王志博，劉明廷，劉海峰，任清明，張建濤，王洪斌

（東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

為了研究雙孔腹腔鏡貓卵巢子宮切除術(shù)對炎性反應(yīng)的影響，并和開腹卵巢子宮切除術(shù)進行對比，為腹腔鏡手術(shù)的發(fā)展提供科學理論依據(jù)。方法：術(shù)后測定白細胞（WBC）和白細胞介素-6（IL-6）的水平。結(jié)果：顯示腹腔鏡手術(shù)組（LOVH）的WBC和IL-6在各時間點均低于開腹手術(shù)組（OVH）。結(jié)論：雙孔腹腔鏡貓卵巢子宮切除手術(shù)引起的機體炎性反應(yīng)程度比開腹手術(shù)輕，有利于手術(shù)后機體的更快恢復。

腹腔鏡；貓；卵巢子宮切除術(shù)；炎性反應(yīng)

貓卵巢子宮切除常用于母貓的絕育，控制母貓發(fā)情、產(chǎn)仔，減少發(fā)情時對畜主帶來的不便，限制流浪貓過度繁殖，對防治狂犬病、弓形蟲病的傳播有積極意義。隨著社會經(jīng)濟的不斷發(fā)展，動物福利意識的日漸普及，腹腔鏡手術(shù)因其術(shù)后疼痛小、恢復時間短、美容效果好等優(yōu)點逐漸受到人們的關(guān)注，并在寵物絕育術(shù)方面嶄露頭角。

本試驗采用雙孔腹腔鏡技術(shù)與常規(guī)開腹手術(shù)分別對貓進行卵巢子宮切除，評估雙孔腹腔鏡手術(shù)方法在小動物臨床應(yīng)用中的可行性和安全性，以及對貓免疫應(yīng)激水平的影響，從而為腹腔鏡絕育手術(shù)在獸醫(yī)領(lǐng)域的推廣提供科學依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實驗動物12只本地健康成年家貓，雌性，體重范圍在2.5～4.0 kg，營養(yǎng)狀況良好，經(jīng)臨床和實驗室檢驗健康，同一條件下飼養(yǎng)1個月以上。

1.2設(shè)備及藥品腹腔鏡手術(shù)相關(guān)試驗器材；常規(guī)開腹手術(shù)器械；智能型高頻電刀裝置UES-30型，日本Olympus公司生產(chǎn)；Datex-Ohmeda型重癥監(jiān)護儀，芬蘭Datex Engstrom公司生產(chǎn)；邁瑞B(yǎng)C-2600 Vet Anto Hematology Analyzer，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)。

甲醛，濟南白云有機化工有限公司生產(chǎn)；異氟烷，河北九派制藥有限公司生產(chǎn)；丙泊酚，西安立邦制藥有限公司生產(chǎn)；硫酸阿托品，河南省許昌市華仁制藥有限公司生產(chǎn)；氨芐西林鈉，哈藥集團制藥總廠生產(chǎn)。人白細胞介素-6（IL-6）ELISA檢測試劑盒，上海森雄生物科技公司生產(chǎn)。

1.3方法將12只貓隨機分為腹腔鏡卵巢子宮切除組（LOVH）和開腹卵巢子宮切除組（OVH）。貓在試驗前禁食禁水12 h。麻醉前皮下注射阿托品（0.02 mg/kg體重），15 min后靜脈注射丙泊酚（2.5 mg/kg體重）進行誘導麻醉，行氣管插管后，連接呼吸麻醉機，呼吸頻率定為12次/min，潮氣量為17 mL/kg，用異氟烷維持術(shù)中麻醉。貓取仰臥位保定，連接重癥監(jiān)護儀全程監(jiān)護。

LOVH組：采用“雙孔法”，第一套管位置（A）：腹正中線，臍下lcm；第二套管位置（B）：腹正中線，倒數(shù)第一對乳頭前0.5～1 cm。A套管進腹腔鏡，B套管進腹腔鏡器械。建立氣腹后氣腹壓維持在8 mmHg。在臍部兩側(cè)3～4 cm處分別設(shè)置牽引線，在腹腔鏡監(jiān)視下，助手在腹壁血管較少的位置刺入帶有絲線的棱針，術(shù)者用組織抓鉗將卵巢抓起，并將懸吊韌帶掛在棱針上，注意避免棱針刺破卵巢血管。卵巢固定完成后，進行導尿，待膀胱排空后利用牽引線固定子宮。用雙極電凝對兩側(cè)卵巢進行卵巢動、靜脈凝血，然后用腹腔鏡剪刀剪斷，用單極電凝切割子宮闊韌帶，用雙極電凝凝固闊韌帶上的血管，用雙極電凝切割子宮體，最后將切除的卵巢和子宮從套管口取出。觀察無出血后進行縫合。

OVH組：貓麻醉后仰臥保定，從臍部沿腹正中線向下做一3～4 cm切口，分別結(jié)扎卵巢動靜脈和子宮并切斷取出。觀察無出血后進行縫合。

術(shù)后2 h給予飲水，術(shù)后6 h給予喂食。每組貓術(shù)后肌肉注射氨芐西林鈉（20 mg/kg·d），連續(xù)注射5 d。術(shù)后7～l0 d拆線。

1.4血液檢查對所有試驗貓分別于術(shù)前、術(shù)后第1、2、3、4、5、6、7天清晨喂食前抽取前肢靜脈血，立刻使用血球分類計數(shù)儀進行檢測，主要檢測白細胞（WBC）。

對所有試驗貓分別于術(shù)前、術(shù)后即刻、術(shù)后2 h、術(shù)后4 h、術(shù)后第1、2、3天清晨喂食前抽取頸靜脈血2 mL，靜置30 min后，于3 000 r/min（4℃）離心10 min，吸取上層血清，-80℃保存，等待測定白介素-6（IL-6）。

1.5統(tǒng)計分析用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，差異顯著性分析采用單因素方差分析（one-way ANOVA），數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示。

2　結(jié)果與分析

2.1手術(shù)結(jié)果本試驗成功完成了雙孔腹腔鏡卵巢子宮切除術(shù)和開腹卵巢子宮切除術(shù)。其中腹腔鏡組平均手術(shù)時間為60 min（50～70 min）。開腹組平均時間為40 min（30～50 min）。腹腔鏡組采用“雙孔法”完成，手術(shù)切口總長度為1 cm，開腹組切口總長度為3～4 cm。兩組手術(shù)術(shù)后2 h，所有貓都表現(xiàn)出弓腰呻吟的腹痛癥狀，當天可進食少量食物。腹腔鏡組和開腹術(shù)組，術(shù)后刀口均愈合良好，未出現(xiàn)感染。

2.2手術(shù)對白細胞（WBC）的影響LOVH組和OVH組術(shù)后WBC都是先升高然后逐漸降低。OVH組WBC水平始終高于LOVH組。

LOVH組WBC在術(shù)后1 d達到最高，與術(shù)前比差異極顯著（P＜0.01），術(shù)后2 d有所下降，和術(shù)前比差異極顯著（P＜0.01）。術(shù)后4、5、6 d逐漸降低，術(shù)后4、5 d和術(shù)后1 d比差異顯著（P＜0.05或P＜0.01），術(shù)后7 d恢復到術(shù)前水平（P＞0.05）。

OVH組術(shù)后WBC升高明顯，術(shù)后2 d達最高值，和術(shù)前比差異極顯著（P＜0.01），術(shù)后3、4、5、6、7 d略有下降，和術(shù)后2 d相比差異不顯著（P＞0.05）。

組間比較，OVH組始終高于LOVH組，術(shù)后7 d差異極顯著（P＜0.01）。結(jié)果顯示，LOVH相比OVH對白細胞的影響小，炎性應(yīng)激?。ㄒ姳?）。

2.3手術(shù)對白細胞介素-6（IL-6）的影響兩組術(shù)后IL-6都是先升高后逐漸降低。OVH組IL-6始終高于LOVH組。

表1　和對貓白細胞的影響　?。?，n=6）（×109/L）

表1　和對貓白細胞的影響　?。?，n=6）（×109/L）

*：組內(nèi)比較差異顯著0.01＜P＜0.05；**：組內(nèi)比較差異極顯著P＜0.01；##：組間比較差異極顯著P＜0.01

術(shù)前　　術(shù)后1 d　　術(shù)后2 d　　術(shù)后3 d　　術(shù)后4 d　　術(shù)后5 d　　術(shù)后6 d　　術(shù)后7 d LOVH　16.08±2.06　29.06±4.06**　27.40±3.90**　23.44±5.84*　19.60±4.67　19.14±4.71　19.02±5.23　15.50±2.55 OVH　17.82±1.72　32.03±6.40*　34.68±4.42**　27.28±2.82*　25.98±1.60　25.853.35　25.98±3.88　25.28±4.35##

LOVH組術(shù)后4 h IL-6水平升至最高，與術(shù)前相比差異顯著（P＜0.05或P＜0.01）。隨后IL-6降低，術(shù)后3 d降至術(shù)前水平（P＞0.05）。術(shù)后3 d IL-6水平與術(shù)后4 h相比，差異顯著（P＜0.05或P＜0.01）。

OVH組術(shù)后2 h升至最高水平與術(shù)前相比差異極顯著（P＜0.01）。術(shù)后4 h、1、2、3 d IL-6逐漸降低，相比術(shù)后2 h，差異顯著（P＜0.05或P＜0.01），相比術(shù)前依然顯著偏高（P＜0.01）。

組間相比，OVH組始終高于LOVH組，術(shù)后即刻、2 h、1 d差異極顯著（P＜0.01），術(shù)后4 h、2、3 d差異顯著（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果表明，LOVH對機體造成的應(yīng)激相比OVH輕微，損傷較?。ㄒ姳?）。

3　討論

WBC和IL-6是重要的全身應(yīng)激反應(yīng)指標WBC能吞噬異物產(chǎn)生抗體，在機體損傷治愈抗御病原的入侵和對疾病的免疫方面起著重要的作用。人體內(nèi)WBC總數(shù)、種類以及百分比是相對穩(wěn)定的，機體發(fā)生炎癥或創(chuàng)傷都可引起WBC總數(shù)和不同種類WBC百分比發(fā)生變化。

表2　LOVH和OVH對貓白介素-6的影響　?。?，n=6）（μg/mL）

表2　LOVH和OVH對貓白介素-6的影響　?。?，n=6）（μg/mL）

*：組內(nèi)比較差異顯著P＜0.05或P＜0.01；**：組內(nèi)比較差異極顯著P＜0.01；#：組間比較差異極顯著P＜0.05或P＜0.01；##：組間比較差異極顯著P＜0.01

術(shù)前　　術(shù)后即刻　　術(shù)后2 h　　術(shù)后4 h　　術(shù)后1 d　　術(shù)后2 d　　術(shù)后3 d LOVH 19.35±1.25　20.25±4.14　21.25±2.75　30.87±4.04*　27.07±1.90*　20.52±0.90　19.30±2.06 OVH　18.93±1.67　48.60±5.59**##　58.68±9.85**##　44.63±3.69**#　44.27±3.91**##　32.90±4.65*#　30.91±6.44*#

WBC是常用于疾病分析的臨床指標之一，外周血中WBC水平可以反應(yīng)機體應(yīng)激反應(yīng)水平高低的敏感指標［3］。創(chuàng)傷后外周血WBC持續(xù)而明顯的升高，可反應(yīng)損傷的嚴重性（老年及個別患者例外），也是應(yīng)激刺激持續(xù)的信號［4］。何津等［5］研究了腹腔鏡肝切除術(shù)和傳統(tǒng)開腹肝切除對機體白細胞、嗜中性粒細胞的影響，結(jié)果顯示，白細胞、嗜中性粒細胞計數(shù)迅速升高，手術(shù)前后相比有顯著性差異。

本試驗中手術(shù)前術(shù)后WBC值有顯著性差異（P＜0.01），且術(shù)后持續(xù)升高，在各時間點LOVH組的WBC值都比OVH組高。結(jié)果表明LOVH對機體應(yīng)激反應(yīng)的影響小于OVH，對機體免疫功能的影響較輕微，進而為LOVH術(shù)后恢復迅速提供了有力證據(jù)。這與國外類似研究結(jié)果相吻合［6-8］。

當機體發(fā)生應(yīng)激時，免疫細胞可分泌大量的細胞因子，如炎性細胞因子IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α和抗炎性細胞因子IL-4、IL-10。單核細胞、淋巴細胞、纖維母細胞及內(nèi)皮細胞等均可合成IL-6。IL-6是一種重要的炎癥因子，在手術(shù)或創(chuàng)傷的早期就有表達，而且是最敏感的組織損傷標記物之一，與手術(shù)創(chuàng)傷程度密切相關(guān)。IL-6生物學功能非常廣泛，可以調(diào)節(jié)細胞的生長、分化及基因表達。當IL-6及其受體平衡失調(diào)時，會對造血系統(tǒng)功能、免疫功能和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能造成紊亂。

Hildebrandt等［9］通過對腹腔鏡結(jié)腸切除術(shù)和開腹結(jié)腸切除術(shù)患者血清中IL-6的水平變化進行研究，發(fā)現(xiàn)術(shù)后兩者都有增加，但腹腔鏡結(jié)腸切除術(shù)組IL-6顯著低于開腹組。Ordemann等［10］發(fā)現(xiàn)腹腔鏡結(jié)腸腫瘤切除患者術(shù)后血清IL-6的峰濃度低于開腹手術(shù)者。Grande等［11］比較腹腔鏡膽囊切除術(shù)和小切口膽囊切除術(shù)手術(shù)前后細胞因子水平的變化，發(fā)現(xiàn)開腹組IL-6水平較腹腔鏡組升高明顯。

本試驗中，腹腔鏡組術(shù)后4 h和1 d的IL-6水平明顯高于術(shù)前，但明顯低于開腹手術(shù)組；腹腔鏡組術(shù)后2 d的IL-6水平與術(shù)前無顯著性差異，但開腹手術(shù)組術(shù)后2 d仍明顯高于術(shù)前，表明與開腹手術(shù)相比腹腔鏡手術(shù)對機體刺激性小，炎性反應(yīng)小并且術(shù)后恢復快。

本實驗顯示術(shù)后LOVH和OVH的WBC和IL-6都出現(xiàn)了不同程度的升高，且在各時間點OVH組的WBC和IL-6均高于LOVH組，這說明腹腔鏡手術(shù)和開腹手術(shù)對動物機體的炎性反應(yīng)都存在影響，但腹腔鏡手術(shù)引起的機體炎性反應(yīng)程度比開腹手術(shù)要輕，這與Ordemann等［10］的報道是一致的。

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［3］何津，馬龍濱，李賓，等.腹腔鏡和開腹肝切除對機體白細胞、中性粒細胞和血清皮質(zhì)醇的影響［J］.河北醫(yī)科大學學報，2008，29（3）：417-419.

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Systemic inflammation responseof two-portal laparoscopic ovariohysterectomy in cats

WANG Zhi-bo，LIU Ming-ting，LIU Hai-feng，REN Qing-ming，ZHANG Jian-tao，WANG Hong-bin
（College of Veterinary Medicine，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China）

This experiment was conducted to study the inflammation response of two-portal laparoscopic ovariohysterectomy in cats，and which was also compared with the traditional open.WBC and IL-6 values were used in the experiment for monitoring systemic inflammation，WBC and IL-6 values were significantly lower in the laparoscopic group than in open group at each time point.It indicated that tissue inflammation associated with the two-portal laparoscopic ovariohysterectomy technique was shortlived，and rapid recovery was daserved.

Laparoscope；Cats；Ovariohysterectomy；Systemic inflammatory response

WANG Hong-bin

S858.293

A

0529-6005（2016）09-0072-03

2015-07-21

黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計劃項目（PC13S12）

王志博（1990-），男，碩士，從事動物腹腔鏡外科學研究，E-mail：wangzhibo0111@163.com

王洪斌，E-mail：hbwang1940@126.com