莊錫偉孟霞 楊康 梁偉達(dá)

·論著·

11 530例佛山市妊娠晚期婦女B族鏈球菌感染情況的回顧性分析

莊錫偉★孟霞 楊康 梁偉達(dá)

目的回顧性分析佛山市妊娠晚期婦女感染B族鏈球菌（group B streptococcus，GBS）的相關(guān)因素，為孕婦人群做好GBS早期干預(yù)治療提供依據(jù)。方法選取2015年我院11 530名進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢的妊娠晚期婦女，采集陰道分泌物標(biāo)本11 530份，直腸分泌物標(biāo)本11 427份，采用聚合酶鏈反應(yīng)方法測(cè)定陰道和直腸分泌物標(biāo)本中GBS特定基因（CAMP）以此作為判定GBS陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)檢品的來(lái)源、檢體年齡、檢品收集時(shí)間等進(jìn)行回顧性分析，以評(píng)價(jià)妊娠晚期GBS感染情況。結(jié)果不同標(biāo)本陽(yáng)性檢出率結(jié)果顯示，11 530份陰道分泌物標(biāo)本中，GBS陽(yáng)性的有818例，陽(yáng)性率為7.09％，11 427份直腸分泌物標(biāo)本中，GBS陽(yáng)性的有832份，陽(yáng)性率為7.28％，兩者陽(yáng)性檢出率無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；陰道和直腸分泌物聯(lián)合檢查與單獨(dú)檢查陽(yáng)性率結(jié)果顯示，聯(lián)合檢查的11 427份標(biāo)本中，GBS陽(yáng)性標(biāo)本1 160份（直腸與陰道分泌物同時(shí)陽(yáng)性482份，直腸或陰道分泌物單獨(dú)陽(yáng)性678份），陽(yáng)性率為10.15％，與陰道或直腸分泌物單獨(dú)檢查比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。不同年齡的標(biāo)本陽(yáng)性率結(jié)果顯示，35～39歲年齡組的標(biāo)本陽(yáng)性率最高，與其他比較，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。不同季節(jié)檢查的樣本陽(yáng)性率結(jié)果顯示，夏季收集的樣本陽(yáng)性檢出率略高于其他季節(jié)，但各季節(jié)間比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論孕婦年齡、標(biāo)本采集季節(jié)因素對(duì)妊娠晚期孕婦GBS陽(yáng)性率影響不大，陰道分泌物和直腸分泌物聯(lián)合檢查更有利于臨床及時(shí)的診治。

B族鏈球菌；妊娠晚期；回顧性分析；GBS檢查

B族鏈球菌（group B streptococci，GBS）又稱無(wú)乳鏈球菌，屬于鏈球菌屬B血清群，為婦女生殖道常見(jiàn)的兼性厭氧菌，感染率達(dá)15％～35％，常與念珠菌感染共存，屬于條件致病菌，是宮內(nèi)感染的主要原因［1-2］。感染率隨人種、地域、年齡等的差異而不同，孕婦、新生兒發(fā)病率高［3-5］。新生兒感染GBS可引起新生兒敗血癥、肺炎等嚴(yán)重疾病，孕婦感染時(shí)可引起早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良、胎膜早破、絨毛膜羊膜炎及產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎等［6］，本研究對(duì)我院11 530名妊娠晚期婦女的11 530份陰道分泌物和11 427份直腸分泌物標(biāo)本GBS檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，為孕婦人群做好GBS早期干預(yù)治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

檢測(cè)試劑盒由泰普生物科學(xué)（中國(guó)）有限公司提供，目的基因來(lái)自美國(guó)菌種保藏中心的原始菌株，主要組成成分為反應(yīng)液（探針、引物、dNTP等）、Taq DNA Polymerase、提取固形物、內(nèi)參照、清洗液、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照；儀器為美國(guó)ABI 7300熒光定量PCR儀。

1.2 方法

1.2.1 研究對(duì)象

選取2015年我院11 530名進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢的妊娠晚期婦女（孕34～37周），年齡為15～49歲，平均年齡27.94歲，共收集到11 530份陰道分泌物和11 427份直腸分泌物標(biāo)本。

1.2.2 標(biāo)本采集

由資深醫(yī)師用無(wú)菌拭子自受檢者生殖道部位1/3處沿壁旋轉(zhuǎn)取得陰道分泌物樣本，自肛門括約肌以上約2～5 cm處沿腸壁輕輕旋轉(zhuǎn)取得直腸分泌物；要求受檢者取樣前1周內(nèi)未使用任何抗生素，取樣部位未使用過(guò)栓劑和洗液，取樣時(shí)不得使用石蠟油。

1.2.3 檢驗(yàn)方法

采用熒光定量PCR法，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增及熒光標(biāo)記探針，檢測(cè)GBS特定基因（CAMP），從而判斷GBS的存在。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，GBS檢測(cè)熒光素為FAM，內(nèi)參照熒光素為Texas Red，反應(yīng)體積50μL，循環(huán)參數(shù)：37℃2 m in；94℃2m in；94℃20 s～55℃45 s，10個(gè)循環(huán)；94℃20 s～55℃45 s，30個(gè)循環(huán)，收集熒光信號(hào)。

1.2.4 結(jié)果判斷

樣本（FAM）Ct值≤23，且有較好的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線，判讀為陽(yáng)性；樣本（FAM）Ct值≥30或“Undet”，內(nèi)參照（Texas Red）Ct值＜30，且有較好的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線，判讀為陰性。樣本（FAM）23＜Ct值＜30，復(fù)查或重新采樣檢測(cè)。

1.3 結(jié)果分析

采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)比較各組間樣本陽(yáng)性率差異，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡孕婦GBS陽(yáng)性率比較

妊娠晚期婦女各年齡組GBS陽(yáng)性率結(jié)果顯示，35～39歲組最高，與其他組比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 不同季節(jié)檢查的陽(yáng)性率比較

在不同季節(jié)檢查GBS的陽(yáng)性率結(jié)果顯示，夏季檢出的陽(yáng)性率最高，秋季的最低各季節(jié)組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 不同標(biāo)本檢查的陽(yáng)性率比較

11 530例妊娠晚期婦女收集的標(biāo)本結(jié)果顯示，陰道分泌物標(biāo)本11 530份，GBS陽(yáng)性的標(biāo)本818份，陽(yáng)性率為7.09％；直腸分泌物標(biāo)本11 427份，GBS陽(yáng)性的標(biāo)本832份，陽(yáng)性率為7.28％；兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2值=0.27，P=0.60）。

2.4 聯(lián)合檢查與單獨(dú)檢查的陽(yáng)性率比較

參與檢查的孕婦為11 530人中有11 427人同時(shí)檢查直腸分泌物及陰道分泌物，陽(yáng)性1 160人（直腸與陰道分泌物同時(shí)陽(yáng)性482人，直腸分泌物單獨(dú)陽(yáng)性350人，陰道分泌物單獨(dú)陽(yáng)性328人），陽(yáng)性率10.15％，與單獨(dú)檢查直腸或陰道分泌物組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=58.80，χ2=67.72，P＜0.01）。

表1 各年齡段妊娠晚期婦女陽(yáng)性率比較Table 1 Comparison of positive rate of pregnant women in different age groups

表2 不同季節(jié)檢查陽(yáng)性率比較Table 2 Comparison of positive rates in different seasons

3 討論

GBS已經(jīng)被證實(shí)為圍產(chǎn)期母嬰感染的主要致病菌之一［7-8］，染菌孕婦易發(fā)生圍生期嚴(yán)重的感染性疾病，且易導(dǎo)致早產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良、體重輕、胎膜早破、晚期流產(chǎn)、宮內(nèi)感染及產(chǎn)褥感染等疾病發(fā)生，是獨(dú)立存在的絨毛膜羊膜炎的危險(xiǎn)因素，危險(xiǎn)性與生殖道染菌程度呈正比。GBS陽(yáng)性可引起產(chǎn)婦產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎乃至敗血癥的發(fā)生率明顯升高。新生兒可通過(guò)垂直感染引發(fā)肺炎和敗血癥等急性感染性疾病，且預(yù)后較差。因此，有必要將GBS篩查納入妊娠晚期孕婦的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，對(duì)陽(yáng)性患者采取積極有效的治療措施，通過(guò)良好的GBS管理［9］，有效降低孕婦的感染率，降低早產(chǎn)、宮內(nèi)感染等產(chǎn)前不良事件發(fā)生。通過(guò)篩查可對(duì)陽(yáng)性孕婦的新生兒出生后由新生兒科提早介入，采取主動(dòng)觀察追蹤措施，有效降低新生兒急性感染所造成的嚴(yán)重不良后果。

本研究結(jié)果顯示，35～39歲受檢者陽(yáng)性率最高（直腸分泌物陽(yáng)性率8.62％，陰道分泌物8.24％），40歲以上受檢者中陽(yáng)性率最低（直腸分泌物陽(yáng)性率5.59％，陰道分泌物5.82％），結(jié)果與黃曉玲等［10］研究結(jié)果一致，這可能與雌激素水平、性活動(dòng)頻次有關(guān)；季節(jié)對(duì)GBS的陽(yáng)性率影響不大，提示GBS感染無(wú)季節(jié)性差異；直腸分泌物標(biāo)本陽(yáng)性率稍高于陰道分泌物標(biāo)本，但兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示采樣部位對(duì)GBS陽(yáng)性率影響不大，GBS的檢出率受到多種因素的影響，例如取材部位、檢測(cè)方法等，因此有學(xué)者建議，應(yīng)從宮頸、陰道及肛周等多個(gè)部位同時(shí)取材［13］，本研究結(jié)果表明聯(lián)合檢驗(yàn)直腸分泌物及陰道分泌物標(biāo)本陽(yáng)性檢出率明顯高于單獨(dú)檢驗(yàn)直腸分泌物或陰道分泌物標(biāo)本，提示聯(lián)合檢查在指示臨床干預(yù)方面優(yōu)于單項(xiàng)檢查。

妊娠婦女GBS陽(yáng)性率在國(guó)外不同地區(qū)的報(bào)道差異很大，如美國(guó)為2.0％～29.0％，韓國(guó)為13.0％［11］。我國(guó)目前孕婦GBS檢查目前在大部分地區(qū)暫未作為常規(guī)檢查，未見(jiàn)大標(biāo)本量的流行病學(xué)資料報(bào)道。GBS的檢驗(yàn)方法有細(xì)菌培養(yǎng)、抗原抗體測(cè)定、核酸探針檢測(cè)、熒光原位雜交法、PCR及革蘭染色法等，細(xì)菌培養(yǎng)是最經(jīng)典的檢驗(yàn)方法，但檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，操作繁瑣，抗原抗體測(cè)定雖然快速，但有很高的假陰性率和假陽(yáng)性率；核酸探針檢測(cè)、熒光原位雜交法、PCR等分子生物學(xué)檢驗(yàn)方法敏感性高，檢測(cè)時(shí)間短，結(jié)果準(zhǔn)確，特別是熒光定量PCR方法已被認(rèn)為是檢測(cè)GBS的快速、準(zhǔn)確性高、敏感性高的方法之一。本研究采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法，靈敏度高，特異性強(qiáng)，結(jié)果顯示，佛山市妊娠晚期婦女GBS陽(yáng)性率為10.15％，明顯低于北京，高于秦皇島、桂林、上海、南京、中山等地［10，12-16］。

PCR方法具有快速檢測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，楊坤祥等［17］研究表明，熒光PCR法的陽(yáng)性檢出率明顯高于傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法及顯色培養(yǎng)法，同時(shí)采用陰道及直腸分泌物標(biāo)本聯(lián)合檢驗(yàn)方法，明顯提高篩查陽(yáng)性檢出率，避免漏診，可作為妊娠晚期GBS篩查檢驗(yàn)方法進(jìn)行推廣，為臨床早期進(jìn)行治療，預(yù)防胎膜早破、早產(chǎn)、晚期先兆流產(chǎn)治療依據(jù)，降低不良妊娠發(fā)生率，通過(guò)加強(qiáng)陽(yáng)性孕婦新生兒的觀察追蹤，預(yù)防敗血癥、腦膜炎及肺炎的發(fā)生，降低新生兒死亡率。

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Retrospective analysis of 11 530 cases of group B streptococcus infection in the late pregnancy women in Foshan

ZHUANG Xiwei，MENG xia，YANG Kang，LIANG Weida
（Department of Clinical Laboratory，Central Hospital of Foshan Chancheng District，F(xiàn)oshan，Guangdong，China，528031）

Objective To analyze the related factors of group B streptococcus（GBS）infection，and to provide evidence for early intervention treatment of GBS in late pregnancy women in Foshan.Methods The samples were obtained from 11 530 vaginal secretions and 11 427 rectal secretions.Polymerase chain reaction method was used to detect the GBS specific gene（CAMP）to diagnose GBS infection in 11 530 women in the third trimester in our hospital in 2015.A retrospective analysis was made on the origin of the samples，the age of the pregnant women and the seasons，to evaluate the GBS infection in the third trimester of pregnancy. Results The positive rate of different samples had no significant differences（P＞0.05），vaginal secretion samples were 7.09％（818/11 530），and rectal secretion samples were 7.28％（832/11 427）.Vaginal and rectal secretions joint examination positive rate was 10.15％，higher than either the vaginal or rectal secretions when they were individually examined（P＜0.01）.The positive rate of samples of different ages showed that the positive rate of samples from 35 to 39 years old was the highest，and there were no significant differences（P＞0.05）.The positive rate of sample examination in different seasons showed that summer samples positive rate is slightly higher than other seasons，but the seasons were not significantly different（P＞0.05）.Conclusion The age of pregnant women and seasonal factors have little effect on the positive rate of GBS in pregnant women. The combined examination of vaginal and rectal secretions is more favorable for clinical diagnosis and treatment.

Group B streptococcus；Late pregnancy；Retrospective analysis；GBS examination

佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東，佛山528031

★通訊作者：莊錫偉，E-mail：zhuang821007@163.com