羅　鋼　蔡麗英

(黃石市中心醫(yī)院，黃石，435000)

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芪參益氣滴丸對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及谷氨酰胺合成酶表達(dá)的影響

羅鋼蔡麗英

(黃石市中心醫(yī)院，黃石，435000)

目的：探討芪參益氣滴丸對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶及谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平的影響。方法：選擇維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供的六周齡SPF級(jí)SD大鼠80只，體重180～220 g，雄性，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)組(例數(shù)=70)、正常組(例數(shù)=10)，進(jìn)行鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)，一次性注射腹腔對(duì)胰島β細(xì)胞進(jìn)行選擇性破壞，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿??；應(yīng)用時(shí)由PH 4.4、0.1 mmol/L無菌的檸檬酸鈉緩沖液配制為1% STZ溶液，根據(jù)大鼠體重予以65 mg/kg左下腹腔一次性注射1% STZ，正常組注射相同體積的生理鹽水，72 h后應(yīng)用快速血糖儀檢測(cè)血糖水平；血糖水平超過16.7 mmol/L者則為糖尿病大鼠模型；隨機(jī)分為對(duì)照組(多貝斯對(duì)照組)(20只)、治療組(芪參益氣滴丸組)(30只)、糖尿病模型組(模型組)(20只)、正常組(例數(shù)=10)，應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)4組大鼠視網(wǎng)膜GFAP mRNA表達(dá)水平；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法(Labelled Streptavidin Biotin Method，LSAB法)檢測(cè)4組視網(wǎng)膜的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(Glutamate/aspartate Transporter，GLAST)表達(dá)水平；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法(LSAB法)檢測(cè)視網(wǎng)膜上谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase，GS)的表達(dá)水平情況。結(jié)果：對(duì)照組、模型組、治療組的大鼠視網(wǎng)膜GFAP陽性表達(dá)IOD值顯著低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組、對(duì)照組的大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(Glialfibrillaryacidprotein，GFAP)陽性表達(dá)IOD值顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組的大鼠視網(wǎng)膜GFAP陽性表達(dá)IOD值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組、模型組、治療組的大鼠視網(wǎng)膜GS陽性表達(dá)IOD值顯著低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組、對(duì)照組的大鼠視網(wǎng)膜GS陽性表達(dá)IOD值顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組的大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase，GS)陽性表達(dá)IOD值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：芪參益氣滴丸可促進(jìn)視網(wǎng)膜GS和GLAST的表達(dá)，降低谷氨酸的高濃度興奮性毒性功能，保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞。

糖尿??；谷氨酸；芪參益氣滴丸；谷氨酰胺合成酶；谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體

引發(fā)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞嚴(yán)重受損的主要原因之一為谷氨酸的高濃度興奮性毒性。大量研究表明，糖尿病視網(wǎng)膜病變?cè)缙诳沙霈F(xiàn)谷氨酸循環(huán)緩慢，細(xì)胞外堆積大量的谷氨酸，濃度上升，導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡[1-2]。傳統(tǒng)糖尿病性視網(wǎng)膜病變的主要研究重點(diǎn)為視網(wǎng)膜毛細(xì)血管微循環(huán)障礙，且設(shè)定為血管病變導(dǎo)致視覺的缺失及視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的變性[3-4]；糖尿病患者發(fā)生眼底可見的微血管變化之前即發(fā)生視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的存活力及細(xì)胞功能變化、視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維功能的降低；近年來研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病視網(wǎng)膜病變除微血管受損外，糖尿病視網(wǎng)膜病變是一種慢性神經(jīng)阻滯細(xì)胞的退行性病變，包括谷氨酰胺代謝病變、激活小膠質(zhì)細(xì)胞、大膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生、神經(jīng)細(xì)胞凋亡加速，視網(wǎng)膜血管病變的主要原因可能為神經(jīng)膠質(zhì)及神經(jīng)元的變化[5-6]；血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞是形成糖尿病視網(wǎng)膜病變的重要因素，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞的功能變化、結(jié)構(gòu)可改變血管的通透性，視網(wǎng)膜血管通透性變化導(dǎo)致谷氨酸由血液進(jìn)入視網(wǎng)膜實(shí)質(zhì)，引發(fā)視網(wǎng)膜神經(jīng)退行性改變[7-8]；同時(shí)與缺乏神經(jīng)營養(yǎng)因子密切相關(guān)，Müller細(xì)胞因是神經(jīng)元與血-視網(wǎng)膜屏障的橋梁，其功能及結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特性，在導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管病變的同時(shí)，可引發(fā)神經(jīng)元功能障礙[9-10]。視網(wǎng)膜內(nèi)的重要神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為Müller細(xì)胞，細(xì)胞突起由內(nèi)界膜向外界膜伸展，內(nèi)核層為細(xì)胞體，細(xì)胞突起可貫穿全層視網(wǎng)膜，將全部視網(wǎng)膜神經(jīng)元突起及胞體均包繞及接觸[11-12]；與視網(wǎng)膜神經(jīng)元的功能及結(jié)構(gòu)密切相關(guān)；糖尿病狀態(tài)下Müller細(xì)胞的改變?yōu)楸磉_(dá)GFAP水平升高，GFAP為膠質(zhì)纖維酸性蛋白，是特征性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記，最早在大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞中的中間絲結(jié)構(gòu)蛋白中發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)水平升高是視網(wǎng)膜神經(jīng)元受損的間接性指標(biāo)[13-14]；糖尿病視網(wǎng)膜可表現(xiàn)為膠質(zhì)反應(yīng)性活躍性增生，糖尿病視網(wǎng)膜進(jìn)展的病理性改變?yōu)橐暰W(wǎng)膜組織內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生，視網(wǎng)膜中表達(dá)GFAP水平顯著升高[15]。活血益氣類藥物可營養(yǎng)周圍神經(jīng)、中樞神經(jīng)因子功能，可促進(jìn)變性受損的神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)功能，增強(qiáng)膠質(zhì)細(xì)胞的代償功能，對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)組織細(xì)胞具有保護(hù)神經(jīng)功能，促使神經(jīng)細(xì)胞突起生長功能。探析活血益氣法對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠的谷氨酰胺合成酶及谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平的影響具有重要的臨床價(jià)值，故本文建立糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠模型，檢測(cè)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠的視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的谷氨酰胺合成酶、谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供的六周齡SD大鼠SPF級(jí)80只，體重180～220 g。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物與試劑芪參益氣滴丸(天津天士力制藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z20030139)，羥苯磺酸鈣膠囊(商品名：多貝斯，西安利君制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20000713)；Dako公司提供的LSAB通用試劑盒，Sigma公司生產(chǎn)的DAB顯色劑，Roche公司提供的細(xì)胞凋亡檢測(cè)盒，Sigma公司提供的STZ。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器Kodak公司提供的Image Plus Pro 6.0圖像分析系統(tǒng)；SAKURA CRM-440型病理切片機(jī)，SAKURA PS-53型展片器，日本SAKURA Tissue-Tek TECTM5 SM C1-042-SO型組織包埋機(jī)，日本OLYMPUS BH-2型顯微照相系統(tǒng)，日本日立H-600型電子顯微鏡，日本OLypus BH-2型光學(xué)顯微鏡，日本OLypus BX-51型數(shù)碼相機(jī)裝置，HANNA Instrumrnts-PH-200型酸度計(jì)，Mettler Toledo-AB54型精密電子天平，Roche GLUCOTREND型快速血糖儀。

1.4實(shí)驗(yàn)方法1)六周齡SPF級(jí)SD大鼠80只，體重180～220 g，均為雄性，飼養(yǎng)室相對(duì)濕度55%～70%，室溫22～25 ℃；實(shí)驗(yàn)期間大鼠可自由飲水及進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，隨機(jī)分為正常組(例數(shù)=10)、實(shí)驗(yàn)組(例數(shù)=70)，進(jìn)行STZ一次性腹腔注射，對(duì)胰島β細(xì)胞進(jìn)行選擇性破壞，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿??；臨時(shí)將pH 4.4、0.1 mmol/L無菌檸檬酸鈉緩沖液配制為1%的STZ溶液，根據(jù)大鼠體重，進(jìn)行1%STZ一次性左下腹腔注射，65 mg/kg，正常組注射體積相同的0.9%氯化鈉注射液，建立模型前大鼠12 h禁食，72 h后尾靜脈取血，予以快速血糖儀檢測(cè)血糖；血糖超過16.7 mmol/L者則為糖尿病大鼠模型；隨機(jī)分為對(duì)照組(多貝斯對(duì)照組)(20只)、治療組(芪參益氣滴丸組)(30只)、糖尿病模型組(模型組)(20只)、正常組(例數(shù)=10)；成功建立大鼠模型后第二天對(duì)照組及治療組給藥，灌胃給藥1次/d，劑量均為0.5 g/kg，應(yīng)用蒸餾水配制羥苯磺酸鈣膠囊、芪參益氣滴丸，配制藥物溶液為100 mg/mL，1次/周，于4 ℃冰箱內(nèi)置存；正常組大鼠予以1 mL 0.9%氯化鈉溶液灌胃；實(shí)驗(yàn)周期為10個(gè)月，期間予以大鼠血糖和體重定期檢測(cè)；視網(wǎng)膜切片制備：結(jié)束試驗(yàn)后將大鼠處死，由頸動(dòng)脈處放血，將眼球摘除，24 h內(nèi)在4 ℃下應(yīng)用4%多聚甲醛固定，順角膜邊緣將眼球壁剪開，將玻璃體、晶體、角膜除去，剩下的眼杯置入固定液內(nèi)再次48 g固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，二甲苯透明，SAKURA CRM-440型病理切片機(jī)連續(xù)切片，3 μm切片厚度；進(jìn)行標(biāo)記鏈霉親合素-生物素過氧化物酶法(LSAB)進(jìn)行GS、GLAST免疫組織化學(xué)染色：1)石蠟切片脫蠟，梯度乙醇水化；2)5 min流水漂洗，5 min磷酸鹽緩沖液，洗滌兩次；3)15 min3%雙氧水氧化，將內(nèi)源性過氧化物酶消除，5 min流水漂洗，5 min PBS洗滌兩次；4)室溫下10%正常牛血清(BSA)滴加，20 min濕盒孵育；5)在不同的切片內(nèi)滴加一抗：兔抗人GS多抗1:50和兔抗人GLAST多抗1:1800,24 h室溫下孵育濕盒，5 minPBS洗滌三次；6)LSAB二抗滴加，90 min室溫下濕盒孵育，5 minPBS洗滌三次；7)LSAB三抗滴加，90 min室溫下濕盒孵育，5 minPBS洗滌三次；8)0.5 min-1 min部分切片蘇木素復(fù)染，未復(fù)染部分3 min流水沖洗，進(jìn)行圖像分析；梯度乙醇脫水，風(fēng)干，二甲苯透明，樹脂中性封片；在光學(xué)顯微鏡下監(jiān)測(cè)所得切片，予以Image Plus Pro6.0圖像分析系統(tǒng)定量分析未復(fù)染切片，每只大鼠取切片兩張，200倍下隨機(jī)選擇視野10處，計(jì)算陽性表達(dá)積分密度值(IOD)，IOD=平均光密度×面積。見圖1～圖8。

2　結(jié)果

2.14組視網(wǎng)膜表達(dá)GLAST表達(dá)IOD值情況對(duì)照組、模型組、治療組的大鼠視網(wǎng)膜GFAP陽性表達(dá)IOD值顯著低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組、對(duì)照組的大鼠視網(wǎng)膜GFAP陽性表達(dá)IOD值顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組的大鼠視網(wǎng)膜GFAP陽性表達(dá)IOD值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

圖1　GLAST在正常組視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，蘇木素復(fù)染。　　圖2　GLAST在模型組視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，蘇木素復(fù)染。

圖3　GLAST在治療組視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，蘇木素復(fù)染?！D4　GLAST在對(duì)照組視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，蘇木素復(fù)染。

圖5　GS在正常組大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，未復(fù)染?！　D6　GS在模型組大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，未復(fù)染。

圖7　GS在治療組大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，未復(fù)染?！　D8　GS在對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)，LSAB法×400，未復(fù)染。

2.24組視網(wǎng)膜表達(dá)GS表達(dá)IOD值變化情況對(duì)照組、模型組、治療組的大鼠視網(wǎng)膜GS陽性表達(dá)IOD值顯著低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組、對(duì)照組的大鼠視網(wǎng)膜GS陽性表達(dá)IOD值顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組的大鼠視網(wǎng)膜GS陽性表達(dá)IOD值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1　4組視網(wǎng)膜表達(dá)GLAST陽性表達(dá)IOD值情況

注：t/P1為模型組與正常組比較，P<0.05；t/P2為治療組與正常組比較，P<0.05；t/P3為對(duì)照組與正常組比較，P<0.05；t/P4為治療組與模型組比較，P<0.05；t/P5為治療組與對(duì)照組比較，P<0.05；t/P6為對(duì)照組與模型組比較，P<0.05。

表2　4組視網(wǎng)膜表達(dá)GS表達(dá)IOD值變化情況

注：t/P1為模型組與正常組比較，P<0.05；t/P2為治療組與正常組比較，P<0.05；t/P3為對(duì)照組與正常組比較，P<0.05；t/P4為治療組與模型組比較，P<0.05；t/P5為治療組與對(duì)照組比較，P<0.05；t/P6為對(duì)照組與模型組比較，P<0.05。

3　討論

本研究探析糖尿病大鼠予以芪參益氣滴丸對(duì)大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶及谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)影響，研究結(jié)果與馬棟等[16]的研究結(jié)果大體一致，谷氨酸為視網(wǎng)膜的最重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、雙極細(xì)胞、光感受器的遞質(zhì)均為谷氨酸，谷氨酸的濃度不同，其傳遞的信號(hào)也具有一定的差異，而谷氨酸高濃度具有興奮性毒性，谷氨酸的清除降低或生成增加是導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的主要病理機(jī)制，視網(wǎng)膜中的雙極細(xì)胞及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中谷氨酸的唯一源頭為Müller細(xì)胞，同時(shí)可清除視網(wǎng)膜內(nèi)外過量的谷氨酸，其細(xì)胞內(nèi)的谷氨酰胺合成酶及包膜的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體是谷氨酸降解、轉(zhuǎn)運(yùn)的重要過程[17]；谷氨酰胺合成酶只在Müller細(xì)胞內(nèi)存在，Müller細(xì)胞對(duì)RGCs避免谷氨酸度毒性侵害的作用與GLAST的數(shù)量及功能密切相關(guān)；在谷氨酰胺合成酶的作用下，谷氨酸可轉(zhuǎn)化為谷氨酸胺，由Müller細(xì)胞向細(xì)胞外釋放，同時(shí)神經(jīng)細(xì)胞攝取Gln；傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，糖尿病屬于“消渴”范疇，素體燥熱偏盛，陰津虧損，傷陰耗氣，引發(fā)陰陽兩虛、氣陰兩虛，瘀阻絡(luò)脈，血行不暢；燥熱陰虛、氣弱脾虛，陰損及陽，目失所養(yǎng)是糖尿病視網(wǎng)膜病變的基礎(chǔ)病機(jī)；糖尿病視網(wǎng)膜病變的進(jìn)展病機(jī)為氣弱脾虛，因虛致瘀，閉塞目竅，其證候特征為虛實(shí)夾雜，本虛標(biāo)實(shí)；糖尿病視網(wǎng)膜病變的增殖前期及單純期均為氣陰兩虛證，增殖期為血瘀氣滯、陰陽兩虛；對(duì)糖尿病進(jìn)行活血益氣療法可防止病變向陰陽兩虛狀態(tài)轉(zhuǎn)變；芪參益氣滴丸有降香、三七、丹參、黃芪組成，方中降香辛散氣香，行滯溫通；三七和丹參可通絡(luò)祛瘀活血，同為臣藥；黃芪為君藥，可補(bǔ)氣，祛瘀不傷正，氣旺則血行，促進(jìn)津液運(yùn)行；現(xiàn)代藥理研究表明，黃芪的主要有效成分為微量元素、氨基酸、黃酮、皂苷、多糖；其中黃芪多糖可提高機(jī)體的缺氧耐受能力，通過抗氧化功能，促使抗氧化酶的GSH-Px、SOD的活性增強(qiáng)，促使細(xì)胞膜穩(wěn)定，促使凋亡抑制基因bcl-2的表達(dá)水平提高，p53促凋亡基因的表達(dá)下降，降低損傷神經(jīng)細(xì)胞，延緩神經(jīng)細(xì)胞凋亡進(jìn)程；可促進(jìn)受損后恢復(fù)神經(jīng)功能，對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞急性腦缺血期的過量表達(dá)水平進(jìn)行抑制；丹參酮及丹參素可緩解微循環(huán)障礙，全血粘度下降，對(duì)血小板集聚功能進(jìn)行抑制；避免脂質(zhì)的過氧化，阻斷生成羥自由基。綜上所述，芪參益氣滴丸可促進(jìn)視網(wǎng)膜GS和GLAST的表達(dá)，降低谷氨酸的高濃度興奮性毒性功能，保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞。

[1]許建斌,謝茂松,胡建章,等.早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜Hsp27表達(dá)的研究[J].中國實(shí)用眼科雜志,2015,33(3):307-310.

[2]鄧輝,金明,苑維,等.芪參益氣滴丸對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及谷氨酰胺合成酶表達(dá)的影響[J].中國中醫(yī)眼科雜志,2011,21(4):197-200.

[3]曾凱宏,許紅霞,張亞潔,等.?；撬釋?duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶表達(dá)的影響[J].中國糖尿病雜志,2009,17(4):302-304.

[4]張海寧,惠延年.高濃度葡萄糖對(duì)體外培養(yǎng)大鼠Müller細(xì)胞P2Y2受體的影響[J].國際眼科雜志,2011,8(4):714-720.

[5]曾凱宏,許紅霞,糜漫天,等.?；撬釋?duì)高糖刺激大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞GLAST和GS表達(dá)的影響[J].國際眼科雜志,2013,8(1):41-44.

[6]李悅,魏銳利.小鼠視網(wǎng)膜急性谷氨酸損傷后囊泡膜與質(zhì)膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)[J].國際眼科雜志,2009,9(6):1051-1055.

[7]熊鯤,黃菊芳,蔣麗珠,等.腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對(duì)急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞的影響[J].解剖學(xué)雜志,2012,29(1):14-17,109.[8]楊琨,董方田.新生大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改良[J].中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志,2012,30(4):336-339.

[9]周臻,張紹丹,李穎,等.Müller細(xì)胞在視網(wǎng)膜綠光損傷模型中的激活反應(yīng)[J].中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2011,19(4):287-291.

[10]陳惠軍,宋舜意,李志萍,等.雌激素干預(yù)對(duì)高濃度氧致新生書視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷的影響[J].中國新生兒科雜志,2011,26(6):411-415.

[11]郭龍,許惠卓,夏曉波,等.高糖對(duì)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞VEGF、EPO和EPORmRNA表達(dá)的影響[J].國際眼科雜志,2010,10(3):449-452.

[12]薛黎萍,丁鵬,吳開力,等.Nestin和GFAP在缺氧大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)及高氧治療的作用[J].中國病理生理雜志,2009,25(6):1214-1216,1243.

[13]薛黎萍,丁鵬,吳開力,等.Nestin在視神經(jīng)橫斷大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞上的誘導(dǎo)表達(dá)[J].國際眼科雜志,2014,9(3):433-436.

[14]劉坤,萬瑾,鄭華,等.小鼠視神經(jīng)Müller細(xì)胞在深層血管發(fā)育中的作用[J].中國循環(huán)研究雜志,2011,1(1):12-15.

[15]郝長英,陳明霞,郭平,等.糖網(wǎng)明目顆粒對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變防治作用及機(jī)制研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2015,1(3):62-66.

[16]馬棟,王靜波,郭承偉,等.絡(luò)治法對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜NF-кB表達(dá)的影響[J].中國中醫(yī)眼科雜志,2015,2(4):82-86.

[17]何潔,韓靜,郝改梅,等.糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管消化鋪片技術(shù)的改進(jìn)及技巧探討[J].中國中醫(yī)眼科雜志,2015,1(1):1-5.

(2015-12-02收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Effect of Qishen Yiqi Dripping Pills on the Expression of Glutamate Transporter and Glutamine Synthetase in Diabetic Rats

Luo Gang,Cai Liying

(Huangshi Central Hospital,Hubei Institute of Science and Technology,Hubei 435000,China)

Objective:To investigate the effect of Shenqi Yiqi dripping pills on the expression of glutamine synthetase and glutamate transporters in the retina of diabetic rats.Methods:SD male rats 80,weight 180～220 g were randomly divided into experimental group (n=70) and normal group (n=10).The rats were modeled by STZ injection to induce experimental diabetes.The 1% STZ sterile solution was prepared by sodium citrate buffer PH4.4,0.1 mmol/L,and it was given according to the body weight of rats (65 mg/kg) through left lower abdominal cavity.Common saline were injected of the same volume on the normal group,and blood glucose level was examined by fast blood glucose meter examination after 72 h; mice whose blood glucose level over 16.7 mmol/L were categorized as the model diabetes group,and were randomly divided into the control group (calciumdobesilate control group) (n=20),treatment group (Qishen Yiqi group) (n=30),and diabetic model group (model group) (20 rats).RT-PCR method was used to detect the expression level of mRNA GFAP in four groups of rats.The expression level of glutamate transporter (GLAST) was detected by immunohistochemical staining (LSAB method) and the expression level of glutamine synthetase (GS) was detected by LSAB in four groups.Results:The positive expression of GFAP (Glial fibrillary acid protein) IOD value of the control group,model group,and treatment group were higher than the normal group with statistical difference (P<0.05).The GFAP IOD value in the treatment group and control group were higher than that of the model group (P<0.05).The GFPA IOD value in the treatment group was higher than that of the control group (P<0.05).The positive expression of GS (Glutamine synthetase) IOD value of the control group,model group,and treatment group were higher than the normal group with statistical difference (P<0.05).The GS IOD value in the treatment group and control group were higher than that of the model group (P<0.05).The GS value in the treatment group was higher than that of the control group (P<0.05).Conclusion:The expression of and GS and GLAST can be promoted by Qishen Yiqi dripping pills,which can low the toxin of high concentration of glutamate,and thus protecting retinal nerve cells.

Diabetes mellitus; Glutamic acid; Qishen Yiqi dripping pill; Glutamine synthetase; Glutamate transporter

湖北省黃石市醫(yī)藥衛(wèi)生科研項(xiàng)目(編號(hào)：2010-04)

羅鋼(1975.09—)，男，嘉魚人，碩士研究生，湖北省黃石市中心醫(yī)院主治醫(yī)師，研究方向：眼科視神經(jīng)損傷修復(fù)、青光眼、眼外傷、白內(nèi)障等，E-mail：178536802@qq.com

蔡麗英(1977.12—)，女，漢族，大學(xué)本科，黃石市中心醫(yī)院眼科，研究方向：眼底病、角膜病眼底病、青光眼白內(nèi)障，E-mail：3326884804@qq.com

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.054