寧佳鳴，張妍淞，姚于飛，王 喆，李 露，陳家俊，李文娟,*（.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；.中國(guó)人民解放軍第九四醫(yī)院呼吸科，江西 南昌 330000）

表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)抗腫瘤所致心肌損傷的保護(hù)作用

寧佳鳴1，張妍淞1，姚于飛2，王 喆1，李 露1，陳家俊1，李文娟1,*
（1.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2.中國(guó)人民解放軍第九四醫(yī)院呼吸科，江西 南昌 330000）

目的：觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）的抗腫瘤作用，研究EGCG對(duì)抗腫瘤藥物阿霉素（adriamycin，ADR）所致小鼠心肌損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：建立S180小鼠實(shí)體瘤模型，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、ADR組、EGCG組、EGCG＋ADR組。分離腫瘤與心肌組織，分別測(cè)定組織內(nèi)乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶（creatine kinase，CK)和錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，MnSOD）的活性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡、活性氧（reactive oxygen species，ROS）及線(xiàn)粒體膜電位。結(jié)果：與對(duì)照組相比，EGCG和ADR能顯著增加腫瘤細(xì)胞凋亡作用，且ADR＋EGCG作用更強(qiáng)。與ADR組相比，EGCG＋ADR可顯著降低心肌組織中ADR引起的LDH和CK活性的增加。同時(shí)，EGCG＋ADR中可顯著增加心肌組織的抗氧化酶MnSOD活性，減少ROS的生成，增加線(xiàn)粒體膜電位。結(jié)論：EGCG具有抗腫瘤作用，且與ADR合用可顯著增強(qiáng)ADR抗腫瘤作用。同時(shí)可通過(guò)提高線(xiàn)粒體的抗氧化防御、削弱氧化應(yīng)激、穩(wěn)定線(xiàn)粒體膜電位，對(duì)ADR所致心肌損傷發(fā)揮保護(hù)作用。

腫瘤；阿霉素；活性氧；表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯

惡性腫瘤作為一類(lèi)危害人類(lèi)健康的重大疾病，是當(dāng)今社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)，也是21世紀(jì)研究的熱點(diǎn)。隨著治療技術(shù)的發(fā)展與研究的深入，腫瘤治療已經(jīng)取得了重大的進(jìn)展。目前，隨著抗腫瘤藥物的大量使用，其所帶來(lái)的副作用與并發(fā)癥引起越來(lái)越多的關(guān)注。阿霉素（adriamycin，ADR）是一類(lèi)蒽環(huán)類(lèi)抗生素，臨床上常用于白血病、淋巴瘤、乳腺癌等一系列惡性腫瘤的治療，效果顯著，因此是現(xiàn)今臨床一線(xiàn)的抗腫瘤藥物之一[1-2]。然而，由于其使用過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的心臟損傷，所以在臨床應(yīng)用方面受到極大的限制。大量研究[3-4]表明，ADR產(chǎn)生的心肌損傷與活性氧（reactive oxygen species，ROS）有關(guān)。ROS的主要產(chǎn)生場(chǎng)所是細(xì)胞內(nèi)的線(xiàn)粒體，同時(shí)線(xiàn)粒體本身也是自由基氧化性損傷的主要目標(biāo)[5-6]。茶葉作為世界三大飲料之一，是人們?nèi)粘Ｉ畹闹匾M成部分，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（（-）-epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶葉中的主要功能性物質(zhì)[7]。研究表明，茶多酚具有顯著的抗氧化和抗腫瘤作用[8-9]。最近，Chen Li等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在體外肝癌實(shí)驗(yàn)中，EGCG與ADR合用可協(xié)同ADR的抗腫瘤作用。此外，Saeed等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在ADR誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷實(shí)驗(yàn)中，EGCG預(yù)處理可抑制ADR介導(dǎo)的心肌損傷，其機(jī)制與其抗氧化作用密切相關(guān)。然而，在腫瘤模型中，ADR介導(dǎo)抗腫瘤作用的同時(shí)，EGCG對(duì)ADR介導(dǎo)的心肌損傷是否也具有保護(hù)作用，其相關(guān)作用機(jī)制尚不清楚。因此，本研實(shí)驗(yàn)擬建立S180荷瘤小鼠模型，在觀察EGCG和ADR對(duì)S180荷瘤小鼠抗腫瘤作用的基礎(chǔ)上，探討EGCG對(duì)ADR所致心肌損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、動(dòng)物和試劑

小鼠S180細(xì)胞株購(gòu)于上海中科院細(xì)胞庫(kù)。6～8 周的健康實(shí)驗(yàn)小鼠40 只，體質(zhì)量為（20.0±2.0） g，雌雄均可，由南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供。飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（20±2） ℃，相對(duì)濕度（50±10）%，于12 h黑暗，12 h光照、自由取食、飲水飼養(yǎng)條件下喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前靜養(yǎng)1 周。

阿霉素（ADR） 深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司；乳酸脫氫酶（actate dehydrogenase，LDH）和肌酸激酶（creatine kinase，CK） 南京建成生物工程研究所；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度測(cè)定試劑盒 碧云天生物技術(shù)研究所；2’,7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽（2’,7’-dichlorofluorescin-diacetate，DCFH-DA）、羅丹明-123（Rho-123） 美國(guó)Molecular Probes公司；細(xì)胞凋亡試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

紫外分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；冷凍高速離心機(jī) 美國(guó)Sigma公司；二氧化碳培養(yǎng)箱 美國(guó)Thermo Electron公司；超純水凈化系統(tǒng) 美國(guó)Millipore公司；流式細(xì)胞儀 美國(guó)Beckman Coulter公司。

1.3 方法

1.3.1 S180荷瘤小鼠模型的建立及分組給藥方法

1.3.1.1 S180荷瘤小鼠模型的建立

在無(wú)菌條件下，對(duì)S180小鼠肉瘤細(xì)胞及腹水進(jìn)行收集并溶于除菌的生理鹽水中。選取0.2 mL S180細(xì)胞懸液（約1×107個(gè)/孔），于小鼠腋下進(jìn)行皮下注射完成接種。

1.3.1.2 分組

對(duì)照組：接種1 d后，小鼠每日以0.2 mL的生理鹽水進(jìn)行腹腔注射，連續(xù)10 d。

ADR損傷組（ADR）：接種1 d后，小鼠每日以相同體積的ADR（2 mg/kg（以體質(zhì)量計(jì)），下同）進(jìn)行腹腔注射，連續(xù)10 d。

EGCG組（EGCG-25）：接種1 d后，小鼠每日以相同體積的EGCG（25 mg/kg（以體質(zhì)量計(jì)），下同）進(jìn)行腹腔注射，連續(xù)10 d。

EGCG＋ADR組（EGCG-25＋ADR）：接種1 d后，小鼠每日以相同體積的EGCG（25 mg/kg）和ADR（2 mg/kg）進(jìn)行腹腔注射，連續(xù)10 d。

1.3.2 檢測(cè)樣本的制備

1.3.2.1 小鼠組織樣本的制備

末次處理24 h后，稱(chēng)質(zhì)量，脫臼處死小鼠。無(wú)菌分離小鼠心臟組織和腫瘤組織，稱(chēng)質(zhì)量，分離其中一部分用于生化檢測(cè)。剩余的小鼠組織保存于－80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2.2 心肌組織勻漿的制備

稱(chēng)取部分心肌組織加入生理鹽水溶液，制備成5%的心肌組織勻漿。將組織樣品在冰浴下剪碎，保持低溫環(huán)境，用組織勻漿器將組織充分勻漿，并以生理鹽水溶液沖洗勻漿器中的攪拌器，盡可能減少組織損耗；在4 ℃條件下離心10 min，轉(zhuǎn)速3 000 r/min，收集上清液。

1.3.2.3 小鼠S180細(xì)胞和心肌細(xì)胞的制備

無(wú)菌條件分離腫瘤組織和心肌組織，并置于不含鈣和碳酸氫鹽但含有N-（2-羥乙基）哌嗪-N’-2-乙烷磺酸（N-(2-hydroxyethylpiperazine)-N-2’-ethanesulfonic acid，HEPES）的Hank’s緩沖液中。將組織剪碎，胰酶消化，含血清培養(yǎng)基終止消化，合并收集單細(xì)胞懸液，將其細(xì)胞數(shù)量調(diào)整到2×106個(gè)/孔。

1.3.3 各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定

1.3.3.1 S180小鼠心肌組織LDH及CK活力的測(cè)定

取5%的組織勻漿上清液，使用BCA蛋白濃度試劑盒檢測(cè)組織勻漿中的蛋白含量。按試劑盒相應(yīng)使用說(shuō)明書(shū)操作方法測(cè)定LDH和CK含量并換算LDH、CK的活力（U/mg pro）。

1.3.3.2 S180小鼠心肌組織錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，MnSOD）活力的測(cè)定

取5%的組織勻漿上清液，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白質(zhì)含量。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)的MnSOD活力，并以單位U/mg pro表示。

1.3.4 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)

1.3.4.1 S180細(xì)胞凋亡水平的測(cè)定

采用AnnexinⅤ和PI雙染色法測(cè)定細(xì)胞凋亡水平。細(xì)胞用4 ℃的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗2 次后調(diào)整細(xì)胞數(shù)量為1×106個(gè)/孔，添加試劑盒中Annexin V-FITC和PI各5 μL。采用FACStar和流式細(xì)胞分析儀對(duì)著色細(xì)胞分析，使用分析軟件對(duì)結(jié)果處理。

1.3.4.2 S180小鼠心肌線(xiàn)粒體膜電位（△Ψm）的測(cè)定

根據(jù)以往的報(bào)道[1]，選取羅丹明123染色（Rho123）法分析線(xiàn)粒體膜電位的改變情況。用FACStar和細(xì)胞分選儀測(cè)定激發(fā)波長(zhǎng)488 nm和發(fā)射波長(zhǎng)530 nm處的羅丹明123熒光強(qiáng)度。

1.3.4.3 S180小鼠心肌組織ROS的測(cè)定

心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧濃度是通過(guò)測(cè)定熒光產(chǎn)物二氯熒光素（2’,7’-dichlorofl uorescin，DCF）的熒光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)的。收集心肌細(xì)胞并用4 ℃的PBS對(duì)其進(jìn)行沖洗，沖洗后的細(xì)胞在10 μmol/L的DCFH-DA中37 ℃孵育20 min。然后，采用流式細(xì)胞分析儀和FACSort細(xì)胞分選儀在激發(fā)波長(zhǎng)（480±30）nm和發(fā)射波長(zhǎng)（535±40）nm處測(cè)定DCF熒光強(qiáng)度。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 EGCG對(duì)荷瘤小鼠的抗腫瘤作用

S180細(xì)胞的凋亡情況如圖1所示。相比對(duì)照組，ADR組、EGCG組、EGCG＋ADR組的細(xì)胞凋亡水平顯著升高，且EGCG＋ADR組的凋亡水平明顯高于ADR組。結(jié)果說(shuō)明EGCG與ADR均具有抗腫瘤作用，且兩者同時(shí)使用時(shí)能提高ADR的抗腫瘤效果。

圖1 EGCG對(duì)S180荷瘤小鼠細(xì)胞凋亡的影響Fig. 1 Effect of EGCG on cell apoptosis in S180 tumor-bearing mice

2.2 EGCG對(duì)ADR所致荷瘤小鼠心肌損傷的保護(hù)作用

實(shí)驗(yàn)對(duì)CK、LDH的活性進(jìn)行測(cè)定。由圖2可知，與對(duì)照組相比，ADR組的LDH和CK皆出現(xiàn)明顯增加，表明心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯損傷；而EGCG＋ADR組中LDH和CK活性，相比于ADR組有明顯降低，說(shuō)明EGCG對(duì)ADR造成的心肌損傷有保護(hù)作用。

圖2 EGCG對(duì)ADR所致心肌細(xì)胞損傷的影響Fig. 2 Effect of EGCG on myocardial cell injury caused by ADR

2.3 EGCG對(duì)ADR小鼠心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體抗氧化能力的影響

實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了不同組心肌中MnSOD的活性。由圖3可知，ADR損傷組中MnSOD活性水平顯著低于對(duì)照組。EGCG＋ADR組與ADR損傷組相比，MnSOD活性明顯提高。由此可知，EGCG能增強(qiáng)ADR處理小鼠機(jī)體的抗氧化能力，抑制心肌損傷。

圖3 EGCG對(duì)ADR處理小鼠心肌細(xì)胞內(nèi)MnSOD活性的影響Fig. 3 Effect of EGCG on MnSOD activity in myocardial cells of mice treated by ADR

2.4 EGCG對(duì)ADR所致荷瘤小鼠心肌損傷中ROS水平的影響

實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平進(jìn)行檢測(cè)，DCF的平均熒光強(qiáng)度衡量細(xì)胞內(nèi)ROS的含量。由圖4可知，與對(duì)照組相比，ADR損傷組小鼠的ROS水平顯著升高，而EGCG＋ADR組的ROS水平呈降低趨勢(shì)。因此推斷，EGCG對(duì)由ADR引起的活性氧水平升高具有一定的抑制作用，從而可以在一定程度上保護(hù)心肌細(xì)胞免受活性氧的過(guò)強(qiáng)攻擊。

圖4 EGCG對(duì)ADR處理小鼠心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響Fig. 4 Effect of EGCG on ROS level in myocardial cells of mice treated by ADR

2.5 EGCG對(duì)ADR所致荷瘤小鼠心肌損傷中線(xiàn)粒體膜電位的影響

實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的變化進(jìn)行測(cè)定，Rho123的平均熒光強(qiáng)度衡量細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的水平。由圖5可知，ADR損傷組中線(xiàn)粒體膜電位較對(duì)照組顯著下降；與ADR組相比，EGCG＋ADR組中線(xiàn)粒體膜電位顯著增加。由此可知，EGCG對(duì)ADR引起的心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位下降具有減緩作用。

圖5 EGCG對(duì)ADR處理小鼠心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位（ΔΨm）的影響Fig. 5 Effect of EGCG on ΔΨmin myocardial cells of mice treated by ADR

3 討 論

ROS的產(chǎn)生在細(xì)胞線(xiàn)粒體能量代謝中是不可避免的。線(xiàn)粒體呼吸鏈?zhǔn)钱a(chǎn)生ROS的主要部位，同時(shí)其本身又是ROS氧化性損傷的主要部位[6]。ADR引起心臟損傷的主要原因被證實(shí)與過(guò)量ROS所致的氧化性損傷有關(guān)，且與線(xiàn)粒體形態(tài)功能密不可分[12]。EGCG具有調(diào)控ROS水平的功能，可以降低ROS過(guò)多而產(chǎn)生的氧化性損傷[13]。在正常生理情況下，機(jī)體內(nèi)的ROS是處在產(chǎn)生與消除基本平衡的狀態(tài)之中；而疾病及其他非正常狀態(tài)下，則由于細(xì)胞無(wú)法盡快除去過(guò)量的ROS從而導(dǎo)致發(fā)生氧化性損傷[14]。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠通過(guò)皮下注射S180腫瘤細(xì)胞懸液建立荷瘤小鼠體內(nèi)模型，研究基于活性氧調(diào)控的EGCG抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)合文獻(xiàn)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況，選用ADR劑量為2 mg/kg（以體質(zhì)量計(jì)），保證實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性和可行性。

LDH和CK的變化是判斷有無(wú)心肌損傷的兩個(gè)重要指標(biāo)。由結(jié)果可知，與對(duì)照組相比，ADR組小鼠的LDH和CK活性都顯著增加，表明心肌細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷。EGCG＋ADR組LDH和CK活性則相比于ADR組顯著降低，說(shuō)明EGCG對(duì)ADR造成的心肌損傷有顯著的保護(hù)作用。進(jìn)一步對(duì)ROS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，ADR處理確實(shí)引起ROS顯著超出正常水平的有害積累。而EGCG＋ADR組與ADR組相比，ROS積累被部分清除。MnSOD主要存在于線(xiàn)粒體，是線(xiàn)粒體中清除ROS的重要抗氧化物酶[17-18]。結(jié)果表明，ADR組的MnSOD出現(xiàn)明顯降低；與ADR組相比EGCG＋ADR組的MnSOD的活性則顯著升高。由此可知，EGCG能通過(guò)及時(shí)清除自由基反應(yīng)的啟動(dòng)因子（O2－）來(lái)抑制和阻斷其損傷機(jī)制，同時(shí)增強(qiáng)了線(xiàn)粒體的氧化防御系統(tǒng)[19]，EGCG基本可以達(dá)到保護(hù)心肌線(xiàn)粒體免受同劑量ADR誘導(dǎo)的氧化損傷的作用[20]。

線(xiàn)粒體是ROS產(chǎn)生和造成損傷的主要部位[21]。為探討EGCG對(duì)ADR引起心肌損傷的保護(hù)作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)還重點(diǎn)關(guān)注了線(xiàn)粒體膜電位的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，線(xiàn)粒體受到攻擊可導(dǎo)致質(zhì)子大量流返線(xiàn)粒體基質(zhì)，使膜內(nèi)負(fù)性減弱，致使線(xiàn)粒體膜電位降低，影響ATP合成；而線(xiàn)粒體膜電位降低不僅致使線(xiàn)粒體生物能衰竭，還會(huì)反作用于線(xiàn)粒體損傷，誘導(dǎo)線(xiàn)粒體釋放鈣離子等，同時(shí)膜電位的驟減也意味著細(xì)胞不可逆凋亡的開(kāi)始[22-24]。盡管線(xiàn)粒體膜電位崩潰的因素眾多，但氧化應(yīng)激反應(yīng)在其中發(fā)揮著舉足輕重的作用[25]。與對(duì)照組相比，ADR損傷組小鼠的ROS水平顯著升高，小鼠線(xiàn)粒體膜電位出現(xiàn)顯著降低。由此可知，ADR處理能誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)心肌線(xiàn)粒體產(chǎn)生了實(shí)質(zhì)性損傷；而EGCG＋ADR組的ROS水平呈減弱趨勢(shì)，并且減少了ADR誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體膜電位的下降，具有保護(hù)線(xiàn)粒體的作用。

綜上所述，EGCG對(duì)腫瘤細(xì)胞有顯著的誘導(dǎo)凋亡作用，從而達(dá)到抗腫瘤作用，并且與ADR一起使用能增強(qiáng)ADR的抗腫瘤作用。EGCG能抑制ADR引起心肌細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制與提高線(xiàn)粒體抗氧化防御能力、抑制ROS的產(chǎn)生、提高線(xiàn)粒體膜電位、維護(hù)線(xiàn)粒體的正常形態(tài)和生理功能有關(guān)。

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Protective Effect of Epigallocatechin-3-gallate against Antitumor-Induced Myocardial Injury

NING Jiaming1, ZHANG Yansong1, YAO Yufei2, WANG Zhe1, LI Lu1, CHEN Jiajun1, LI Wenjuan1,*
(1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China; 2. Pneumology Department of China People’s Liberation Army No.94 Hospital, Nanchang 330000, China)

Objective: To examined the antitumor effect of epigallocatechin-3-gallate (EGCG), and to investigate the protective effect and potential mechanism of EGCG against myocardial injury triggered by the anticancer drug adriamycin (ADR). Methods: A S180 tumor-bearing mice model was established and the mice were randomly divided into four groups: control, ADR, EGCG and EGCG + ADR groups. Tumor and myocardial tissues were taken for the measurement of lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK) and Mn-superoxide dismutase (Mn-SOD) activities using detection kits according to the manufacturer’s instructions. Meanwhile, apoptosis, reactive oxygen species (ROS) and mitochondrial membrane potential level were measured by fl ow cytometry. Results: Compared with the control group, both EGCG and ADR could significantly increase apoptosis of tumor cells. The combination of EGCG and ADR was superior to either treatment alone. Moreover, the combined regimen could signifi cantly reduce LDH and CK activities in myocardial tissue. Compared with ADR alone, its combination with EGCG could signifi cantly increase Mn-SOD activity in myocardial tissue, reduce the production of ROS and ameliorate the loss of mitochondrial membrane potential. Conclusion: EGCG itself had anti-tumor effect, and could synergize with ADR. In addition, EGCG had protective effect against myocardial damage caused by ADR through improving the mitochondrial antioxidant defense capacity, ameliorating oxidative stress and maintaining △Ψmhomeostasis.

tumor; adriamycin (ADR); reactive oxygen species (ROS); epigallocatechin-3-gallate (EGCG)

10.7506/spkx1002-6630-201611031

Q946.841

A

1002-6630（2016）11-0180-05

寧佳鳴, 張妍淞, 姚于飛, 等. 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)抗腫瘤所致心肌損傷的保護(hù)作用[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(11): 180-184. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611031. http://www.spkx.net.cn

NING Jiaming, ZHANG Yansong, YAO Yufei, et al. Protective effect of epigallocatechin-3-gallate against antitumorinduced myocardial injury[J]. Food Science, 2016, 37(11): 180-184. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201611031. http://www.spkx.net.cn

2015-07-21

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（31201326）；江西省科技廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目（20132B AB214001）；

江西省教育廳青年科學(xué)基金項(xiàng)目（GJJ14217）；江西省科技特派團(tuán)富民強(qiáng)縣工程項(xiàng)目

寧佳鳴（1994—），男，學(xué)士，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)與工程。E-mail：394512955@qq.com

*通信作者：李文娟（1982—），女，副教授，博士，研究方向?yàn)槭吃葱越M分生物活性、功能食品與食品安全。E-mail：liwenjuan8211@y126.com