趙揚(yáng)揚(yáng)，李春燕，郭建華2，曹　政*

（1.重慶澳龍生物制品有限公司，重慶 榮昌 402460；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460）

羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗的效果監(jiān)測(cè)

趙揚(yáng)揚(yáng)1，李春燕1，郭建華2，曹政1*

（1.重慶澳龍生物制品有限公司，重慶 榮昌 402460；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460）

為了解羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗對(duì)包蟲病防控的效果，我們?cè)谛陆车貐^(qū)進(jìn)行了持續(xù)的疫苗使用情況監(jiān)測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果顯示：疫苗免疫后ELISA抗體檢測(cè)呈陽性，2011年該地區(qū)羊棘球蚴患病率高達(dá)57%，2012～2014年患病率分別為26.0%、8.53%、4.63%；2011～2014年犬糞中棘球蚴蟲卵的檢出率從14.1%下降至7.4%。說明該疫苗對(duì)羊包蟲病的傳播起到了明顯的抑制作用。

羊；棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗；免疫效果；患病率

棘球蚴病又稱包蟲病，是人和動(dòng)物感染細(xì)粒棘球絳蟲及多房棘球絳蟲所致的寄生蟲病。多種家畜對(duì)包蟲病易感，綿羊和山羊是細(xì)粒棘球蚴最常見的中間宿主，嚴(yán)重影響我國(guó)畜牧經(jīng)濟(jì)的健康發(fā)展和人類健康［1-2］。羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗可激發(fā)羊產(chǎn)生針對(duì)細(xì)粒棘球蚴的特異性抗體，使羊獲得抵抗細(xì)粒棘球絳蟲蟲卵侵襲的能力，從而達(dá)到防控包蟲病的目的［3］。為了解該疫苗對(duì)防控包蟲病的效果，我們于2011～2014年在新疆某地區(qū)進(jìn)行了持續(xù)的疫苗使用情況監(jiān)測(cè)。

1　材料與方法

1.1試劑羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗由重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品性狀為乳白色凍干粉，用疫苗配套稀釋液稀釋，每頭份頸部皮下注射1mL。免疫后用羊棘球蚴（包蟲）病ELISA試劑盒檢測(cè)血清抗體。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)羊只：來自新疆某地區(qū)15個(gè)肉羊繁育基地，分別編號(hào)基地1～基地15。試驗(yàn)犬：來自試驗(yàn)羊群所在的地區(qū)。

1.3免疫方法2011年，對(duì)新疆某地區(qū)15個(gè)肉羊繁育基地的所有羊只（約21萬頭）進(jìn)行疫苗免疫。采用頸部皮下注射，注射劑量為每頭羊1頭份，首次免疫后間隔28 d進(jìn)行第二次免疫。在二次免疫后1個(gè)月采集血清樣品進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)，此后每隔一年免疫一次，同樣于免疫后1個(gè)月采集血清樣品進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)。

1.4抗體水平判定標(biāo)準(zhǔn)樣品OD450nm≤0.3，判為細(xì)粒棘球蚴（包蟲）病抗體陰性；樣品OD450nm＞0.3，判為細(xì)粒棘球蚴（包蟲）病抗體陽性。

1.5患病率普查2011年，在疫苗免疫前對(duì)該地區(qū)15個(gè)肉羊繁育基地的羊棘球蚴病患病率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，具體操作為：隨機(jī)抽取羊只剖解，取出完整的肝臟和肺臟，仔細(xì)檢查，發(fā)現(xiàn)小白點(diǎn)樣腫脹物和囊狀物后，沿任意中軸割開，如具備被囊壁和囊液，均記錄為該羊患棘球蚴病。隨后對(duì)該地區(qū)羊只進(jìn)行疫苗免疫，連續(xù)使用疫苗3年，于2012～2014年對(duì)羊棘球蚴患病率進(jìn)行再次普查。同時(shí)每年對(duì)犬糞中的棘球蚴蟲卵進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)犬棘球蚴感染率。

2　結(jié)果

2.1ELISA平均抗體水平檢測(cè)結(jié)果分別于羊只首次使用疫苗前，第一、二、三次免疫后1個(gè)月抽取血清，檢測(cè)血清中棘球蚴抗體水平，檢測(cè)結(jié)果見圖1～圖3。血清平均抗體水平檢測(cè)結(jié)果顯示：免疫前羊血清中抗體水平OD450nm＜0.3，血清抗體呈陰性；在第一次免疫后，血清中抗體水平明顯上升，OD450nm＞1，判定血清抗體呈陽性；第二次、第三次免疫后檢測(cè)血清抗體，OD450nm＞1，判定血清抗體呈陽性。棘球蚴患病率分別為 69.12%、65.12%、27.85%、49.75%、59.50%、53.68%、44.36%、35.48%、71.93%、67.74%、59.86%、66.34%、55.80%、64.48%、58.18%。從該地區(qū)2659頭羊中共檢出患病羊1143頭，羊棘球蚴病的平均患病率高達(dá)57%。

2.3疫苗使用后的患病率統(tǒng)計(jì)結(jié)果在疫苗推廣使用之后，分別于2012年、2013年、2014年對(duì)15個(gè)肉

圖1　第一次免疫后的ELISA平均抗體水平

圖2　第二次免疫后的ELISA平均抗體水平

圖3　第三次免疫后的ELISA平均抗體水平

2.2疫苗使用前的患病率統(tǒng)計(jì)結(jié)果2011年疫苗使用前，對(duì)15個(gè)肉羊繁育基地隨機(jī)抽取的共2 659頭羊進(jìn)行解剖，在肝臟和肺臟發(fā)現(xiàn)小白點(diǎn)樣腫脹物和囊狀物，并具備被囊壁和囊液的，均記錄為該羊患包蟲病。每個(gè)養(yǎng)殖基地的發(fā)病情況及棘球蚴患病率如圖4所示，該地區(qū)總患病率統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖5所示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，在疫苗使用前，基地1～基地15的羊羊繁育基地的羊只進(jìn)行剖檢，其患病情況及患病率結(jié)果如下：2012～2014年總檢測(cè)羊只數(shù)分別為2 940頭、2900頭、2 918頭，檢出患病羊只數(shù)分別為764頭、248頭、136頭，患病羊檢出率呈逐年下降趨勢(shì)。其中2012年患病率最高的肉羊繁育基地 9為34.9%，15個(gè)基地的平均患病率為26.0%；2013年患病率最高的肉羊繁育基地2為20.3%，15個(gè)基地的平均患病率為8.54%；2014年患病率最高的肉羊繁育基地1為 14.1%，15個(gè)基地的平均患病率為4.63%?？梢?012、2013、2014年羊棘球蚴病的患病率遠(yuǎn)低于2011年疫苗使用前的患病率（57%）。

圖4　疫苗使用前15個(gè)肉羊繁育基地的羊棘球蚴病患病率

圖5　新疆某地區(qū)羊棘球蚴病的患病率

2.42011～2014年犬棘球蚴感染率統(tǒng)計(jì)結(jié)果2011～2014年，對(duì)試驗(yàn)地區(qū)犬糞中的棘球蚴蟲卵進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖6所示。2011年從當(dāng)?shù)?5只犬中檢出有蟲卵犬12只，2012～2014年分別從89只、83只、81只犬中檢出有蟲卵犬9只、7只、6只。計(jì)算犬糞中棘球蚴蟲卵檢出率，發(fā)現(xiàn)呈逐年下降趨勢(shì)。其中2011年犬糞中棘球蚴蟲卵的檢出率為14.1%，2012～2014年犬糞中棘球蚴蟲卵的檢出率從10.1%下降至7.4%。

2.52011～2014年羊棘球蚴病患病率與犬糞中蟲卵檢出率的比較分析2011年在疫苗使用前，對(duì)該地區(qū)羊和犬的棘球蚴病患病率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，羊棘球蚴平均患病率高達(dá)57%，犬糞中蟲卵檢出率高達(dá)14.1%。2012～2014年，15個(gè)肉羊繁育基地的羊棘球蚴病的平均患病率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，而且都遠(yuǎn)低于2011年疫苗推廣前的平均患病率。犬糞中棘球蚴蟲卵的檢出率與2011年相比，也呈現(xiàn)逐年下降趨勢(shì)，從14.1%下降至7.4%，結(jié)果如圖6所示。

圖6　2011～2014年犬糞中棘球蚴蟲卵檢出率

3　結(jié)論

羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗經(jīng)過產(chǎn)業(yè)化，可大規(guī)模推廣使用。本試驗(yàn)免疫程序?yàn)椋撼醮蚊庖吆?8 d進(jìn)行二次免疫，之后每隔一年加強(qiáng)免疫一次，ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示免疫羊均產(chǎn)生了血清抗體。該疫苗用于免疫棘球蚴的中間宿主——羊，可保護(hù)羊群免受細(xì)粒棘球絳蟲幼蟲的感染，從而間接降低終末宿主通過攝食羊內(nèi)臟而感染棘球蚴的幾率，達(dá)到防控包蟲病的目的。由于羊棘球蚴的傳播途徑是羊與犬的反復(fù)感染，羊使用疫苗后棘球蚴病患病率下降，傳染源得到控制，也就降低了犬感染棘球蚴病的概率。本試驗(yàn)表明，羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，對(duì)于有效防制棘球蚴病具有明顯的效果。

［1］WangZ，Wang X.Echinococcosis in China，a review of the epidemiology of Echinococcus spp［J］.E-cohealth，2008，5（2）：115-126.

［2］鐘秀琴，楊光友.細(xì)粒棘球絳蟲Eg95疫苗的研究進(jìn)展［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，45（8）：1207-1212.

［3］張壯志，石保新，張文寶，等.綿羊包蟲病基因工程疫苗（Eg95）免疫試驗(yàn)［J］.中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2008，24 （3）：252-256.

Effect Monitoringof Hydatid Genetic Subunit Vaccine on Sheep

ZHAO Yangyang1，LI Chunyan1，GUO Jianhua2，et al.
（1.Chongqing Auleon Biologicals Co.Ltd.，Chongqing Rongchang 402460；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460，China）

In order to confirm the prophylactic effect of recombinant hydatid subunit vaccine on sheep's hydatid disease in some areas of Xinjiang，we monitored the immune antibody.The results showed that ELISA antibody test were positive after immunization，the Echinococcus prevalence rate was 57%in 2011，and was 26.0%，8.53%，4.63%respectively in 2012，2013 and 2014.The detection rate of Echinococcus ovum decreased from 14.1%to 7.4%in dog feces during 2011 to 2014.So，we thought the vaccine played a significant role in inhibition on the spread of the hydatid disease.

Sheep；Hydatid genetic subunit vaccine；Immune effect；Prevalence

S858.272.734

B

1001-8964（2016）10-0028-03

2016-07-26

重慶市農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目（cstc2015jcsfnycgzhA10002）

趙揚(yáng)揚(yáng)（1988-），男，河南開封人，碩士研究生，主要從事動(dòng)物疫病防控與分子生物學(xué)研究。

曹政，研究員，博士，從事微生物分子生物學(xué)研究。