劉少磊　楊建云　肖炳坤　黃榮清軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京100850

頂空氣相色譜法測定苯并三嗪衍生物YABQ的溶劑殘留量

劉少磊楊建云肖炳坤黃榮清
軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京100850

目的建立頂空氣相色譜法測定苯并三嗪衍生物YABQ中3種殘留溶劑含量的方法。方法采用DBWAX毛細管色譜柱（0.45mm×30mm，0.85μm），程序升溫，柱頭壓為4 psi（1 psi=6.895 kPa），進樣口溫度為200℃，F(xiàn)ID檢測器溫度為250℃，頂空進樣，平衡溫度為70℃，平衡時間為10 min，以DMSO為溶劑，檢測殘留溶劑的含量。結(jié)果丙酮、吡啶和四氫呋喃檢測限分別為0.48、0.10、1.76μg/mL，3種殘留溶劑均能有效分離，丙酮、吡啶、四氫呋喃線性關(guān)系良好（r＞0.9996），平均回收率（n=3）分別為102.22%、99.21%、97.87%，RSD分別為0.56%、1.60%、1.09%，丙酮殘留量分別為0.0676%、0.0342%、0.0833%，吡啶和四氫呋喃未檢出，殘留溶劑含量符合藥典規(guī)定。結(jié)論該方法簡便、快速、準確，可用于YABQ中殘留溶劑的含量測定。

殘留溶劑；丙酮；吡啶；四氫呋喃；氣相色譜法

腫瘤是當今社會的一大殺手，在我國腫瘤的死亡占全部死因的1/4［1］。國內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過多年研究發(fā)現(xiàn)了一種化學(xué)物質(zhì)即放射增敏劑［2］，使癌細胞對射線的敏感性增強而對機體的免疫功能、造血系統(tǒng)不會造成大的傷害［3-9］。放射增敏劑YABQ是在苯并三嗪基礎(chǔ)上改造后的一個化合物，作為一種新型放射增敏劑，與市場上已有的相比，結(jié)構(gòu)上擺脫了硝基并且母核不再是五元含氮環(huán)，大大降低毒副作用，化學(xué)結(jié)構(gòu)獨特新穎；YABQ可在短時間、低劑量射線照射下提高乏氧細胞的敏感性，又可在腫瘤乏氧區(qū)還原，增強殺傷腫瘤細胞的能力，具有雙重功效和良好治療效果［10-17］。放射增敏劑YABQ在提取過程中使用了丙酮、吡啶和四氫呋喃，因此可能殘留上述溶劑。

頂空氣相色譜法具有檢測靈敏度高、選擇性好、所需樣品量少的特點，可以滿足樣品殘留溶劑的測定要求。本研究建立了頂空氣相色譜法測定丙酮、吡啶和四氫呋喃3種殘留溶劑的方法。

1　儀器與試藥

Agilent 6820氣相色譜儀，HP7694頂空進樣器，F(xiàn)ID檢測器，Agilent DB-WAX毛細管色譜柱（30 m× 0.45 mm，0.85μm），德國sartorius（BP211D）電子天平，對照品YABQ（批號20140406，純度99.7%），YABQ原料藥（批號20140410、20140416、20140424）均由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所提供，丙酮、吡啶、四氫呋喃、二甲基亞砜（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號2014001，純度99.5%）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

Agilent DB-WAX毛細管柱（0.45 mm×30 mm，0.85μm），程序升溫，進樣口溫度：200℃，檢測器溫度：250℃，柱頭壓：4 psi（1 psi=6.895 kPa），載氣：N2，頂空氣化室溫度：70℃，平衡10 min，定量環(huán)溫度：80℃，樣品傳輸管溫度：90℃，進樣量：1.0 mL。柱溫：50℃，保持6 min，然后以35℃/min的速度升溫至200℃，保持10min。

2.2溶液配制

2.2.1對照品溶液精密稱定丙酮781.25mg于25mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，作為丙酮溶液。精密稱定吡啶31.25mg，同法處理，作為吡啶溶液。精密稱定四氫呋喃137.5mg，同法處理，作為四氫呋喃溶液。分別取其1 mL置25 mL量瓶中，加DMSO刻度，為對照儲備液。精密移取2mL對照品儲備液，置10mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。2.2.2供試品溶液取YABQ樣品（批號：20140410）100mg，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，加2.0 mL DMSO，密封，搖勻。

2.2.3空白溶液精密移取2mL的DMSO于頂空進樣瓶中作為空白溶液。

2.3方法學(xué)驗證

2.3.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗按“2.2.1”項下方法配制對照品溶液及空白溶液（溶劑DMSO），進樣，記錄色譜圖，殘留溶劑峰均能夠完全分離，且溶劑DMSO無干擾，說明系統(tǒng)適應(yīng)性良好。見圖1～2。

2.3.2檢測限堯定量限與線性范圍將對照品貯備液溶液逐級稀釋，以每種殘留溶劑信噪比（S/N）≥3作為檢測限（LOD），信噪比（S/N）≥10作為定量限（LOQ）。結(jié)果表明，3種殘留溶劑均具有良好的線性關(guān)系（r≥0.9996），滿足殘留溶劑檢測方法要求。結(jié)果見表1。精密移取對照品貯備液1.6、2、2.4、3、4、5 m L分別置10mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度超聲混勻作為標準溶液。各取2 mL置20mL頂空瓶中。進樣，以濃度（X）為橫坐標，峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸。結(jié)果見表1。

圖1　對照品溶液氣相色譜圖

圖2　空白溶劑氣相色譜圖

表1　線性范圍、檢測限和定量限（μg/m L）

2.3.3精密度試驗精密移取2mL對照品溶液置頂空進樣瓶中，加2mLDMSO，密封。連續(xù)進樣6次，計算丙酮、吡啶和四氫呋喃對照品溶液峰面積，RSD分別為0.28%、1.84%、1.25%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.4重復(fù)性試驗取YABQ樣品（批號：20140410），按“2.2.2”項下方法配制樣品溶液6份，頂空測定。結(jié)果吡啶和四氫呋喃未檢出，丙酮RSD=1.26%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5穩(wěn)定性試驗取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：20140410），分別于0、2、4、8、10、12 h時進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果吡啶和四氫呋喃未檢出，丙酮RSD= 1.75%，表明溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6回收率試驗取對照品儲備液1.6、2.0、2.4 mL分別置10 mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，配成3個濃度的待測溶液，相當于對照的80%、100%、120%。取供試品溶液（批號：20140410），分別加3個不同濃度（每個濃度3份）的待測液2 mL，頂空測定。計算時扣除原料藥中所含的殘留劑量。結(jié)果平均回收率分別為102.22%、99.21%、97.87%，RSD分別為0.56%、1.60%、1.09%，3種殘留溶劑平均回收率均在95%～105%，結(jié)果表明樣品的回收率良好。

2.4樣品的測定

按照“2.2.1、2.2.2”項下方法制備對照品及供試品溶液，頂空進樣并計算樣品中殘留溶劑的含量。3批樣品中丙酮殘留溶劑量均低于藥典標準0.5%［18］附錄63，其他殘留溶劑未檢出。見表2。

表2　樣品中殘留溶劑含量測定結(jié)果（%）

3　討論

3.1溶劑的選擇

本實驗采用DMSO作為溶劑［19］61-65。對3種殘留的溶劑的溶解和分離均良好。

3.2進樣方式的選擇

藥典規(guī)定丙酮、吡啶、THF限量為0.005%、0.002%、0.072%，采用一般的分析方法很難準確檢測。溶液直接進樣法，不僅對色譜柱有污染而且樣品基線會漂移，產(chǎn)生鼓包，頂空進樣可以避免污染色譜柱［19-20］。本研究采用頂空進樣，檢測結(jié)果顯示YABQ中殘留溶劑量符合藥典規(guī)定。

3.3頂空平衡溫度和時間的選擇

選擇了60、70、80℃頂空平衡，結(jié)果表明溫度越高峰面積響應(yīng)越大，過高溫度對儀器有一定損傷，考慮溫度和峰靈敏度，故選擇70℃；平衡時間選擇了10、20、30、40 min，結(jié)果顯示平衡時間對峰面積影響不大，故選擇10min。

綜上所述，放射敏感性是腫瘤放射治療的核心問題，如何提高敏感性是腫瘤放射治療所關(guān)注的問題，長期的臨床研究并沒有找到理想的低毒高效的放射增敏劑［21］，對物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)進行改造為其提供了一種重要思路。本研究通過對YABQ殘留溶劑的研究，成功建立了頂空氣相色譜法測定YABQ中殘留溶劑的含量，為質(zhì)量控制、制劑生產(chǎn)提供了科學(xué)保障。

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Head-space gas chrom atography determ ination of residual solvents in benzene and triazine derivatives YABQ

LIU Shaolei YANG Jianyun XIAO Bingkun HUANG Rongqing
Institute of Radiation Medicine，Academy of Military Medical Science，Beijing 100850，China

Objective To establish a head-space gas chromatography method for determination of three residual solvents in benzene and triazine derivatives YABQ.Methods DB-WAX capillary column（0.45mm×30 mm，0.85μm）and temperature program were adopted，the stigma pressure was 4 psi（1 psi=6.895 kPa），the inlet temperaturewas 200℃，the FID detector temperature was 250℃，the head-space equilibrium temperature was 70℃，the equilibrium time was 10 min，DMSO was selected as the solvent，the content of residual solventswere detected.Resu lts The results of acetone，pyridine and tetrahydrofuran detection limits were 0.48μg/mL，0.10μg/mL and 1.76μg/mL，three kinds of residual solvents could be separated，a good linear relationship（r＞0.9996）ofacetone，pyridine，tetrahydrofuran were showed，the average recoveries（n=3）were 102.22%，99.21%，97.87%，the RSD were 0.56%，1.60%，1.09%，the residual amount of acetone were 0.0676%，0.0342%，0.0833%，pyridine and tetrahydrofuran were undetected，the residual solvent content in line with the pharmacopoeia.Conclusion Themethod is simple，rapid，accurate，and can be used as a method for the determination YABQ residual solvent.

Residual solvent；Acetone；Pyridine；Tetrahydrofuran；Gas chromatography

R917

A

1673-7210（2016）06（c）-0135-03

國家自然科學(xué)基金資助項目（21375147）；國家科技重大新藥創(chuàng)制專項（2013ZX09102-016）。

劉少磊（1984-），男，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院2012級藥物分析專業(yè)在讀碩士研究生；研究方向：新藥質(zhì)量標準。

黃榮清（1965-），男，博士生導(dǎo)師；研究方向：新藥質(zhì)量標準、代謝組學(xué)。

（2016-02-12本文編輯：趙魯楓）