劉 紅，曾志杰，李傳勇，張水華，孫樂常，陳 瓊，曹敏杰，劉光明,*

（1.集美大學食品與生物工程學院，福建 廈門 361021；2.廈門市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗測試中心，福建 廈門 361009；3.福建醫(yī)科大學 福建省新藥安全性評價中心，福建 福州 350108）

4-氯苯氧乙酸鈉對小鼠的毒性及其殘留分析

劉 紅1，曾志杰2，李傳勇2，張水華3，孫樂常1，陳 瓊2，曹敏杰1，劉光明1,*

（1.集美大學食品與生物工程學院，福建 廈門 361021；2.廈門市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗測試中心，福建 廈門 361009；3.福建醫(yī)科大學 福建省新藥安全性評價中心，福建 福州 350108）

目的：探討毒豆芽中常用植物生長調(diào)節(jié)劑4-氯苯氧乙酸鈉（sodium 4-chlorophenoxyacetate，4-CPANa）對小鼠的急性、蓄積性毒性及其在小鼠機體的殘留規(guī)律。方法：采用改良寇氏法測定4-CPANa對小鼠的急性毒性；蓄積性毒性實驗以107.4 mg/kg為起始劑量，采用劑量遞增蓄積系數(shù)法染毒，觀察記錄實驗期間小鼠的一般生理指標，結(jié)束后測定小鼠血液生化指標、臟器指數(shù)、組織病理變化狀況，超高效液相色譜法測定4-CPANa在小鼠機體內(nèi)的殘留量。結(jié)果：4-CPANa對小鼠經(jīng)口半數(shù)致死劑量（LD50）為1 074.1 mg/kg，蓄積系數(shù)K＞8；4-CPANa對小鼠的生理及血液生化指標有不同程度影響，肝臟、腎臟均發(fā)生組織病理學變化；小鼠機體中4-CPANa殘留量由高到低的順序為：尿液＞腎臟＞肝臟＞血液＞心臟＞腦組織＞肌肉。結(jié)論：4-CPANa為低毒、低等蓄積性藥物，其毒性效應主要表現(xiàn)為對小鼠肝臟和腎臟的毒性作用。

4-氯苯氧乙酸鈉；急性毒性；蓄積性毒性；超高效液相色譜；毒豆芽

近年來，沈陽、長春、蘭州、北京、鄭州等地的一些黑作坊在豆芽生產(chǎn)過程中，濫用添加劑或非法使用國家明令禁止的非食用物質(zhì)，造成“毒豆芽”事件。2009年11月“毒豆芽”首次在長春曝光，2014年7月南昌搗毀4 家毒豆芽窩點，繳獲毒豆芽3余噸[1]；同年11月北京查獲一家日產(chǎn)20 t毒豆芽的窩點[2]；同年12月江門搗毀5 個毒豆芽窩點，繳獲毒豆芽及半成品7 t[3]?？梢姸寡康陌踩珕栴}歷經(jīng)多年曝光、整頓，卻始終“久治不絕”。目前毒豆芽常檢有毒有害成分主要為：2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxyacetic acid，2,4-D）、4-氯苯氧乙酸鈉（sodium 4-chlorophenoxyacetate，4-CPANa）、6-芐基腺嘌呤（6-benzylaminopurine，6-BA）、恩諾沙星、亞硝酸鹽與硝酸鹽等[4]，這些非法添加的物質(zhì)嚴重威脅著消費者的健康安全。謝寒冰[5]在豆芽添加劑殘留檢測分析中發(fā)現(xiàn)4-CPANa與6-BA為毒豆芽生產(chǎn)的主要添加劑，其中4-CPANa的合格率最低，僅為76.7%；石金娥等[6]對吉林市市售豆芽7 種植物生長調(diào)節(jié)劑的含量監(jiān)測結(jié)果顯示4-CPANa檢出率高達71.4%；楊婕等[7]對市售32 份綠豆芽樣品進行檢測，有9.4%的樣品4-CPANa的含量在1.39～3.39 mg/kg之間，嚴重超標；北京執(zhí)法人員將泡制綠豆的水、生長期的綠豆和黃豆以及成品豆芽分別取樣檢測，均檢測出4-CPANa，其含量超標20～200 倍不等[2]。由此可見，4-CPANa引起的豆芽安全問題相當嚴峻。4-CPANa是中樞神經(jīng)興奮藥甲氯芬酯的中間體，俗稱促生靈、蕃茄靈、防落素，廣泛用于農(nóng)業(yè)、果樹和園藝作物從發(fā)芽到收獲的各個階段，但在豆芽的生產(chǎn)中最為普遍，為最常添加的植物生長調(diào)節(jié)劑。4-CPANa為2,4-D的同系物以及替代藥物，可以使豆芽更加肥嫩、粗壯，提高豆芽的產(chǎn)量。豆芽在我國深受廣大消費者的喜愛，日常消費量非常大，所以人體內(nèi)4-CPANa的殘留及其對機體的毒害作用不容忽視。

目前，關于4-CPANa的急性、蓄積性毒性效應報道不夠全面，尤其是4-CPANa在臟器、血液、尿液中的殘留分析測定未見報道。關于豆芽中4-CPANa的分析方法方面，主要有薄層色譜法[8]、離子色譜法[9]、高效液相色譜法[10-11]、氣相色譜-液相色譜法[12]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[13]；關于物質(zhì)在機體的殘留規(guī)律方面，辜雪冬[14]和Massadeh[15]等分別利用高效液相色譜法測定四環(huán)素殘留量，原子吸收光譜法測定鎘和鉛兩種重金屬殘留，而利用QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）快速樣品前處理技術[16]結(jié)合超高效液相色譜（ultrahigh-performance liquid chromatography， UPLC）檢測4-CPANa殘留量的方法未見報道，本實驗以昆明小鼠為動物模型，開展4-CPANa的急性、蓄積性毒性研究，并利用QuEChERS-UPLC方法對小鼠機體的4-CPANa殘留量進行分析測定，進一步研究4-CPANa對小鼠的毒害作用，為4-CPANa毒害研究提供理論依據(jù)，以期指導4-CPANa的安全生產(chǎn)和使用，為豆芽的安全生產(chǎn)提供保障。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級健康昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，購自上海斯萊克實驗動物有限公司，動物合格證號：SCXK（滬）2012-0005。

4-CPANa藥品（純度≥98.5%） 上海士鋒公司。

Coulter LX 20全自動生化分析儀配套試劑（總蛋白（total protein，TP，E411212）、白蛋白（albumin，ALB，E411213）、球蛋白（globulin，GLB）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST，501258）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT，501254）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH，407242）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP，501236）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN，E503220）） 美國貝克曼公司；肌酐（creatinine，CREA，818RJL） 日本積水公司；蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色試劑盒 碧云天生物技術研究所；4-CPANa標準品（純度≥98.50%） 上海安譜公司；OriQuE萃取鹽包、DisQuE凈化管 美國Agilent公司。

1.2 儀器與設備

TP-202型電子天平、Sartorius BT 125D型電子天平北京賽多利斯科學儀器公司；Coulter LX20全自動生化分析儀 美國Beckman公司；RM2235石蠟切片機 德國Leica公司；55I-1000光學顯微鏡 日本Nikon公司；UPLC儀 美國Waters公司；IKA T18 Basic高速組織分散機 德國IKA公司。

1.3 方法

1.3.1 急性毒性實驗

根據(jù)預實驗結(jié)果得知，小鼠經(jīng)口灌胃4-CPANa后0%及100%死亡劑量估計值分別為800、1 600 mg/kg。正式實驗將60 只小鼠按體質(zhì)量隨機分為6 組，每組10 只，雌雄各半，灌胃前禁食12 h，不禁水。4-CPANa劑量組設為Ⅰ～Ⅴ共5 組，組間劑量比為1.41，一次性灌胃劑量從低到高依次為800、952、1 131、1 348、1 600 mg/kg，對照組灌胃蒸餾水。灌胃染毒后連續(xù)觀察7 d，記錄小鼠精神狀態(tài)、體質(zhì)量、攝食飲水、死亡等情況，7 d后所有存活小鼠停食6 h后處死。4-CPANa的LD50及LD5095%可信限按改良寇氏法計算[14]。

1.3.2 蓄積性毒性實驗

將30 只小鼠按體質(zhì)量隨機分為2 組，蓄積組20 只，對照組10 只，雌雄各半。蓄積組以107.4 mg/kg（1/10 LD50）為起始劑量，每天灌胃染毒1 次，4 d為一階段，灌胃量每階段遞增1.5 倍，直至小鼠死亡數(shù)達到總數(shù)一半，或繼續(xù)給藥直至累計劑量達到5.0 倍LD50以上為止（本研究共給藥6 個階段，即24 d）；對照組灌胃蒸餾水。計算蓄積系數(shù)K＝LD50（n）/LD50（1），并對結(jié)果進行評價，其中LD50（n）為引起受試動物半數(shù)死亡的累計劑量，LD50（1）為1 次染毒引起動物半數(shù)死亡的劑量。實驗期間觀察并記錄小鼠精神狀態(tài)、體質(zhì)量、攝食飲水、死亡等情況，實驗結(jié)束后停食6 h，眼眶取血，使用血液生化儀測定9 種生化指標。處死小鼠，進行大體解剖觀察，稱量腎臟、脾臟、肝臟、腎臟、肺和腦的質(zhì)量并計算各臟器指數(shù)（臟器質(zhì)量（mg）/活體體質(zhì)量（g）），取心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟和腦置于體積分數(shù)為10%的中性甲醛溶液中固定，常規(guī)包埋、切片、HE染色、光學顯微鏡觀察并拍照。

1.3.3 4-CPANa殘留量檢測

收集蓄積性毒性實驗中小鼠的心臟、肝臟、腎臟、腦、肌肉和血液、尿液，采用QuEChERS結(jié)合UPLC法檢測4-CPANa的殘留量。樣品經(jīng)0.01 mol/L NaOH堿液提取后，用冰乙酸溶液調(diào)至酸性（pH 2.5），再用乙腈提取，QuEChERS凈化。以甲醇和0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（體積比為35∶65）為流動相，采用ACQUITY UPLC HSS C18柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）分離，PDA檢測器在228 nm波長處檢測，外標法定量。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性實驗結(jié)果

2.1.1 4-CPANa的LD50及LD5095%可信限

由表1可知，4-CPANa在1 d內(nèi)使實驗組18 只小鼠死亡，且在1～2 d內(nèi)4-CPANa各劑量組小鼠死亡只數(shù)均高于同劑量組的其他時段，2 d后，小鼠死亡只數(shù)明顯減少，說明4-CPANa毒效在1 d內(nèi)最高，小鼠中毒程度劇烈。另外，隨著4-CPANa劑量的增大，各組小鼠死亡只數(shù)增加。

采用改良寇氏法計算4-CPANa對小鼠的LD50為1 074.1 mg/kg，LD5095%可信限為975.7～1 182.4 mg/kg。按照化合物經(jīng)口急性毒性分級標準[17-18]，4-CPANa屬于低毒化學物質(zhì)。

表1 4-CPANa對小鼠經(jīng)口急性毒性實驗結(jié)果（n＝1100）Table1 Oral acute toxicity of 4-CPANa in mice (n = 10)

2.1.2 小鼠一般生理情況

對照組小鼠在實驗期間食欲、飲水、行為正常，精神良好，活潑好動，未出現(xiàn)死亡小鼠；而4-CPANa各劑量組小鼠在實驗期間出現(xiàn)了精神萎靡、反應遲鈍、步態(tài)蹣跚、趴臥不動、呼吸困難、抽搐明顯等癥狀，且隨著4-CPANa劑量的增加，中毒表現(xiàn)愈加強烈，Ⅴ組有幾只小鼠在跳躍之后迅速死亡。

圖1 不同劑量4-CPANa對小鼠進食量（A）、進水量（B）及體質(zhì)量（C）的影響Fig.1 Effects of different 4-CPANa dosages on body weight (C), daily food consumption (A) and daily water consumption (B) of mice

由圖1A、1C可知，與對照組相比，在灌胃后1 d內(nèi)4-CPANa各劑量組小鼠進食量明顯減少，體質(zhì)量也明顯降低，這說明在此段時間里4-CPANa對小鼠毒性作用明顯，導致小鼠少食或不食，進而使小鼠體質(zhì)量下降。由圖1B可知，與對照組相比，在灌胃后1 d內(nèi)Ⅰ、Ⅱ組小鼠進水量增加但Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組小鼠進水量下降，可能是Ⅰ、Ⅱ組小鼠為了緩解藥物刺激、沖淡胃內(nèi)的藥物濃度而增加了進水量，而Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組小鼠中毒劇烈，無暇顧及4-CPANa的刺激增加飲水。另外，隨著時間的延長，2 d后各組小鼠進食量增加，進水量趨于穩(wěn)定，體質(zhì)量也開始增加，且Ⅰ組與對照組相比體質(zhì)量無明顯差別，Ⅱ組小鼠體質(zhì)量仍然明顯低于對照組，這說明藥物作用己在減退，小鼠自身狀況開始好轉(zhuǎn)。

2.2 蓄積性毒性實驗結(jié)果

2.2.1 K值的確定

蓄積性毒性實驗的劑量設計及小鼠死亡結(jié)果見表2，蓄積組小鼠直至第5、6階段才開始出現(xiàn)死亡，說明連續(xù)給藥累積量已達到致死小鼠的程度。實驗期間小鼠累計死亡2 只，死亡率10%（蓄積組小鼠共20 只），計算得K＞8.4。按照蓄積性毒性分級標準[18]，4-CPANa為低等蓄積性藥物。

表2 4-CPANa對小鼠蓄積性毒性的結(jié)果Table2 Oral accumulative toxicity of 4-CPANa in mice

2.2.2 小鼠一般生理情況

在給藥期間的前3 個階段小鼠均表現(xiàn)正常，活動自如、精神狀態(tài)正常；到第4階段時，個別小鼠精神不佳，對外界的刺激反應不靈敏、精神萎靡；到第5、6階段時，個別小鼠趴臥少動、體溫降低。

表3顯示了4-CPANa蓄積性毒性對小鼠進食量、進水量、體質(zhì)量的影響，隨著4-CPANa劑量的階段遞增，與對照組相比，蓄積組小鼠的進食量、進水量、體質(zhì)量逐漸呈現(xiàn)出顯著或極顯著變化（P＜0.05或P＜0.01），且在整個實驗期間蓄積組小鼠的平均體質(zhì)量均低于對照組，對照組小鼠的體質(zhì)量增長率為99.5%，而蓄積組僅為78.4%，說明隨著4-CPANa劑量的階段遞增，其累積作用對小鼠的毒性增大，明顯降低了小鼠的食欲，導致小鼠少食，體質(zhì)量增長下降。

表3 4-CPANa蓄積性毒性對小鼠體質(zhì)量、進食量、進水量的影響Table3 Effects of accumulative toxicity of 4-CPANa on body weight, daily food consumption and daily water consumption of mice

2.2.3 小鼠臟器解剖觀察結(jié)果及臟器指數(shù)

對照組小鼠肝臟、腎臟、心臟、脾臟、肺臟、腦組織的顏色及形狀正常。蓄積組小鼠肝臟腫大，有樹枝狀或細小長條形出血斑，部分有局灶性肝細胞壞死；腎臟腫大，被膜緊張，呈現(xiàn)深褐色；心臟腫大、出血；脾臟呈暗紅色；肺臟淤血、水腫、顏色潮紅；腦組織有不同程度萎縮。

表4顯示了4-CPANa蓄積性毒性對小鼠各臟器指數(shù)的影響，結(jié)果顯示蓄積組小鼠的肝臟指數(shù)、心臟指數(shù)極顯著高于對照組（P＜0.01），腎臟指數(shù)顯著高于對照組（P＜0.05），腦組織指數(shù)顯著低于對照組（P＜0.05）。

表4 4-CPANa蓄積性毒性對小鼠各臟器指數(shù)的影響Table4 Effect of accumulative toxicity of 4-CPANa on viscera indices of mice

2.2.4 小鼠組織病理學變化

圖2 4-CPANa蓄積毒性實驗小鼠病理組織變化（HE）Fig.2 Histopathologic lesions of mice suffering from accumulative toxicity of 4-CPANa (HE)

圖2 是對照組、蓄積組小鼠各臟器的病理組織石蠟切片圖，對照組與蓄積組小鼠肺部均可見輕微肺間質(zhì)血管擴張充血，個別肺泡腔有少許水腫液；兩組小鼠心臟、脾臟均未見明顯異常。另外，對照組小鼠肝臟除了出現(xiàn)白細胞聚集灶（自發(fā)病變，圖2A1箭頭所示）外，其余部分結(jié)構正常，對照組腎臟、腦組織未見明顯異常；蓄積組小鼠肝臟可見肝細胞變性壞死、炎細胞浸潤，蓄積組小鼠腎臟腎小管見上皮細胞變性，且有1 只雌性小鼠大腦海馬組織附近輕微出血。

2.2.5 血液生化指標

表5顯示了4-CPANa蓄積性毒性對小鼠血液生化指標的影響，結(jié)果顯示蓄積組小鼠血清TP含量極顯著低于對照組（P＜0.01），ALB含量顯著低于對照組（P＜0.05）；ALT和AST活力、BUN含量極顯著高于對照組（P＜0.01），CREA含量顯著高于對照組（P＜0.05）。

表5 4-CPANa蓄積性毒性對小鼠血液生化指標的影響Table5 Effects of accumulative toxicity of 4-CPANa on blood biochemical indices

2.2.6 小鼠機體4-CPANa殘留分析

2.2.6.1 4-CPANa的UPLC測定方法驗證

圖3 4-CPANa標準溶液的UPLLCC圖Fig.3 UPLC chromatogram of 4-CPANa

圖3 是4-CPANa標準溶液（2 mg/L）的UPLC圖，可以看出4-CPANa基本無基質(zhì)干擾，其UPLC保留時間為5.509 min。

用峰面積對4-CPANa標準溶液質(zhì)量濃度作圖并計算，按信噪比（S/N）的3 倍確定方法的檢出限（limit of detection，LOD），按S/N的10 倍確定方法的定量限（limit of quantitation，LOQ）。結(jié)果顯示，本研究建立的4-CPANa測定方法在質(zhì)量濃度為0.200～4.000 mg/kg范圍內(nèi)線性關系良好：y＝32 200x＋401（R2＝0.999 9），LOD為0.015 mg/kg，LOQ為0.050 mg/kg。

2.2.6.2 小鼠機體4-CPANa的殘留量

圖4 小鼠血液、尿液以及各種臟器和組織的UPLLCC圖Fig.4 UPLC chromatograms of 4-CPANa in blood, urine, visceral organs and tissue of mice

圖4為小鼠血液、尿液以及各種臟器和組織中4-CPANa的UPLC圖，可以看出對照組小鼠的心臟、肝臟、腎臟、腦組織、肌肉、血液、尿液中均無4-CPANa檢出，也無雜質(zhì)干擾，蓄積組小鼠的相應臟器、組織及血液、尿液樣品均在保留時間為5.509 min時有4-CPANa峰的出現(xiàn)。

小鼠機體的4-CPANa殘留量見表6，結(jié)果顯示蓄積組小鼠機體內(nèi)4-CPANa殘留量由高到低的順序為：尿液＞腎臟＞肝臟＞血液＞心臟＞腦組織＞肌肉。

表6 蓄積實驗小鼠機體的4-CPANa殘留量Table6 Residual amounts of 4-CPANa in mice in accumulative toxicity test mg/kg

3 討 論

4-CPANa是常被濫用在豆芽生產(chǎn)中的植物生長調(diào)節(jié)劑，它可以促進豆芽下胚軸粗大、減少根部萌發(fā)、加速細胞分裂。全國已有多個城市相繼曝出毒豆芽窩點，毒豆芽中4-CPANa的檢出與超標情況最為嚴重[2-7]。4-CPANa對大鼠急性經(jīng)口LD50為2 000 mg/kg（以體質(zhì)量計），對小鼠成熟精細胞有一定損傷作用[19-20]。本實驗考察了4-CPANa對小鼠的急性、蓄積性毒性，通過測定小鼠的一般生理指標、臟器指標、血液生化指標、病理切片并結(jié)合QuEChERS-UPLC檢測手段分析其在小鼠血液、尿液、各種臟器和組織的殘留情況。

急性毒性實驗結(jié)果表明：4-CPANa屬于低毒化合物，其對小鼠的經(jīng)口LD50為1 074.1 mg/kg，本研究與馮靜儀等[19]報道的4-CPANa的LD50（794 mg/kg）及黃星培等[20]報道的4-CPANa的LD50（雄性915.4 mg/kg；雌性667.5 mg/kg）的結(jié)果不一致，但與徐雪玉[21]所報道的4-CPANa的LD50（1 180 mg/kg）的結(jié)果很相近。前兩個不一致的LD50結(jié)果是分別是在1985年及1987年報道的，距目前已有近30 a，這期間動物質(zhì)量發(fā)生了很大的變化，且不同品種、級別、來源的小鼠個體差異較大，對藥物的耐受力不同[22-25]，同時LD50不是一個常數(shù)，可受多種內(nèi)外部因素的影響，結(jié)果可能存在較大差別，可達2～8 倍[26]。

蓄積性毒性實驗結(jié)果表明：4-CPANa為低等蓄積性藥物。這與黃星培等[19]報道的相符。隨著4-CPANa用藥劑量的遞增，其累積作用對小鼠的毒性增大，明顯降低了小鼠的食欲，導致小鼠少食、體質(zhì)量增長下降，并且造成小鼠血清TP、ALB含量明顯低于對照組；ALT、AST活力以及BUN、CREA含量明顯高于對照組。血清中TP和ALB含量減少，說明可能是4-CPANa攝入過量后對小鼠肝臟造成了損傷，導致肝臟合成白蛋白、清蛋白的能力明顯下降；同時ALT、AST活力升高，進一步說明肝臟損傷，使ALT、AST從受損的肝細胞中大量逸出而造成其活性明顯升高[27]，與肝臟解剖觀察結(jié)果（肝臟明顯腫大）及病理切片觀察結(jié)果（肝細胞變性壞死、炎細胞浸潤）相一致。另外，蓄積組小鼠血清BUN和CREA含量的升高說明蓄積組小鼠腎臟遭到損害，造成腎小球?qū)UN、CREA濾出減少而導致其在血清中的含量升高[27]，與腎臟解剖觀察結(jié)果（腎臟腫大）及病理切片結(jié)果（腎小管均見上皮細胞變性）一致。且這與4-CPANa攝入后在體內(nèi)代謝及殘留的規(guī)律相符：小鼠在反復接觸4-CPANa后，藥物首先通過肝臟解毒、腎臟過濾，主要以尿液的形式排出體外；但肝臟解毒、腎臟過濾能力有限，當小鼠攝入4-CPANa超過機體的代謝能力時，4-CPANa就會隨著血液進入到腦組織、肌肉中，以未解毒的形式存留在機體內(nèi)，故尿液中的4-CPANa殘留量最大，腎臟、肝臟次之，高于血液中的殘留量，血液中4-CPANa的殘留量又比腦組織、肌肉中的殘留量高。過量的4-CPANa殘留會導致機體中毒，使組織、器官、細胞受損，如石蠟組織切片觀察到蓄積組小鼠肝臟、腎臟病變。

本研究進行了24 d蓄積毒性實驗，由于在第20天才開始出現(xiàn)1 只小鼠死亡的情況，于是將實驗時間又延長了1 個階段，以考察累積的劑量是否會達到致死小鼠的閾值。對于蓄積組小鼠的肺部與對照組都出現(xiàn)相同的輕微肺間質(zhì)血管擴張充血、個別肺泡腔有少許水腫液現(xiàn)象，推測這與4-CPANa無關，可能與飼料或?qū)嶒灢僮饔嘘P。蓄積組1 只雌性小鼠的大腦海馬組織附近輕微出血，可能是小鼠個體原因，也有可能是4-CPANa對小鼠中樞神經(jīng)有毒害作用所致。有研究表明，4-CPANa是中樞神經(jīng)興奮藥甲氯芬酯的中間體，又是具有較強的神經(jīng)毒性2,4-D的同系物[28]，且蓄積組小鼠腦組織有明顯的萎縮現(xiàn)象，故4-CPANa的神經(jīng)毒性有待于進一步的深入研究。

在以后的研究中，可以基于4-CPANa的毒性及其機體殘留規(guī)律，進一步探討添加4-CPANa生產(chǎn)出的毒豆芽的毒性，進而擴大對豆芽的4-CPANa殘留監(jiān)測，結(jié)合膳食暴露情況，對毒豆芽中的添加物質(zhì)進行系統(tǒng)的風險評估，從而有效指導豆芽的安全生產(chǎn)與食用。

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Acute and Accumulative Toxicity and Detection of Residual Sodium 4-Chlorophenoxyacetate in Mice

LIU Hong1, ZENG Zhijie2, LI Chuanyong2, ZHANG Shuihua3, SUN Lechang1, CHEN Qiong2, CAO Minjie1, LIU Guangming1,*
(1. College of Food and Biological Engineering, Jimei University, Xiamen 361021, China; 2. Xiamen Agriculture Product Quality and Safety Testing Center, Xiamen 361009, China; 3. Fujian Center for Safety Evaluation of New Drug, Fujian Medical University, Fuzhou 350108, China)

Objective: To investigate acute and accumulative toxicity and residual patterns of sodium 4-chlorophenoxyacetate (4-CPANa), a plant growth regulator usually abused in poisonous bean sprouts, in mice. Methods: The oral acute toxicity of 4-CPANa in mice was determined by a modified Korbor method, and oral accumulative toxicity was assayed by an incremental exposure accumulative coefficient method with an initial dose of 107.4 mg/kg. Physiological indices of mice were recorded during the experimental period. Serum biochemical and organ indices and morphological examination of mice were carried out, and the 4-CPANa residues in mouse body were analyzed by ultrahigh-performance liquid chromatography at the end of the experiment. Results: The half-lethal dose (LD50) of 4-CPANa to mice was 1 074.1 mg/kg and the accumulative coefficient K was larger than 8. Compared with the control group, 4-CPANa showed different influence on physiological and serum biochemical indices in mice. Furthermore, 4-CPANa also resulted in visible lesions and significant histopathological changes in the liver and kidney of mice. The 4-CPANa residue in mice was observed in the following decreasing order: urine > kidney > liver > blood > heart > brain > muscle. Conclusion: 4-CPANa was classified as the 4thlevel of toxicity and belonged to the low-accumulation family. The toxic effect of 4-CPANa toward mice was mainly exhibited as lesions in liver and kidney.

sodium 4-chlorophenoxyacetate; acute toxicity; accumulative toxicity; ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC); poisonous bean sprout

10.7506/spkx1002-6630-201603036

S481.1；TS201.6

A

1002-6630（2016）03-0197-08

劉紅, 曾志杰, 李傳勇, 等. 4-氯苯氧乙酸鈉對小鼠的毒性及其殘留分析[J]. 食品科學, 2016, 37(3): 197-204. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201603036. http://www.spkx.net.cn

LIU Hong, ZENG Zhijie, LI Chuanyong, et al. Acute and accumulative toxicity and detection of residual sodium 4-chlorophenoxyacetate in mice[J]. Food Science, 2016, 37(3): 197-204. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201603036. http://www.spkx.net.cn

2015-04-24

國家自然科學基金重點項目（U1405214）；國家自然科學基金面上項目（31171660）；廈門市科技局基金項目（3502z20132010）

劉紅（1989—），女，碩士研究生，研究方向為食品質(zhì)量安全檢測。E-mail：liuhonghappily@qq.com

*通信作者：劉光明（1972—），男，教授，博士，研究方向為食品加工與安全。E-mail：gmliu@jmu.edu.cn