董渠龍，侯海燕，陳俊，高秀霞，陳亞瓊

·論著·

五味子乙素降低苯并芘對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞毒性作用的體外研究

董渠龍#，侯海燕#，陳俊，高秀霞，陳亞瓊

目的：探索苯并芘［Benzo（a）pyrene，BaP］是否對(duì)人早孕胎盤(pán)絨毛膜外滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo具有毒性作用以及五味子乙素（Schisandrin B，Sch B）是否可以降低BaP的毒性作用。方法：以HTR-8/SVneo細(xì)胞為載體，構(gòu)建BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的染毒模型和Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的保護(hù)模型，利用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的BaP單獨(dú)給藥和Sch B聯(lián)合BaP給藥對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果：0.01，0.1μmol/L濃度的BaP并不抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖（P＞0.05），而1，10，100μmol/L濃度的BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖有抑制作用（P＜0.05）且隨著其作用時(shí)間（6，12，24，36和48 h）的延長(zhǎng)而增大，但作用24 h后其抑制作用趨于平衡，通過(guò)繪制HTR-8/ SVneo細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)發(fā)現(xiàn)，20μmol/L的BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞作用24 h后的抑制作用最佳，其抑制率達(dá)到24.95%；0.01，0.1，1μmol/L濃度的Sch B并未抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖（P＞0.05），高于10μmol/L的Sch B抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖（P＜0.05）。0.25，0.5，1，2μmol/L的Sch B可以降低BaP的毒性作用且對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞沒(méi)有毒性作用，且其保護(hù)作用隨著濃度增加而增大（P＜0.05），其中2μmol/L的Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的保護(hù)作用最強(qiáng)，保護(hù)率達(dá)到17.84%。結(jié)論：BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞具有毒性作用，而一定濃度范圍內(nèi)的Sch B可以有效地降低BaP的這種毒性作用。

苯并芘；五味子素；五味子乙素；滋養(yǎng)層；滋養(yǎng)層細(xì)胞；比色法

苯并芘［Benzo（a）pyrene，BaP］是多環(huán)芳烴類(lèi)化合物（polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）的一種，其廣泛存在于空氣、水源和食物中［1-2］。BaP因具有強(qiáng)烈的致畸、致癌性被學(xué)術(shù)界公認(rèn)為環(huán)境毒物［3］。隨著研究的深入，近年的一些研究表明BaP還具有生殖毒性［4］。文獻(xiàn)報(bào)道，BaP不僅可以誘導(dǎo)小鼠卵細(xì)胞及卵丘細(xì)胞出現(xiàn)明顯的DNA損傷，從而降低小鼠的生殖能力［5］，還可以嚴(yán)重影響移植前小鼠胚胎的發(fā)育、干擾胚胎DNA的穩(wěn)定性以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［6］。研究證實(shí)，BaP可以在小鼠滋養(yǎng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)中抑制其增殖［7］，從而影響胎盤(pán)發(fā)育和胎兒生長(zhǎng)。滋養(yǎng)細(xì)胞是妊娠中極為重要的一種細(xì)胞，其在胚胎植入、胎盤(pán)發(fā)育及母胎血液的交換中發(fā)揮重要作用，直接影響胚胎及胎兒的正常發(fā)育。BaP對(duì)人類(lèi)滋養(yǎng)細(xì)胞是否具有毒性作用尚無(wú)報(bào)道，但上述研究提示BaP很可能對(duì)人滋養(yǎng)細(xì)胞有損傷作用，從而對(duì)人類(lèi)產(chǎn)生生殖毒性，這也許是BaP可以引起胎盤(pán)功能不良、流產(chǎn)、胚胎停育、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局的機(jī)制之一［8-10］。驗(yàn)證BaP是否對(duì)人類(lèi)滋養(yǎng)細(xì)胞具有毒性作用對(duì)于闡明BaP的生殖毒性具有重要意義，因此本研究以人類(lèi)滋養(yǎng)細(xì)胞HTR-8/SVneo細(xì)胞為模型，進(jìn)行體外試驗(yàn)研究，探討B(tài)aP對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞是否有損傷作用。

傳統(tǒng)中藥五子衍宗丸可以促進(jìn)人類(lèi)生育力，五味子乙素（Schisandrin B，Sch B）是其君藥五味子的主要成分。研究表明，Sch B可以通過(guò)激活超氧化物歧化酶、谷胱甘肽等重要的抗氧化酶來(lái)抵抗機(jī)體的氧化應(yīng)激并抑制細(xì)胞的凋亡［11］。同時(shí)，多項(xiàng)研究表明Sch B還可以激活Nrf2-ARE信號(hào)通路［12-14］，而該通路的激活以及隨后的血紅素加氧酶、醌氧化還原酶表達(dá)可以降低BaP對(duì)角質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的損傷［15］。

本試驗(yàn)旨在探討B(tài)aP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞是否有直接的損傷作用，同時(shí)也探討Sch B是否可以降低BaP引起的細(xì)胞損傷，這對(duì)于闡明BaP的生殖毒性和Sch B是否具有預(yù)防及治療BaP引起的生殖毒性具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 研究材料HTR-8/SVneo細(xì)胞株由加拿大Graham CH教授惠贈(zèng)并經(jīng)過(guò)相關(guān)認(rèn)證，BaP（美國(guó)Sigma公司），Sch B（中國(guó)藥品生物制品檢定所），RPMI1640培養(yǎng)基（美國(guó)GIBCO公司），胎牛血清（美國(guó)GIBCO公司），胰蛋白酶（北京索萊寶生物科技公司），二甲基亞砜（DMSO，美國(guó)Sigma公司），MTS細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（Promega北京生物技術(shù)有限公司），HERAcell細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司），IX71倒置顯微鏡（日本OLYMPUS公司），SW-CJ-1F無(wú)菌超凈工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)公司），移液器（德國(guó)Eppendorf公司），imark酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)HTR-8/SVneo細(xì)胞接種于規(guī)格為10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，給予RPMI1640完全培養(yǎng)基7mL后置于37℃、含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況適時(shí)進(jìn)行換液、傳代、凍存及MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。

1.3 MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

1.3.1 MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)收集消化的細(xì)胞制成單細(xì)胞懸浮溶液，將細(xì)胞接種于96孔板中（每孔接種8 000個(gè)細(xì)胞），培養(yǎng)24 h后分組將RPMI1640完全培養(yǎng)基更替為0.01～1 000μmol/L的BaP溶液進(jìn)行加藥處理，同時(shí)以0.1%DMSO溶液作為對(duì)照組，每組5個(gè)孔。繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后（分批次培養(yǎng)6，12，24，36，48 h），加入20μLMTS溶劑+100μLRPMI1640完全培養(yǎng)基混合溶液于37℃下作用2 h，利用酶標(biāo)儀在492 nm波長(zhǎng)處測(cè)出每孔的OD值。

1.3.2 MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖效應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法如上述，不同之處在于加藥組為0.01～1 000μmol/L的Sch B溶液。

1.3.3 MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Sch B聯(lián)合BaP給藥對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖效應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法如上述，不同之處在于加藥組為Sch B聯(lián)合BaP溶液。

1.4 結(jié)果計(jì)算根據(jù)各組所測(cè)OD值計(jì)算BaP對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞的損傷率和Sch B的保護(hù)率。計(jì)算公式如下：

保護(hù)率（%）=（實(shí)驗(yàn)組平均OD值－對(duì)照組平均OD值）/對(duì)照組平均OD值×100%

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)中各數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。經(jīng)檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)均滿(mǎn)足正態(tài)性和方差齊性的特點(diǎn)，故采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差別采用LSD法進(jìn)行檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Graphpad軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行制圖。

2 結(jié)果

2.1 BaP抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖探索0.01～1 000μmol/L范圍內(nèi)不同濃度的BaP作用HTR-8/SVneo細(xì)胞24 h后的細(xì)胞增殖情況如圖1所示，其中0.01、0.1μmol/L濃度的BaP對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響（P＞0.05），1，10，100，1 000μmol/L濃度的BaP均抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖，其細(xì)胞增殖率分別是對(duì)照組的92.06%、84.71%、93.75%、93.86%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此可知，1，10，100μmol/L濃度的BaP對(duì)HTR-8/SVneo增殖的抑制作用最明顯，故接下來(lái)在此范圍內(nèi)探索BaP的最佳染毒濃度。

圖1 各濃度BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響

2.2 不同濃度BaP在不同的作用時(shí)間對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞的影響確定BaP抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的最佳濃度在1～100μmol/L范圍內(nèi)后，對(duì)該范圍內(nèi)的各BaP濃度分別作用HTR-8/SVneo細(xì)胞6，12，24，36和48 h后進(jìn)行MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，繪成細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖2（見(jiàn)封三）。從圖中可以看出，BaP濃度為1，2.5，5，10，20μmol/L時(shí)，其對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞增殖的抑制作用隨著濃度的增加而增加，BaP濃度為20，40，100μmol/L時(shí)則相反，其中，20μmol/L BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的抑制作用最強(qiáng)，其作用HTR-8/SVneo細(xì)胞24 h時(shí)抑制率達(dá)到24.95%。另外，各濃度BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的抑制作用隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，但是作用24 h后抑制強(qiáng)度減弱，趨于平衡。

2.3 Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響探索0.01～1 000μmol/L范圍內(nèi)不同濃度的Sch B作用HTR-8/SVneo細(xì)胞24 h后的細(xì)胞增殖情況，見(jiàn)圖3。0.01，0.1，1μmol/L濃度的Sch B并未抑制HTR-8/ SVneo細(xì)胞的增殖（P＞0.05），其中1μmol/L濃度的Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞有輕微的促增殖作用，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；10，100，1 000μmol/L濃度的Sch B則均抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖，其細(xì)胞增殖率分別是對(duì)照組的95.71%、90.02%、81.75%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

從圖3中不難發(fā)現(xiàn)，0.1、1、10μmol/L濃度范圍內(nèi)的Sch B中存在著具有潛在的保護(hù)作用，故研究0.1～10μmol/L濃度范圍的Sch B作用HTR-8/SVneo細(xì)胞24 h后的細(xì)胞增殖情況，結(jié)果如圖4所示：0.1 μmol/L濃度的Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響（P＞0.05）；0.25，0.5，1，2，5μmol/L濃度的Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞有輕微的促增殖作用，且在0.25～2μmol/L濃度范圍內(nèi)其促增殖作用隨著劑量增加而輕微增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；10μmol/L濃度的Sch B則抑制了HTR-8/ SVneo細(xì)胞的增殖，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖3 各濃度Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響

圖4 確定最佳濃度后的各濃度Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響

2.4 Sch B降低了BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的毒性作用各濃度的Sch B和20μmol/LBaP聯(lián)合給藥作用HTR-8/SVneo細(xì)胞24 h后，與正常對(duì)照組相比，各組的細(xì)胞增殖則受到了不同程度的抑制，但是與BaP單獨(dú)給藥組相比，濃度為0.25，0.5，1，2，5 μmol/L的Sch B聯(lián)合BaP給藥組則促進(jìn)了HTR-8/ SVneo細(xì)胞的增殖，即降低了BaP的毒性作用，且在此濃度范圍內(nèi)其抑制BaP毒性作用隨著劑量增加而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。10μmol/L的Sch B聯(lián)合BaP給藥組則增強(qiáng)了BaP對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞增殖的抑制作用（P＜0.05），見(jiàn)圖5。進(jìn)一步分析各濃度Sch B對(duì)抗BaP從而保護(hù)HTR-8/ SVneo細(xì)胞的效率可以發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)BaP給藥組相比，0.1，0.25，0.5，1，2，5μmol/L的Sch B聯(lián)合BaP給藥組的細(xì)胞保護(hù)率分別為0.94%、2.60%、7.81%、12.05%、17.84%、2.63%；10μmol/L的Sch B聯(lián)合BaP給藥組則進(jìn)一步抑制了細(xì)胞的增殖，其細(xì)胞增殖率為BaP單獨(dú)給藥組的96.43%。

圖5 各濃度Sch B聯(lián)合BaP給藥對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響

3 討論

滋養(yǎng)細(xì)胞是妊娠中極為重要的一種細(xì)胞，其直接參與胚胎植入、胎盤(pán)形成及母血交換等過(guò)程，其功能異常往往引起流產(chǎn)、胚胎停育、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。研究證實(shí)，BaP可以抑制小鼠滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖，從而影響小鼠的胎盤(pán)發(fā)育及胎兒生長(zhǎng)［7］。Pratt等［16］的研究發(fā)現(xiàn)吸煙女性的絨毛膜細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞及合體滋養(yǎng)層細(xì)胞的二羥環(huán)氧BaP（BPDE）-DNA加合物的含量明顯高于不吸煙者，而Lee等［17］研究表明BPDEDNA加合物可以產(chǎn)生生物毒性，這提示BaP很可能能夠?qū)θ俗甜B(yǎng)細(xì)胞造成損害，從而對(duì)人類(lèi)產(chǎn)生生殖毒性。本研究利用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.01，0.1 μmol/L的BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖不產(chǎn)生抑制作用，但是1，10，100，1 000μmol/L濃度的BaP均不同程度地抑制了HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖，且毒性作用在1～100μmol/L濃度范圍內(nèi)最強(qiáng)。為了更加明確BaP的毒性作用，我們將BaP濃度細(xì)分為1，2.5，5，10，20，40，100μmol/L共7個(gè)濃度梯度，并分批次地作用于HTR-8/SVneo細(xì)胞6，12，24，36，48 h，以觀察HTR-8/SVneo細(xì)胞在不同濃度梯度的BaP不同作用時(shí)間下的細(xì)胞增殖情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1～100 μmol/L濃度范圍內(nèi)的BaP在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞均有抑制作用，其抑制作用在1，2.5，5，10，20μmol/L濃度范圍內(nèi)隨著B(niǎo)aP濃度的增加而增加，在20，40，100μmol/L濃度范圍內(nèi)則相反，且各濃度的BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的毒性都是隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，但是作用24 h毒性最明顯，之后趨于“飽和”狀態(tài)。因此，本研究明確了BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的毒性作用，我們的前期研究發(fā)現(xiàn)孕早期胚胎停育的母親外周血中BPDE-DNA含量較高［18］，這一作用的明確也許可以解釋BaP為什么可以引起胎盤(pán)功能不良、流產(chǎn)、胚胎停育、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局［8-10，19］。需要注意的是，BaP對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞的毒性作用并不是隨著B(niǎo)aP的濃度增加而一味地增加，而是在20μmol/L這個(gè)濃度處達(dá)到了最大，這可能與本研究中發(fā)現(xiàn)過(guò)高濃度的BaP易形成結(jié)晶，從而降低了BaP的毒性有關(guān)。該濃度對(duì)細(xì)胞的損傷程度與章艷燕等［20］的研究相吻合，且該研究也以20μmol/L的BaP作為染毒劑量，這加強(qiáng)了本實(shí)驗(yàn)的可靠性。

本研究又進(jìn)一步探索了Sch B是否具有對(duì)抗BaP毒性從而保護(hù)HTR-8/SVneo細(xì)胞的作用，首先利用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Sch B本身對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞是否具有毒性作用。研究結(jié)果提示，0.01～1μmol/L濃度的Sch B并未抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖，0.25，0.5，1，2，5μmol/L濃度的Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞還有輕微的促增殖作用，且在0.25，0.5，1，2μmol/L濃度范圍內(nèi)其促增殖作用隨著劑量增加而輕微增加，但是10，100，1 000μmol/L濃度的Sch B則抑制HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖，即產(chǎn)生了細(xì)胞毒性，這說(shuō)明適量濃度范圍內(nèi)的Sch B（≤5 μmol/L）不會(huì)對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。之后將0.1～10μmol/L濃度Sch B與20μmol/LBaP共同培養(yǎng)24 h，之所以選擇20μmol/LBaP濃度并作用24 h是因?yàn)榍笆鰧?shí)驗(yàn)證實(shí)該濃度及該作用時(shí)間具有最佳的毒性效率，適合探索Sch B的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，濃度為0.25，0.5，1，2，5μmol/L的Sch B聯(lián)合BaP給藥組則促進(jìn)了HTR-8/SVneo細(xì)胞的增殖，即降低了BaP的毒性作用，且在此濃度范圍內(nèi)其抑制BaP毒性作用隨著劑量增加而增加，但10μmol/L的Sch B聯(lián)合BaP給藥組則增強(qiáng)了BaP的毒性作用，這可能與10μmol/L的Sch B本身就具有細(xì)胞毒性有關(guān)，當(dāng)然這種猜測(cè)還有待于進(jìn)一步證實(shí)。進(jìn)一步的分析發(fā)現(xiàn)，0.1，0.25，0.5，1，2，5μmol/L的Sch B對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的保護(hù)率分別為0.94%、2.60%、7.81%、12.05%、17.84%和2.63%，保護(hù)效果明確有效。

至于Sch B如何對(duì)抗BaP從而保護(hù)HTR-8/ SVneo細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)尚未明確。但是，從以前的研究中可以推測(cè)，這可能與Sch B減輕BaP對(duì)HTR-8/ SVneo細(xì)胞的氧化損傷、DNA損傷有關(guān)［21-23］，具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

綜上，本研究證實(shí)了BaP對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞的毒性作用，也證實(shí)了一定濃度范圍內(nèi)的Sch B可以降低BaP的毒性作用，這對(duì)于闡明BaP的生殖毒性具有重要作用，同時(shí)也為預(yù)防或者逆轉(zhuǎn)這一毒性開(kāi)辟了一條新的道路。希望未來(lái)有更深入的機(jī)制研究可以闡明BaP的毒性機(jī)制和Sch B的保護(hù)機(jī)制，也相信在不久的將來(lái)可以開(kāi)發(fā)出相關(guān)藥物保護(hù)和促進(jìn)人類(lèi)生殖健康，為改善不良妊娠結(jié)局作出相應(yīng)貢獻(xiàn)。

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［本文編輯王昕］

Schisandrin B Attenuating Benzo（a）pyrene-induced HTR-8/SVneo Cells Damage In Vitro

DONG Qu-long，HOU Hai-

yan，CHEN Jun，GAOXiu-xia，CHEN Ya-qiong.DepartmentofObstetricsand Gynecology，Affiliated HospitalofMedicalCollege of Chinese People′sArmed Police Forces，Tianjin 300162，China（DONGQu-long，HOUHai-yan，CHEN Jun，GAOXiu-xia，CHEN Ya-qiong）；Chinese Academy ofMedicalSciences&Peking Union MedicalCollege，Beijing 100730，China（HOUHai-yan）

CHENYa-qiong，E-mail：chenyq82@hotmail.com

Objective:To investigatewhether administering ofbenzo（a）pyrene（BaP）and schisandrin B（Sch B）to human trophoblast HTR-8/SVneo cells has cytotoxicity and cytoprotection，respectively.Methods:By HTR-8/SVneo cells culture in vitro，MTS cell proliferation assay was performed to detect the effectof different concentration of BaP-alone，Sch B-alone and Sch B combiningwith BaP treatmenton cell proliferation.Results:0.01 and 0.1μmol/LBaP did not inhibitHTR-8/SVneo cell proliferation（P＞0.05），but1，10 and 100μmol/LBaPall inhibited HTR-8/SVneo cellproliferation（P＜0.05）.The inhibition rate were presented to be escalated accompanied by escalating BaP time exposure（6，12，24，36 and 48 h），and 24 h BaP

Benzo（a）pyrene；Schizandrin；Schizandrin B；Trophoblast；Trophoblastcell；Colorimetry（JInt Obstet Gynecol，2016，43：585-589，封三）

國(guó)家自然科學(xué)基金（81273977）

300162天津，中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科（董渠龍，侯海燕，陳俊，高秀霞，陳亞瓊）；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院（侯海燕）

陳亞瓊，E-mail：chenyq82@hotmail.com

2016-02-26）

#共同第一作者exposure were presented to be a saturation，especially for 20μmol/L BaP with 24 h exposure which presented a suitable inhibition rate（24.95%）.Besides，0.01，0.1 and 1μmol/LSch B did not inhibitHTR-8/SVneo cell proliferation（P＞0.05），but the levelof SchB higher than 10μmol/L inhibited HTR-8/SVneo cellproliferation（P＜0.05）.0.25，0.5，1 and 2μmol/LSch B all attenuated the cytotoxicity induced by BaP in HTR-8/SVneo cellswith a dose-effect relationship，especially for 2μmol/L Sch Bwhich presented a highestprotection rate（17.84%）.Conclusions:BaP can directly induce cytotoxicity in HTR-8/SVneo cells，while certain Sch B can attenuate the cytotoxicity.